亚甲基四氢叶酸还原酶C677T位点基因多态性对采用叶酸联合维生素B12治疗的老年H型高血压患者的影响研究

张翠，司君增，郑立峰

近年来，随着人们物质生活水平提高，我国高血压发病率呈现逐年升高趋势［1］。临床上将伴有血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平＞10 μmol/L的原发性高血压定义为H型高血压［2］，而血浆Hcy水平升高会增加动脉粥样硬化事件发生风险，口服叶酸联合维生素B12可有效降低血浆Hcy水平［3］。血浆Hcy水平的影响因素分为遗传因素和环境因素，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是Hcy代谢的关键酶之一，其C677T位点基因突变可导致MTHFR活性降低及血浆Hcy水平升高［4］。本研究旨在探讨MTHFR C677T位点基因多态性对采用叶酸联合维生素B12治疗的老年H型高血压患者的影响，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2015年9月—2017年9月莱芜市人民医院收治的老年H型高血压患者146例，其中男87例，女59例；年龄61～86岁，平均年龄（74.5±13.1）岁；血浆Hcy水平＞10 μmol/L；收缩压 ＞140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）和 /或舒张压＞90 mm Hg［5］。排除标准：（1）伴有恶性肿瘤、肝肾衰竭及感染性疾病者；（2）伴有认知障碍、精神异常、心理问题者；（3）近3个月内服用过对血浆Hcy水平有影响的药物（维生素B12和叶酸除外）者。所有患者未服用降压药时测量上臂血压，重复3次，并根据《中国高血压防治指南2010》［6］进行高血压分级，其中1级44例，2级42例，3级60例。本研究经莱芜市人民医院伦理委员会审核批准，所有患者及其家属知情并签署知情同意书。

1.2 治疗方法 所有患者参照《中国高血压防治指南2010》［6］进行常规降压治疗，同时口服叶酸（湖北武当生物制药有限公司生产，生产批号：050901）联合维生素B12（成都瑞芬思生物科技有限公司生产，生产批号：150801），均为5 mg/d；共连续治疗4个月。

1.3 MTHFR C677T位点基因多态性检测方法 采集所有患者外周静脉血3 ml，参照DNA提取试剂盒（南京建成生物科技有限公司）说明书提取DNA；采用梯度聚合酶链反应（PCR）仪（Bio-Rad）对提取的DNA进行扩增，反应条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性30 s，50 ℃退火30 s，70 ℃延伸1 min，40个循环，最后70 ℃延伸10 min；取PCR扩增产物并置于全自动杂交仪上进行杂交反应，采用生物芯片识读仪读取基因芯片数据，采用基因芯片分析软件分析MTHFR C677T位点基因多态性。

1.4 观察指标 比较不同基因型患者高血压分级，治疗前后血浆Hcy水平、颈动脉粥样硬化斑块积分及不稳定斑块检出率。血浆Hcy水平检测方法：分别于治疗前、后采集所有患者空腹外周静脉血3 ml，2 000 r/min离心5 min，分离血浆并放置-20 ℃冰箱中保存；采用全自动生化分析仪检测血浆Hcy水平，试剂盒购自南京建成生物科技有限公司。颈动脉超声检查：所有患者分别于治疗前、后进行颈动脉超声检查，斑块呈低回声或回声不均质定义为不稳定斑块，斑块呈强回声则定义为稳定斑块；颈动脉粥样硬化斑块积分采用Crouse积分，即两侧颈动脉每个斑块最大厚度之和，颈动脉粥样硬化斑块积分越高提示斑块稳定性越差。

1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行数据分析，计量资料以（x± s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料分析采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高血压分级 146例患者中CC基因型26例（占17.8%），CT基因型46例（占31.5%），TT基因型74例（占50.7%）。不同基因型患者高血压分级比较，差异无统计学意义（χ2=0.641，P＞0.05，见表1）。

表1 不同基因型患者高血压分级比较〔n（%）〕Table 1 Comparison of hypertension grade in patients with different genotypes

2.2 血浆Hcy水平 治疗前、后不同基因型患者血浆Hcy水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗前、后TT基因型患者血浆Hcy水平高于CC基因型、CT基因型，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后CC基因型、CT基因型患者血浆Hcy水平低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

2.3 颈动脉粥样硬化斑块积分 治疗前、后不同基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗前、后TT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分高于CC基因型、CT基因型，CT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分高于CC基因型，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后CC基因型、CT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗前、后不同基因型患者颈动脉不稳定斑块检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表3）。

表2 不同基因型患者治疗前后血浆Hcy水平比较（x±s，μmol/L）Table 2 Comparison of plasma Hcy level in patients with different genotypes before and after treatment

表3 不同基因型患者治疗前后颈动脉粥样硬化斑块积分及不稳定斑块检出率比较Table 3 Comparison of carotid atherosclerotic plaque score and detection rate of unstable plaque before and after treatment

3 讨论

研究表明，我国高血压患者近80%存在血浆Hcy水平不同程度升高［7］，且血浆Hcy水平与高血压分级、动脉粥样硬化事件发生率呈正相关［8］，血浆Hcy水平可能是颈动脉粥样硬化的独立危险因素［9］。MTHFR是Hcy代谢的关键酶，其C677T位点基因由C向T突变可引起MTHFR活性降低［10］，携带TT基因型者MTHFR活性明显降低，仅为携带CC基因型者的一半，而携带CT基因型者MTHFR活性虽然有所降低，但与携带TT基因型者相比降低幅度较小［11］。MTHFR活性降低可抑制Hcy甲基化，继而造成血浆Hcy水平升高。

有学者对167例缺血性脑卒中患者MTHFR C677T位点基因多态性进行分析发现，MTHFR C677T位点TT基因型占34.7%［12］；对248例伴血浆Hcy水平＞21.35 μmol/L的急性冠脉综合征患者分析发现，MTHFR C677T位点TT基因型占67.7%［13］。本研究146例老年H型高血压患者中CC基因型占17.8%，CT基因型占31.5%，TT基因型占50.7%，与上述研究报道结果相符，提示老年H型高血压患者MTHFR C677T位点TT基因型所占比例较高，有可能是导致H型高血压及血浆Hcy水平升高的原因之一。

大量临床研究表明，体内叶酸、维生素B12含量与血浆Hcy水平呈负相关［14-16］，其中维生素B12是蛋氨酸合成酶的辅酶之一，在一定程度上可促进体内Hcy向蛋氨酸方向转化，但易受叶酸含量影响，叶酸含量降低会抑制Hcy向蛋氨酸转化，增加Hcy在体内的蓄积［17-18］，而补充外源性叶酸、维生素B12可有效降低血浆Hcy水平。樊敬峰等［19］研究发现，口服维生素B12可有效降低H型高血压患者血浆Hcy水平；一项Meta分析结果显示，中国人群中携带MTHFR C677T位点TT基因型者血浆Hcy水平高于携带CC、CT基因型者，叶酸含量低于携带CC、CT基因型者；补充外源性叶酸后血浆Hcy水平降低，其中携带MTHFR C677T位点TT基因型者叶酸含量升高程度、血浆Hcy水平降低程度均低于携带CC、CT基因型者［20］，提示MTHFR C677T位点为TT基因型者补充外源性叶酸的反应较差。本研究结果显示，治疗后CC基因型、CT基因型患者血浆Hcy水平低于治疗前，且治疗前、后TT型患者血浆Hcy水平高于CC基因型、CT基因型，与上述研究结果基本一致，提示叶酸联合维生素B12可有效降低老年H型高血压患者血浆Hcy水平，但在一定程度上受C677T位点基因多态性影响，TT基因型患者血浆Hcy水平降低效果不如CC基因型、CT基因型患者。

CAI等［21］研究发现，MTHFR C677T位点基因由C向T突变会诱导Hcy损伤血管；吴庆庆等［22］研究发现，MTHFR C677T位点TT基因型老年高血压患者颈动脉粥样硬化斑块检出率较高，提示MTHFR C677T位点基因突变可能是导致动脉粥样硬化事件的遗传因素。目前，国内外关于叶酸联合维生素B12改善老年H型高血压患者颈动脉粥样硬化斑块的研究报道较少［23］，本研究结果显示，治疗前、后TT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分高于CC基因型、CT基因型，CT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分高于CC基因型，治疗后CC基因型、CT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分低于治疗前，而治疗前、后不同基因型患者颈动脉不稳定斑块检出率间无差异，提示叶酸联合维生素B12降低老年H型高血压患者颈动脉血管粥样硬化斑块积分，但在一定程度上受MTHFR C677T位点基因多态性影响，TT基因型患者颈动脉粥样硬化斑块积分降低效果不如CC、CT基因型患者。

综上所述，叶酸联合维生素B12降低老年H型高血压患者血浆Hcy水平、颈动脉粥样硬化斑块积分的效果与MTHFR C677T位点基因多态性有关，其中TT基因型患者的降低效果不如CC基因型、CT基因型，临床应当考虑遗传因素和基因多态性，尽可能实现个体化、早期干预，减少高同型半胱氨酸血症所致心脑血管并发症的发生；但本研究样本量较小、基因位点单一，结果结论仍需进一步扩大样本量、增加基因点深入研究，为实现老年H型高血压患者的个体化治疗及精准治疗提供参考。

作者贡献：张翠进行试验设计与实施、资料收集整理、负责撰写论文并对文章负责；司君增进行试验实施、评估、资料收集；郑立峰进行质量控制及审校。

本文无利益冲突。