miRNA-107在肺癌组织中的表达及临床意义*

徐鑫鑫 ，林 兰 ，王旭东 ，张 艳 ，李小华

（1南通大学附属医院检验科，江苏226001；2南通市肿瘤医院检验科）

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，其发病人数逐年增长。由于患者早期缺乏典型的临床特征，待发现时大部分处于中晚期，因此需寻找有效的肺癌早期诊断生物学标志物。microRNA（miRNA）是一类内源性、非编码单链RNA分子，广泛存在于真核生物中，与肿瘤的发生发展密切相关。miR-107在许多肿瘤中有异常表达，如肝癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、肺癌[1－2]等。有研究发现，miR-107在非小细胞肺癌（NSCLC）中表达量降低，且与肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭有关，并能通过靶向结合BDNF调控PI3K/AKT途径[3]。本实验中收集52例肺癌患者癌组织及癌旁组织，采用RT-PCR对miR-107的表达进行检测、分析，探讨miR-107表达水平在肺癌早期诊断方面潜在的应用价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料 52例肺癌组织及相应癌旁组织（距离病灶>5 cm）均取自南通市肿瘤医院标本库，患者术前、术中均未接受放疗、化疗及免疫治疗。病理分期采用国际肺癌研究协会（IASLC）第七版 TNM分期。患者肺癌组织标本及临床资料的收集经医院伦理委员会批准，并与患者签署知情同意书。所有标本均在离体后30 min内经无菌无酶水冲洗后置于冻存管中，液氮迅速冷冻后放-80℃冰箱中保存。患者一般资料见表1。

1.2 试剂及仪器 TRIZOL试剂（美国ambion公司），逆转录试剂盒（美国Thermo公司），RT-PCR试剂盒（德国 Roche公司），miR-107引物 BulgeloopTM miRNA qRT-PCR Primer Sets（one RT primer and a pair of qRCR primers for each set）（广州锐博生物科技有限公司设计），7500型荧光定量PCR仪（美国ABI公司），4℃离心机（日本Hitachi公司），HB-1000分子杂交箱（美国UVP公司），微量核酸蛋白分析仪（德国IMPLEN公司），-80℃冰箱（日本SANYO公司）。

1.3 RT-PCR检测miR-107表达 提取肺癌组织总RNA，逆转录成cDNA。以cDNA为模板，U6为内参，采用SYBR Green法检测miR-107的表达。实验设置3个复孔，每个反应孔为20 μL体系，包括2 μL逆转录产物、0.8 μL miRNA Taqman 引物、10 μL Mix体系和6.4 μL DEPC水。反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性15 s，60℃退火和72℃延伸各30 s，共35个循环。以2-△△Ct值表示miR-107的表达量。

1.4 统计学处理 采用SPSS 25.0统计学软件进行数据处理，Graphpad Prism 5.0软件制作图表。肺癌患者组织及癌旁组织中miR-107表达不符合正态分布，采用中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，不同临床病理特征肺癌患者组织中miR-107表达的比较采用χ2检验。建立ROC曲线评价miR-107表达水平对肺癌的诊断价值。以P<0.05或P<0.01表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 miR-107表达与肺癌临床病理特征的关系 肺癌组织中miR-107表达下调42例，表达上调10例。miR-107在肺癌组织中的表达仅与性别和TNM分期有关（P<0.05），而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小、是否淋巴结转移及生存时间无明显相关性（P>0.05）。见表 1。

表1 52例肺癌患者miR-107表达与临床病理特征的关系

2.2 肺癌组织中miR-107的表达 肺癌组织中miR-107 的表达量为 3.063（1.715，5.658），癌旁组织中 miR-107 的表达量为 10.26（4.007，21.33），差异具有统计学意义（P<0.01）。结果提示，肺癌组织中miR-107的表达水平明显低于癌旁组织。见图1。

2.3 miR-107表达的诊断价值 经受试者工作特征（ROC）曲线分析，ROC 曲线下面积（Az）为 0.736（95%CI：0.639～0.833），最佳截断值为 4.4649，miR-107诊断肺癌的灵敏度和特异度均为71.2%。见图2。

图1 miR-107在肺癌组织及癌旁组织中的表达

图2 miR-107表达诊断肺癌的ROC曲线图

3 讨 论

目前，我国肺癌的发病率和死亡率逐年上升，多数患者在确诊时已处于晚期，预后较差，这使得肺癌的早期诊断显得尤为重要。miRNA是一类长度为18～22个核苷酸组成的内源性非编码RNA，能调控基因功能的表达。迄今为止，发现的miRNA已经超过一千多种，多数证明与肿瘤密切相关，且不同种类的miRNA在不同肿瘤或相同的肿瘤中发挥作用不同。miRNA既可作为促癌分子，也可作为抑癌分子。近年来，miRNA在疾病诊断中的价值受到关注。本实验通过检测并比较肺癌患者组织及癌旁组织中miR-107的表达情况，绘制ROC曲线，探讨miR-107表达水平在肺癌早期诊断方面潜在的应用价值。

miR-107是miRNA-15/107家族中的一员，只有一种成熟序列。miR-107基因序列高度保守，位于泛酰酸激酶（pantothenate kinase，PANK）家族中PANK1和PANK5的内含子区域，几乎人体所有组织均有表达。近年来发现，miR-107与多种肿瘤发病及预后有关，但具体作用机制尚不清楚。miR-107既能促肿瘤，又能抑制肿瘤的发生。Cheng等[4]研究认为，miR-107在胃癌细胞系的表达明显高于胃上皮细胞系，加入miR-107抑制剂后能显著降低胃癌GC细胞的增殖及克隆形成能力。同样，Zhang等[5]发现，miR-107在肝癌组织和肝癌细胞系（HepG2）中的表达明显高于癌旁组织和正常人肝细胞系（L02），miR-107能通过靶向结合Axin2促进肝癌细胞的增殖。相反，Li等[6]采用qRT-PCR检测了30例乳腺癌组织和癌旁组织，结果表明，miR-107在乳腺癌组织中低表达，并可通过直接靶向结合CDK8，抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期。Song等[7]也认为，miR-107在肾脏细胞癌和细胞系中表达量均降低，过表达miR-107能显著诱导G2/M期细胞周期阻滞，从而延缓肿瘤的生长。此外，miR-107还与肿瘤耐药有关，Lu等[8]发现，miR-107能通过作用于抗凋亡因子Bcl-w促进肺癌A549细胞对紫杉醇的药物敏感性。

本研究采用RT-PCR检测miR-107在肺癌组织及癌旁组织中的表达，结果提示肺癌组织中miR-107表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）。这与Xia等[3]的结果一致。肺癌患者中miR-107表达仅与性别和TNM分期有关（P<0.05），而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小、是否淋巴结转移及生存时间无明显相关性（P>0.05），考虑到收集的标本中男性患者居多，可能会对统计数据造成影响。通过ROC曲线分析显示，miR-107对诊断的灵敏度和特异度均为71.2%，这说明miR-107对肺癌具有较高的诊断效能，基本可作为肺癌早期诊断的分子标志物。但由于结果偏低，miR-107不能单独作为诊断标志物，需要与其他肺癌分子指标联合检测才有意义。同时，由于样本量偏少，结果会产生偏倚，还需要进一步扩大样本量，并进行长期随访追踪，以全面评估miR-107对肺癌的诊断价值，为肺癌的早期诊断提供强有力的依据。另外，52例肺癌患者中仅有36例获得定期随访，随访1～5年。其中死亡7例（19.4%），miR-107下调的患者中死亡6例（20.7%），miR-107上调的患者中死亡1例（14.3%），提示低表达miR-107的患者预后相对较差。但由于有些标本缺乏具体的死亡日期，且追踪不到位，不能绘制出生存曲线，因此说服力还不够，后期实验中会加以完善。

综上，miR-107在肺癌组织中表达量下调，且对肺癌具有较高的诊断效能，这预示着miR-107可能成为肺癌新的治疗的靶点，有望提高肺癌患者的生存率。