老年性皮肤瘙痒T淋巴细胞因子平衡及安肤止痒湿敷方的疗效

刘春保

(三亚市中医院，海南 三亚 72000)

老年人体内固有水分和细胞中的水分减少，可引发皮肤干燥、皱纹增加，易导致局部或全身性的皮肤瘙痒〔1〕。目前对老年性皮肤瘙痒的发病机制尚未明确，导致缺乏有效的治疗方案。相关研究认为，免疫系统异常特别是T淋巴细胞因子失衡参与了其发病过程〔2〕。淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1、细胞间黏附分子(ICAM)-1分属于细胞黏附分子中的整合素家族、免疫球蛋白超家族，可调控多种炎症介质和细胞因子的分泌〔3〕。老年性皮肤瘙痒在中医理论中属“痒风”、“风瘙痒”范畴，由风湿、燥热、血虚等因素引发〔4〕；西医常用抗组胺或激素类药物治疗，但患者耐受性差且停药后易复发〔5〕。本研究探讨老年性皮肤瘙痒症患者体内T淋巴细胞因子变化及相关机制，分析安肤止痒湿敷方对T淋巴细胞因子平衡的影响。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2016年1月至2017年6月三亚市中医院收治老年性皮肤瘙痒患者96例为研究组。均符合以下条件：①年龄≥60岁，符合《中国临床皮肤病学》老年性皮肤瘙痒症的诊断标准；②近1个月未接受皮质类激素、免疫抑制剂治疗；③认知功能正常；④排除合并恶性肿瘤、肝肾功能障碍、严重感染、治疗药物过敏者。根据患者住院号的奇偶数分为治疗A组和治疗B组；治疗A组49例，其中男29例，女20例；年龄60～76岁，平均(68.53±7.15)岁；病程4个月至7年，平均(2.95±1.78)年。治疗B组47例，其中男29例，女18例；年龄60～78岁，平均(69.16±8.59)岁；病程5个月至7年，平均(3.05±1.92)年。另收集同期在我院查体健康老年人50名为对照组，其中男31名，女19名；年龄60～77岁，平均(69.02±6.38)岁。各组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会审批，受试者均签署知情同意书。

1.2主要试剂 DMEM细胞培养基，胎牛血清购于上海杰美基因医药科技有限公司；人淋巴细胞分离液，植物血凝素(PHA)购于上海翊圣生物科技有限公司；Trizol试剂，逆转录试剂盒购于宝日医生物技术有限公司；小鼠抗人LFA-1、ICAM-1单克隆抗体购于北京盛世中方生物科技有限公司。

1.3治疗方案和症状评分 治疗A组口服氯雷他定(深圳信立泰药业股份有限公司，国药准字H20020092)，10 mg/次，1次/d；治疗B组在A组基础上加用安肤止痒湿敷方，组方：胡麻仁、火麻仁、桃仁、甘草、沙苑蒺藜、艾叶、生姜各30 g，粉碎后每次取10 g外用，2次/d。两组均连续治疗1个月。采用改良的瘙痒症状评分表评估症状，总分0～9分，其中瘙痒程度(0～4分)、部位(0～2分)、频率(0～3)得分越高反映症状越严重。

1.4外周血单个核细胞分离 抽取研究组与对照组外周静脉血5 ml，放于肝素预处理的离心管中，加5 ml淋巴细胞分离液，2 000 r/min离心30 min，取外周血单个核细胞层，D-Hank洗涤3次，2 000 r/min离心5 min，用含10%胎牛血清的DMEM细胞培养液调整细胞浓度为2×106/ml。

1.5细胞因子诱导与检测 DMEM配置浓度为500 μg/ml的PHA，向96孔板中每孔分别加入外周血单个核细胞悬液和PHA溶液各300 μl，细胞终浓度为1×106/ml，PHA溶液终浓度为250 μg/ml，37℃ 5%CO2培养箱中静置48 h，收集上清液，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测T淋巴细胞因子〔白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、干扰素(IFN)-γ〕水平，操作按试剂盒说明进行。

1.6RT-PCR法检测外周血单个核细胞中LFA-1、ICAM-1 mRNA表达 Trizol法提取研究组与对照组外周血单个核细胞总RNA，分光光度法测定浓度，逆转录试剂盒获得cDNA。引物由上海羽朵生物科技有限公司合成，反应体系30 μl，反应条件：94℃ 10 min，94℃ 5 min，56℃ 50 s，72℃ 1 min，共40个循环。扩增产物行琼脂糖凝胶电泳，扫描得到目标条带灰度值，以β-actin为内参计算LFA-1、ICAM-1 mRNA的相对表达量。

1.7Western印迹法检测外周血单个核细胞中LFA-1、ICAM-1蛋白表达 RIPA试剂盒提取外周血单个核细胞总蛋白50 g，聚氰基丙烯酪正丁酯(BCA)法测定蛋白浓度，行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳，转膜到聚偏氟乙烯(PVDF)膜，封闭2 h，分别滴加小鼠抗人LFA-1、ICAM-1一抗(1∶500稀释)，鼠源性β-actin单抗(1∶1 000)为内参，4℃孵育过夜，滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗，孵育4 h，电化学发光(ECL)显色，显影、采集图像，分析各条带灰度值。

1.8统计学分析 使用SPSS17.0软件进行t检验、Pearson分析。

2 结 果

2.1治疗前研究组与对照组T淋巴细胞因子比较 治疗前研究组外周血单个核细胞中IL-2、IFN-γ水平明显高于对照组，IL-4、IL-10水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 治疗前两组外周血单个核细胞中T淋巴细胞因子水平比较

与对照组比较：1)P<0.05

2.2治疗前研究组与对照组LFA-1、ICAM-1 mRNA和蛋白表达情况 研究组LFA-1、ICAM-1 mRNA相对表达量分别为2.51±0.95、2.18±0.72，对照组分别为1.15±0.43、1.02±0.30；研究组LFA-1、ICAM-1蛋白相对表达量分别5.82±1.90、5.39±1.62，对照组分别为3.18±0.73、2.85±0.69。研究组LFA-1、ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

2.3治疗前研究组皮肤瘙痒症状评分与T淋巴细胞因子的相关性 研究组治疗前皮肤瘙痒症状评分(5.37±2.85)分，Pearson分析显示，IL-2、IFN-γ与症状评分呈正相关(r=0.423、0.526，均P<0.05)；IL-4与症状评分呈负相关(r=-0.332，P<0.05)；IL-10与症状评分无相关性(r=-0.062，P>0.05)。

2.4不同治疗组T淋巴细胞因子比较 治疗后1个月，两组IL-2、IFN-γ水平明显低于治疗前，IL-4、IL-10水平明显高于治疗前(P<0.05)；且治疗B组改善程度明显优于治疗A组(P<0.05)，见表2。

图1 两组LFA-1、ICAM-1蛋白电泳条带

组别n时间IL-2IFN-γIL-4IL-10治疗A组49治疗前24.98±4.8219.11±4.437.85±3.558.72±3.91治疗后1个月21.42±4.211)15.63±3.681)10.17±3.241)10.26±2.881)治疗B组47治疗前25.32±5.7619.03±4.767.89±3.768.85±4.43治疗后1个月13.78±4.461)2)9.12±3.151)2)15.29±3.321)2)12.33±3.211)2)

与治疗前比较：1)P<0.05；与治疗A组比较：2)P<0.05

3 讨 论

老年性皮肤瘙痒症的发病机制仍未明确，目前认为体内免疫系统异常，特别是T淋巴细胞因子失衡可能参与其发病过程。根据活化后分泌的细胞因子和生理功能可将T淋巴细胞分为Th1和Th2两个亚群，其中Th1包括IL-2、IFN-γ等，Th2包括IL-4、IL-10等。相关研究发现，Th1、Th2平滑失调与多种疾病的发生、发展有关〔6〕。细胞黏附分子是体内具有重要生理活性的跨膜糖蛋白，其中LFA-1表达于白细胞表面，ICAM-1分布于外周血白细胞、巨噬细胞等多种组织细胞表面，二者表达水平可调控多种炎症介质和细胞因子的分泌〔7〕。本研究结果提示老年性皮肤瘙痒患者存在T淋巴细胞因子失衡，表现为Th1功能亢进、Th2功能下降，且与疾病发展有关。进一步分析发生机制提示LFA-1、ICAM-1表达上调可能介导了T淋巴细胞因子失衡，参与老年性皮肤瘙痒的发生、发展。

老年性皮肤瘙痒的临床治疗以口服抗组胺类药和激素类外用软膏为主，不良反应明显且耐受性差。中医理论中将其归为“痒风”范畴，中药外用方剂可有效止痒，辅助治疗效果明显。安肤止痒湿敷方具有收敛、消炎、镇痛、止痒的功效，还能够提升对组胺的致痒阈，可用于老年性皮肤瘙痒的辅助治疗。本研究结果提示安肤止痒湿敷方有助于纠正患者T淋巴细胞因子失衡，达到治疗目的。