2’-氯地西泮鉴定方法研究

徐仿敏 姜兆林 刘凌云 魏万里

（1 江阴市公安局物证鉴定室 江苏 江阴 214431；2 中国刑事警察学院法化学系 辽宁 沈阳 110035；3 无锡市公安局物证鉴定所 江苏 无锡 214401）

1 引言

新精神活性物质是指未被《1961年麻醉品单一公约》或《1971年精神药物公约》管制，但以单体纯净物或制剂的形式滥用，会对公众健康带来威胁的物质[1]。近几年，新精神活性物质问题在全球范围内发展迅猛，根据联合国毒品与犯罪问题办公室最新监测数据显示，2009～2016年，全球103个国家和地区共报告出现739种不同的新精神活性物质，主要包括合成大麻素类、合成卡西酮类、新苯二氮卓类、苯乙胺类、哌嗪类等[2]，其中以合成大麻素类、合成卡西酮类和新苯二氮卓类为主，大约占全部新精神活性物质的70%以上[3]。目前，我国国内出现的新精神活性物质主要包括合成大麻素类[4-6]、卡西酮类[7-8]、新苯二氮卓类[9]、哌嗪类[10]这几类。

近几年，在非法药物市场上出现一些新的苯二氮卓类药物，该类药物与传统的苯二氮卓类药物结构类似，具有相似的药理作用，但没有被任何国家批准作为药物来使用。这些物质主要以片剂、胶囊、粉剂的形式销售，目前出现的新的苯二氮卓类药物主要包括氯硝唑仑（clonazolam）、2’-氯地西泮（diclazepam）、依替唑仑（etizolam）、氟溴马唑仑（flubromazolam）等[2]。

2’-氯地西泮，英文名称Diclazepam，2'-chlorodiazepam，又称Ro 5-3448，化学名称：7-氯-5-（2-氯苯基）-1，3-二氢-1-甲基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮，分子式：C16H12Cl2N2O，分子量：319，它的化学结构与地西泮类似，具有抗焦虑、抗惊厥、镇静和肌肉松弛等作用[11-12]，其药效是地西泮的4～8倍[13]。2’-氯地西泮在20世纪60年代被首次合成[14]，欧洲药物与毒瘾监测中心于2013年发现其首次出现在非法药物市场[15]。英国已于2017年将2’-氯地西泮列为C类毒品进行管制[16]，而在我国还未被列入管制范围之内，也未见相关研究文献报道。

本文采用气相色谱－质谱联用法（GC-MS）、傅立叶变换红外光谱法（FT-IR）和核磁共振波谱法（NMR）联用技术对案件中缴获的新精神活性物质进行定性检验。通过与国际缴获毒品分析科学工作组织（SWGDRUG）提供的谱库进行检索比对，并用1H NMR 谱图对其结构进行进一步的确证，确定新精神活性物质为2’-氯地西泮。该方法简单且实用，已成功应用于实际案件的检验工作，并取得较为满意的结果。

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

赛默飞Trace1310-ISQ LT气相色谱质谱联用仪；Nicolet IS50傅立叶变换红外光谱仪；甲醇（色谱纯，购于Sigma公司）；布鲁克AVANCE 300MHz核磁共振波谱仪。

2.2 分析条件

2.2.1 色谱条件

色谱柱：VF-5ms（30m×0.25mm DF=0.25）；柱温：80℃，保持1min，20℃ /min 升至280℃，保持19min；载气：He；流速：1.0mL/min ；进样口温度：280℃ ；进样量1μL，分流进样，分流比为20。

2.2.2 质谱条件

离子源温度：300℃ ；传输线温度：280℃ ；离子源：EI源；EI 电压：70ev；扫描范围：45~450amu；溶剂延迟：3.5min；全扫描模式（Full Scan）采集总离子流色谱图。

2.2.3 红外光谱条件

扫描范围4000~550cm-1；扫描次数32次；分辨率4 cm-1；光圈：100；DTGS 检测器。

2.2.4 核磁共振条件

采集参数：PROBHD 5mm PABBO BB-；PULPROG zg30；TD 65536；溶剂为氘代氯仿；NS 16；DS 2；SWH 6009.615Hz；FIDRES 0.094699Hz；AQ 5.4525952 sec；RG 203； DW 83.200 usec；DE 6.50usec；处理参数：SI 65536；SF 300.1318534 MHz；WDW EM；SSB 0；LB 0.2Hz；GB 0；PC 1.00。

2.3 样品处理

2.3.1 GC-MS分析

案件中缴获的未知片剂如图1所示，研磨后，取约5mg样品，置于15mL具塞试管中，加入10mL甲醇溶液，超声5min，离心后，取上清液1.5mL于自动进样瓶内，供GC-MS分析。

2.3.2 FT-IR分析

取未知片剂10粒，研磨后用适量甲醇溶解，超声10min，离心后吸取上清液挥干，重结晶后得到白色晶体，如图2所示。取上述白色晶体少许，直接置于傅里叶变换红外光谱仪的ATR附件上进行FT-IR分析。

图1 缴获的未知片剂

图2 未知样品中提取的白色晶体

2.3.3 NMR分析

取约10mg重结晶后的白色晶体，置于核磁管中，加入1mL含有TMS的氘代氯仿，使样品充分溶解，供核磁检测。

3 结果与讨论

3.1 GC-MS 分析

将2.3.1中的样品溶液按照2.2所述的分析条件进行GC-MS分析，得到空白溶剂和未知样品的总离子流色谱图，如图3所示，由总离子流色谱图可以发现在保留时间12.39min处出现色谱峰。其主要特征碎片离子（m/z）为283（基峰）、290、318、255。通过与已知质谱数据库（Mainlib、Replib、Wiley、Nist）进行谱库检索，未得到匹配结果。将质谱图与SWGDRUG组织提供的质谱库进行检索比对，得到检索结果显示与“Diclazepam”的质谱图匹配一致，如图4所示。通过对Diclazepam的结构进行解析，发现其特征碎片离子主要是以断裂C=O和Cl的方式进行断裂而得到，如图5所示。

图3 空白溶剂与未知样品的总离子流色谱图

图4 未知样品与SWGDRUG提供的谱库检索图

图5 2’-氯地西泮的主要断裂方式

3.2 FT-IR分析

在2.2.3所述的仪器条件下，进行FT-IR分析，得到未知样品红外光谱图，如图6所示。在1700～550 cm-1指纹区的特征吸收峰较为明显，其主要特征吸收峰波数位置如表1所示。通过仪器自带的红外光谱图谱库的检索，未找出与之相匹配的红外光谱图。将未知样品的红外光谱图与SWGDRUG提供的Diclazepam红外光谱图[17]（如图7所示）进行比对，特征吸收峰的比对结果一致，可以确认该未知样品即为Diclazepam。

图6 未知样品的红外光谱图

图7 2’-氯地西泮的红外光谱图

3.3 H NMR分析

为进一步验证该未知样品的结构，对其进行了核磁共振氢谱检测，1HNMR谱图如图8所示。谱图中δ 7.26ppm是氘代氯仿的溶剂峰，未知样品的化学位移δ、分裂峰数及归属情况详见表2。通过结构分析，进一步证实该未知样品为2’-氯地西泮。

表1 未知样品与2’-氯地西泮的红外特征吸收波数

图8 未知样品的1HNMR谱图

4 讨论

4.1 体内代谢过程

Moosmann等[18]通过药物代谢动力学研究了2’-氯地西泮的体内代谢途径，如图9所示。2’-氯地西泮经过N-去甲基化和4-羟基化代谢为地洛西泮和洛甲西泮，进一步代谢为劳拉西泮。健康自愿者服用1mg的2’-氯地西泮，最高血浓度出现在服药后3h，洛甲西泮、地洛西泮和劳拉西泮的最大浓度分别出现在服药后6h、36h、99h，通过Kinetica 5.1软件计算药代动力学参数，推断出2’-氯地西泮的半衰期为42 h。在服药后3～56h内收集的尿液中可以检出微量的2’-氯地西泮，尿液中的3种代谢物以葡萄糖醛酸结合的形式存在，经过β-葡萄糖醛酸酶水解后，服药3h至6d收集的尿液能检出地洛西泮，11d收集的尿液能检出洛甲西泮，19d收集的尿液能检出劳拉西泮。这些代谢数据可以为该类案件的检验提供参考。

图9 2’-氯地西泮体内代谢过程

4.2 案例检验

2017年10月，华东某市某女被害人被犯罪嫌疑人下药迷晕后强奸，醒来后仍然记忆模糊，记不清发生何事。大约距事发48h后至公安机关报案，随后公安机关采集被害人的血液和尿液，送至笔者所在检测单位进行检验。尿液经过苯二氮卓类免疫检测板初步检测，呈现阳性结果，血液和尿液经过固相萃取提取处理后，进行GC-MS检测，在被害人的血液中检出2’-氯地西泮和地洛西泮，如图10所示；尿液中未检出2’-氯地西泮，检出地洛西泮、洛甲西泮和劳拉西泮，如图11所示。

图10 被害人血液中2’-氯地西泮（A）和地洛西泮（B）的色谱图和质谱图

图11 被害人尿液中劳拉西泮（A）、洛甲西泮（B）和地洛西泮（C）的色谱图和质谱图

5 结论

2’-氯地西泮自20世纪60年代合成以来在全球范围内均没有被批准作为药物使用，因此在近几十年中从未出现。然而伴随近些年网络信息化的快速发展，2’-氯地西泮在互联网中被当作“听话水”、“乖乖水”、安眠药进行贩卖，被一些不法分子用来实施抢劫、强奸等犯罪活动，应引起我国相关部门的充分重视。

本文建立了基于气相色谱-质谱联用法、傅立叶变换红外光谱法和核磁共振波谱法联合技术鉴别2’-氯地西泮的检验方法，并对红外特征吸收峰、质谱的碎裂方式和核磁氢谱中质子的归属进行了初步探索，得出2’-氯地西泮的相关分析数据。该方法简便、快捷、实用，能够对新精神活性物质进行定性检验，具有较好的应用前景。