BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌淋巴结转移的相关性研究

谢楚平

甲状腺癌作为一种内分泌恶性肿瘤, 有着相当高的发病率且发病率逐年上升。PTC占甲状腺癌的85%左右。PTC的发生涉及多个基因的突变, 如BRAF、NRAS、PD-L1、PD-1基因等［1,2］。但是BRAF基因突变和淋巴结转移是否存在相关性以及其具体的情况在医学界一直没有定论, 争议颇多。目前, 争议主要有：BRAF基因突变可能和 PTC 的远处转移具有相关性；BRAF基因突变有可能让PTC 分化情况更糟糕；如果BRAF基因突变那么会使得PTC 发生淋巴

结转移的可能性增大；BRAF基因突变和淋巴结的转移不相关［3］。不同研究间总会存有不同的干扰因素, 研究样本情况等也不可能做到完全相同, 所以研究结论不一致［4］。因此,本研究主要探究BRAF基因突变与PTC淋巴结转移的相关性。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年4月～2018年3月在本院病理诊断为 PTC 并进行了淋巴结清扫术的85例患者为研究对象。对参与本次研究患者的年龄、性别、发病情况、肿瘤大小、淋巴结转移情况、是否有钙化、癌灶情况、手术的具体情况等进行详细记录。本次研究采集85例PTC患者手术切除所得的新鲜组织, 负责的病理学医生将患者瘤旁的正常和肿瘤组织进行区分后立即保存于液氮中, 要求每个病例至少有3名病理学教授严格根据世界卫生组织分类标准开展形态学观察。

1.2 方法 DNA提取把石蜡切片切成厚度为 8 μm 的切片后, 一个离心管可放入1～ 2 片。之后进行DNA 脱蜡操作确认消化后用QINGEN石蜡组织 DVA 提取盒的使用方法进行 DNA抽取。BRAF基因突变的检测：在抽取到 DNA 后进行PCR测序来检测BRAF 基因第 15 号外显子以判断其是否发生突变。操作方法：在避光环境下将BRAF 混匀并完成配置。在反应体系 PCR 板中放入待测样本的DNA以及标准品, 加增 26 个循环孔, 每个循环孔都要进行荧光素(FAM)以及ROX 参比荧光信号的搜集。样本突变信号出现典型的S 型扩增曲线升起, 则代表样本 BRAF基因突变阳性；样本突变信号没有典型的 S 型曲线升起或者Ct≥23 时认为该样本 BRAF基因突变阴性。 在PCR反应体系中添加荧光基团,

通过荧光信号的积累来实时进行PCR过程的检测。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验；PTC 淋巴结转移相关因素采用Logistic回归分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 BRAF基因突变检测结果 85例PTC 患者中有50例患者的肿瘤组织检查发现有BRAFV600E点突变, BRAF基因突变率为58.82%(50/85), 样本DNA的提取及突变基因检测的实验比较效果明显。见表1。

表1 PTC 中BRAFV600E测序结果(n)

2.2 PTC 患者淋巴结转移相关因素的单因素和多因素分析85例患者中有55.29%(47/85)的患者发生了淋巴结转移。单因素分析结果显示, 不同年龄、是否原发病灶包膜浸润、是否单发病灶、不同肿瘤大小、有无肿物钙化、有无神经压迫症状者淋巴结转移占比不同(P＜0.05)。将上述因素纳入多因素分析中, 多因素分析结果提示年龄≥45岁、原发病灶包膜浸润、多发病灶、肿瘤大小＞40 mm为PTC淋巴结转移的危险因素 (OR＞1,P＜0.05)。

2.3 PTC 患者BRAF基因突变相关因素的分层分析 BRAF基因突变和淋巴结转移具有关联, BRAF基因突变和其他变量间可能存在一定的交互关系。故进行 BRAF基因突变与其他自变量的双变量交互作用分析, 最终发现肿瘤钙化和肿瘤大小＞40 mm均和 BRAF基因突变存在交互作用。见表2。

表2 PTC患者与BRAF基因突变相关因素的分层分析［n(%)］

3 讨论

研究显示BRAFV600E基因突变会让肿瘤细胞出现增殖和分化, 这属于甲状腺癌中的一种遗传学事件并且其在 PTC 中发生率最高, 目前有研究结果显示几率最高可达80%, 而甲状腺癌患者有85%左右都属于PTC［5］。所以深入探究 BRAF基因突变与 PTC 之间具有的关系是有利于进一步明晰甲状腺肿瘤细胞的发生机制、病理内容等具体情况, 可以推进该方面的治疗进展, 有利于患者更好地恢复。尽管现有的研究仍找不到BRAF基因突变的发生与PTC临床病理特征具体关系, 但相信随着医学技术的不断发展, 最后一定能探索到其中的奥秘。本次旨在对BRAF基因突变与PTC淋巴结转移的相关性进行研究, 所得数据也具有一定的代表性。国内外对于该课题的研究自然也不少, 相关研究显示：BRAF 的发生是和PTC有着紧密联系的, 其中BRAF 基因突变很有可能是因为PTC 的征性遗传学发生了变化；BRAF基因突变会让患者的预后情况更差。不同的研究所显示的BRAF 基因突变在PTC之中的突变率也是不一样的：有研究选择了100例甲状腺癌患者作为样本最后发现其 BRAF 基因突变只在PTC 中进行表达, 其阳性率为55%；也有研究给出PTC中BRAF的突变率发生区间为33%～78%［6-8］。我国近期的相关研究结果显示BRAF基因在PTC中的突变率为64.63%。本次研究中85例PTC患者其BRAF 的突变率为58.82%(50/85)。这一数据和国内、外研究的结果相近, 因此认为PTC与BRAF基因突变是具有一定关联的［9］。国外有关专家在对 PTC 患者进行研究时发现BRAF基因突变的患者有着很高的颈部淋巴结转移率；有医学团队在深入研究了340例分化型甲状腺癌的病理资料后, 通过数据分析发现 BRAF 基因突变和颈部淋巴结转移已经成为了PTC术后复发与转移的独立预后因素［10］。本次研究中的85例患者有47例出现了淋巴结转移, 转移率为55.29%, 所以认为BRAF基因突变的患者发生淋巴结转移的几率很大。作者还对进行BRAF基因突变与其他自变量的双变量交互作用进行了分析, 最后得出结论：PTC患者存有一定的淋巴结转移率, 但BRAF基因突变是PTC的特征性分子事件, 年龄≥45岁、多发病灶、肿瘤＞40 mm的患者更有可能出现淋巴结的转移。对于该课题的研究作者会一直进行,也希望该方面的研究成果越来越多, 以支持临床的相关治疗,让更多的患者能恢复健康, 提高生活质量。