水貂静脉采血技术探索与应用

陈杰，刘建东，王小龙，赵建军※，闫喜军※

（1.中国农业科学院特产研究所，长春 130112；2.黄岛出入境检验检疫局，山东 黄岛 266555）

水貂易感病毒的相关研究中，血液是必不可少的分析材料，其涉及到淋巴细胞的分离、中和抗体滴度的测定、血液中病毒抗原的检测，这些试验均需要大量且高质量的血液样本[1～3]。水貂全身被毛、体型较小、行动灵活，捕捉和固定都比较困难，采血更是难以进行。临床上多采用剪趾甲或者心脏采血的方法。剪趾甲采血方法是紧贴脚趾肉垫剪掉无名指或中指的指甲，待有血液流出后，用容器接取，采血结束后用高锰酸钾止血消毒。心脏采血则是先用手指感触水貂的心跳处，见针管有回血，缓慢抽出血液，然后止血消毒[4]。这2种方法都有很多弊端，剪趾甲采血不能保证无菌，心脏采血对心脏损伤较大，也易伤及其他脏器，容易造成内脏出血，影响正常生长，通常因针头刺破心脏和肝脏导致出血过多而死，并且这2种方法都不能连续多次采血。近年来，很多研究学者将采血的部位锁定在了水貂的静脉，国内、外均见有对不同静脉的报道，如：尾静脉[3]、后肢趾间静脉[5]，但这些静脉仅能满足少量血液的需要，考虑到科研时需要用到较大量的血液，颈静脉和前腔静脉成为备选[6]，因颈静脉在实际操作中不好定位，故选择前腔静脉采血法来替代现有水貂的采血方法。

1 材料

雌性水貂（吉林中特农业科技有限公司）；舒泰（法国维克有限公司）；静脉血样采集针（济宁市恒泰医疗用品有限公司）；静脉真空血样采集管（浏阳市三力医用科技发展有限公司）；1mL注射器（圣光医用制品有限公司）。

2 方法

2.1 试验分组

随机选取10只47日龄水貂（分别编号为1～10）进行前腔静脉采血，每只水貂采血1.5mL，测定采血时间。

对于同一批水貂分别于47日龄、54日龄、61日龄、75日龄、89日龄时随机选取16只，分别采血8mL；在47日龄、54日龄、61日龄、75日龄、89日龄时分别随机选取16只水貂作为对照，不做采血处理。观察水貂采血后的体征和计算存活率。

2.2 保定和麻醉

将水貂适应性饲养2d～3d后进行采血。水貂俯卧放置，按10mg/kg～15mg/kg臀部肌肉注射舒泰，达到呼吸平稳、全身肌肉松弛、钳夹皮肤反应消失的最适麻醉指征。

2.3 定位和穿刺

将胸骨柄及其周围洗干净、擦干，再用酒精棉球由内而外进行消毒。食指和中指在胸骨柄末端的两侧，轻轻按压，静脉血样采集针以胸骨柄的末端为基准点，与胸骨板成30°～45°，体正中线稍向右向心方向穿刺进针，待血液沿着软质硅胶管流出（图1），静脉真空血样采集管接住，待血流稳定后，用手掌轻轻挤压心脏部位，有利血液流出。采血完毕，消毒止血，血止后将水貂俯卧放置回笼子，待其苏醒（图2）。

图2 水貂采血部位示意图Fig.2 The Schematic diagram of blood sampling site in mink

3 结果

3.1 前腔静脉采血结果和所需时间

水貂臀部肌肉注射舒泰，2min～3min后即进入麻醉状态，麻醉持续时间为30min～45min。每只水貂采集1.5mL血液所需时间为0.4min～0.6min，这种方法简便易行，采血时间短，可以满足科研试验对于血液的需求。水貂前腔静脉采血的采血量和采血时间如表1所示。

表1 水貂前腔静脉采血的采血量和采血时间Table 1 The volume and time of collecting blood from anterior vena in minks

3.2 不同日龄水貂采血结果

47日龄、54日龄、61日龄、75日龄、89日龄水貂采血8mL。47日龄、54日龄水貂均出现不适症状，存活率分别为68.75%和93.75%，表明47日龄、54日龄水貂不适宜采集8mL的血液；61日龄水貂出现不适的症状，采食量减少，活动迟缓；75日龄、89日龄水貂未出现明显的不适感，存活率均为100%，表明在采集8mL血量的情况下，75日龄以上为最佳。不同日龄水貂采血结果如表2所示。

表2 不同日龄水貂采血结果Table 2 The results of blood sampling at different age for minks

4 讨论

临床上多采用剪趾甲或心脏采血的方法采集水貂血液。剪趾甲采血方法在采血过程中血液暴露于空气中，极易造成血液污染，影响血液指标的检测和分析，而且剪趾甲人为造成动物创伤，使动物疼痛，增加感染机率，动物较长时间才能恢复。与此同时，若需血液量较大，采集时间会很长，这样长时间的保定对动物会产生极大的刺激，不利于动物健康。心脏采血避免血液造成污染的可能，而且血流速度快，但心脏采血极易照成内脏损伤而出血，易造成采血水貂死亡，且不可循环采血。

由于前两种采血方法存在很多问题，且尾静脉、后肢趾间静脉等小静脉不能满足大量血液的需求，颈静脉又不好定位。参考文献[6，7，8]提出了前腔静脉真空采血法。前腔静脉真空采血法有以下几点优势[9，10]：血液采集过程中基本上处于无菌的环境中；采血针采血易于固定；可缩短血液收集时间，保证检测和分析结果稳定；易操作，整个采血过程可以标准化进行；采血量大、创口小，短时间内可重复采血。本试验对10只水貂麻醉后采血，采血后水貂无明显影响，表明前腔静脉真空采血法完全可以替代现有水貂采血的方法。

本试验对不同日龄水貂进行了采血，75日龄以上水貂采血8mL最佳，对水貂无明显影响，这可以为血液的采集提供借鉴。

为减少实验动物的痛苦并保持安静，需要对动物进行麻醉，待动物已进入麻醉状态[11]时，方可进行试验。同时考虑到动物种属间的差异等情况，不同动物应采用不同的麻醉方法和麻醉剂[12]。本试验采用舒泰麻醉药对水貂进行臀部肌肉注射，在其麻醉的状态下采血，避免了动物的应激反应。

本试验建立的前腔静脉采血方法符合1988年颁布的《实验动物管理条例》第六章第29条中“从事实验动物工作的人员对实验动物必须保护，不得戏弄或虐待”的规定[13]。这不仅达到“3R”原则[14]的要求，降低了血液浪费，减少了实验动物的损伤，而且节约了动物资源；同时在科学原则的基础上，优化了实验程序和实验技术，减轻了给动物造成的与实验无关的疼痛和紧张不安的情绪。