11种杀菌剂对梨树黑斑病菌的室内毒力测定

曹素芳，王 玮，赵明新，曹 刚，李红旭

（甘肃省农业科学院林果花卉研究所，甘肃 兰州 730070）

梨是世界和我国的重要水果之一，在我国的栽培面积仅次于苹果[1-2]。由互隔交链孢（Alternaria alternata）引起的梨黑斑病是梨主产区危害严重的主要病害之一[3-4]，导致梨叶与果实产生黑斑症状及早期落叶，对梨树体健康构成严重威胁。该病在甘肃省各地均有发生，尤其在天水秦州区普遍发生，严重影响了梨的产量与品质，已成为制约当地梨产业发展的主要因素之一。

目前，生产上防治梨黑斑病主要依靠化学药剂。为了减少果农在农田用药时的盲目性，有效降低梨黑斑病菌的侵染概率，减少因该病害造成的经济损失，我们对近年来生产上应用比较多的11种杀菌剂在室内采用菌丝生长速率法对梨黑斑病菌进行了毒力测定，以期筛选出对黑斑病菌高效低毒的杀菌剂，为生产上科学合理用药和病害的有效控制提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

病菌分离自天水市秦州区梨园发病严重且症状典型的梨树黑斑病病斑，根据菌落特征和病菌显微镜检确认为梨树黑斑病菌，试验前将菌种转接到PDA平板进行培养待用。

1.2 供试药剂

10%苯醚甲环唑乳油（中国农科院植保所廊坊农药中试厂），20%丙环唑乳油（中国农科院植保所廊坊农药中试厂），40%氟硅唑乳油（美国杜邦公司产品），25%戊唑醇乳油（浙江永农化工有限公司），1.5%噻霉酮乳油（陕西西大华特科技有限公司），50%多菌灵可湿性粉剂（山东华阳科技股份有限公司），70%代森锰锌可湿性粉剂（利民化工股份有限公司），25%嘧菌酯悬浮剂（英国先正达有限公司），12.5%腈菌唑乳油（华北制药集团爱诺有限公司），75%百菌清可湿性粉剂（江阴苏利化学有限公司），12.5%烯唑醇可湿性粉剂（江苏剑牌农药化工有限公司）。

1.3 供试培养基

培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），采用常规方法制备，分装入150 mL三角瓶（每瓶49 mL），高压蒸汽灭菌后备用。

1.4 供试药剂母液的配制及保存

根据预试验的测定结果，在无菌环境下配制各供试药剂的母液，置于消毒的三角瓶中在4℃冰箱保存备用。

1.5 毒力测定方法

采用菌丝生长速率法[5]。将供试药剂母液分别稀释5个系列浓度（表1），各取1 mL加入49 mL定量灭菌冷却至50～55℃的PDA培养基中，摇匀，制成不同浓度带药平板，以加入1 mL无菌水的培养基平板为对照，4次重复。在无菌条件下，用灭菌打孔器自菌落边缘切取直径5 mm菌饼，接入带药和对照培养基平板中央，菌丝面朝下。

表1 11种杀菌剂对梨树黑斑病菌的抑制率

表2 11种杀菌剂对病原菌的毒力测定结果

各处理培养皿置于25℃恒温培养，对照菌落直径长到培养皿直径的90%时，用十字交叉法测量各处理的菌落直径，计算各药剂处理对病菌菌丝生长的抑制率。采用唐启义和冯明光[6]的实用统计分析及其DPS数据处理系统软件，用生物测定-数量型数据机率值分析模型计算各种药剂的毒力回归方程（y=bx+a）、EC50和相关系数r。

2 结果与分析

2.1 不同药剂对病原菌的抑制效果

从表1看出，11种药剂在设计浓度下均对梨树黑斑病病原菌有抑制作用。随着药剂浓度的升高，其对病原菌的抑制率增加。70%代森锰锌可湿性粉剂800.00 μg/mL、12.5%烯唑醇可湿性粉剂160.00μg/mL、10%苯醚甲环唑乳油40.0000μg/mL、25%戊唑醇乳油40.000 0 μg/mL、20%丙环唑乳油40.000 0 μg/mL 和 40%氟硅唑乳油 2.000 0 μg/mL对病原菌的抑制率均在91%以上，表明这6种药剂在该浓度下对病原菌的抑制效果较好。

2.2 不同杀菌剂对病原菌的毒力测定

各药剂对梨树黑斑病菌的毒力大小不同（表2）。40%氟硅唑乳油EC50值最低，为0.401 6 μg/mL，表明40%氟硅唑乳油对病原菌的毒力作用最强；其次是10%苯醚甲环唑乳油、20%丙环唑乳油和25%戊唑醇乳油，EC50值分别为 1.4780 μg/mL、2.018 5 μg/mL和 4.101 0 μg/mL；而 1.5%噻霉酮乳油和75%百菌清可湿性粉剂EC50较高，分别达886.520 0 μg/mL 和 759.468 0 μg/mL，表明这两种药剂对病原菌的毒力作用最弱。相关性（r）分析表明，75%百菌清可湿性粉剂对病原菌的相关性系数为0.876 1，没有达到显著水平，其它10种供试药剂均达到极显著水平。

2.3 病原菌对不同药剂的敏感性

从毒力回归方程看出，不同药剂处理的斜率（b值）不同（表2）。40%氟硅唑乳油、50%多菌灵可湿性粉剂和70%代森锰锌可湿性粉剂的b值较大，分别达到1.465 7、1.430 4和1.528 9，表明病原菌对40%氟硅唑乳油、50%多菌灵可湿性粉剂和70%代森锰锌可湿性粉剂较敏感。而75%百菌清可湿性粉剂和25%嘧菌酯悬浮剂的b值较小，分别为0.530 7和0.611 2，表明病原菌对75%百菌清可湿性粉剂和25%嘧菌酯悬浮剂不敏感。

3 小结与讨论

选用11种杀菌剂测定了对梨黑斑病菌菌丝生长抑制作用，结果表明，10%苯醚甲环唑乳油、25%戊唑醇乳油、40%氟硅唑、12.5%烯唑醇可湿性粉剂、20%丙环唑乳油及70%代森锰锌可湿性粉剂对梨黑斑病菌菌丝生长抑制率均能达到90%以上。在供试的11种杀菌剂中，对病原菌菌丝生长毒力最强的是40%氟硅唑乳油；EC50为0.401 6 μg/mL；其次为10%苯醚甲环唑乳油、20%丙环唑乳油和25%戊唑醇乳油；1.5%噻霉酮乳油的毒力最弱，为886.520 0 μg/mL，从毒力回归方程的b值分析看出，梨树黑斑病病菌对70%代森锰锌可湿性粉剂、40%氟硅唑乳油和50%多菌灵可湿性粉剂敏感性较高。综合比较分析，40%氟硅唑乳油、10%苯醚甲环唑乳油、20%丙环唑乳油及25%戊唑醇乳油这4个处理可以作为防治梨黑斑病的首选药剂和剂量。

化学杀菌剂是防治梨黑斑病的主要手段。本研究通过对梨黑斑病菌的药剂筛选，初步明确了对病菌有较高毒力的杀菌剂，结果与付余波[7]和崔建潮[8]的报道基本一致。本试验所测的药剂EC50值相对较高，这可能与菌株地理来源不同有关。朱红艳[9]研究表明，苯醚甲环唑对梨黑斑病菌菌株的EC50分布在0.719 0～1.488 6 μg/mL范围内，菌株表现为敏感，但存在敏感性降低的菌株。本研究测得的苯醚甲环唑的EC50值为1.478 0 μg/mL，也可能与病原菌对药剂的敏感性降低有关。黑斑病菌分生孢子产生在病害循环中是非常关键的一环，本研究仅测定了供试药剂对病原菌菌丝的毒力大小，对分生孢子的毒力大小还需进一步研究。

在长期的农药使用过程中，梨树病害对常规性的杀菌剂势必会产生一定的抗药性，还易造成农药残留和环境污染。在生产实际中，还应根据根据梨黑斑病的发病规律，交替使用药剂，以有效控制梨黑斑病的发生。还应通过整形修剪改善田间通风透光条件及温湿度变化等其它农业措施，降低发病条件，减少农药的使用量，以延缓病原菌抗药性的产生，延长这些杀菌剂的使用寿命。本试验只供田间病害防治时选药提供参考，为了更进一步明确药效，还应对这些杀菌剂进行系统的田间防效试验。