美国药典重修了紫外/可见光谱的检测方法和验收标准

文/Thomas Brenn

美国药典重新修订的第857章，规定了紫外/可见光谱的检测方法和验收标准 // 美国药典是欧洲药典的对照版。重新修订的检测方法和验收标准，国际上所有的制药企业都可能受到它的影响。具体都是些什么规定呢？

缩写为USP的美国药典是美利坚合众国的官方药典。其新修订的第857章规定了紫外/可见光谱的测试方法和验收标准。自2016年5月1日起，这一章节的规定对所有向美国市场出口药物的国际制药公司都开始生效了。

新版美国药典第857章的既定目标是：确定用户使用紫外/可见分光光度计时的检测方法和验收标准，确保符合预期用途（OQ，操作认证）。另外，这些检验方法应保证所使用的检测仪在使用期间能够提供正确的检测数据（PQ，性能认证）。

美国药典第857章中规定的检验方法和标准物质如下：

■验证波长的准确性：240～650纳米波长用钬，//730～870纳米波长用钕镨化合物（新）

图1 利用液体滤光片检验分光光度计。

■验证光度计的准确性，至3吸收等级：//紫外线波长范围内用高氯酸中的重铬酸钾（0-200mg / l），//可见光范围用带中性玻璃的滤波光片

■ 散射光检查：//190～205纳米波长时用溶于水中的氯化钾，//210～259纳米波长时用 溶 于水中的碘化钾或者碘化钠，//250～320纳米波长用丙酮，//300～385纳米波长用溶于水的亚硝酸钠

■分辨率验证：//0.5～3.0纳米光谱范围内用乙烷中的甲苯

■美国药典建议：使用生产厂家推荐的、经过认证的标准物质来执行这些检测认证。例如Hellma分析技术公司的产品和诸如国家计量机构（美国）NIST和（德国）PTB推荐的方法。

新版药典没有为某种检查方法定义一种必须使用的检查方案，相反是列出了每种测试方法可能的解决方案。这就赋予用户一项责任：自己选择检测验证时所需的解决方案。药典规定的要求就是：应定期的检测验证规定的操作领域（在预先设定的操作范围内）。这样一来，用户的紫外线和可见光分光光度计的验证就会因标准物质和检验方法的不同组合而各不相同了；并且有下列两个基本问题：预期应用领域的检测分析包括了...

■哪个波长范围？

■哪个吸收区域？

图2 两个分辨率完全一样的滤光片，层厚不同，但外形尺寸相同。

LP本刊提示

美国药典857章

美国药典857章的既定目标是：建立测试方法和验收标准，确保用户使用的紫外线/可见光分光光度计适用于在规定的用途中使用（OQ，操作认证）。另外，这些检测方法也应该是有保证的。所使用的光学检测设备在使用操作期内应能提供正确的检测值（PQ，性能认证）。美国药典规定的检测方法和标准物质为：

1.验证波长准确度;

2.验证光度精度达3 级吸收等级;

3.检查杂散光;

4.分辨率检验。

表1 要求的精度取决于波长范围

表2 要求的精度取决于吸收和波长范围

表3 标准偏差

波长准确性的检测验证

波长准确性检测验证的目的是确保预期应用领域中的（X轴）波长标度在规定的公差范围之内。不同波长范围内用户所有检测仪要求的波长公差参见表1。

■在波长240～640纳米范围内，美国药典第857章建议使用高氯酸溶液滤光片（溶解在高氯酸中的氧化钬），并在下列峰值处检测波长的准确性：241,250,278,287,33 3,345,361,386,416,451,468,485,536,640纳米。

■波长范围大于640纳米时，美国药典第857章建议使用高氯酸溶液（溶解在高氯酸中的钕镨化合物），并在下列峰值处检测波长的准确性：732,740,794,799和864纳米。

光度计的准确性的检测验证

这一检测验证的目的是：验证在预期应用领域至3吸收等级时吸收值的正确性、精度和线性度。美国药典第857章要求的、与吸收值和波长范围有关的准确性数据参见表2。

■美国药典第857章建议采用重铬酸钾液体滤光片（溶解在高氯酸中的重铬酸钾）来检查紫外线范围内的光度测量精度。应根据需要使用浓度0-200mg / l（相当于0-3 吸收等级）。在下列峰值处检测紫外线的范围：235, 257, 313, 350纳米。

■为了检测可见光范围内的光度计测量精度，美国药典第857章建议使用中性玻璃滤光片，根据需要最多可以使用3个吸收等级。在系列峰值处检测可见光的波长范围：440, 465, 546,1, 590, 635纳米。

为测定所有仪器的光度精度，美国药典建议在两个或者更多的吸收等级（在规定的使用范围内）进行至少六次重复检测，并确定每一次检测的标准偏差。在这种情况下应满足表3规定的标准偏差值。

表4 散射光检测时的标准物质

美国药典第857章规定的散射光检查

不希望出现的散射光可以对光的吸收检测带来不利影响。经验表明：随着光度计中光学元器件和发光灯泡的老化，散射光的比例会不断增大。散射光检测的目的是：定期的监测散射光值，以便在必要时及时的采取有效措施。

美国药典第857章规定：为了检测散射光值，用户必须检测规定应用范围内的光波波长。检测散射光时，美国药典第857章规定的、在一定波长范围允许使用的标准物质参见表4。也就是说：如果用户在波长范围190至400纳米内检测散射光值时就要定期的列出的四个波长区域内的散射光值。

药典还介绍了一种全新的散射光值检测方法：这种方法需要两个分辨率完全一样的滤光片，一个是标准的滤光片，层厚10毫米；另一个是参考滤光片，层厚5毫米。

应按照美国药典857章规定的计算公式计算散射光值：

Sλ=光线波长λ计算确定的散射光值

Aλ=光线波长λ时检测到吸收量

验收标准：

Sλ≤0.01和Aλ≥0.7吸收等级

日常实践经验证明：这种方法检测到的数据与检测仪器设备之间有着很强的依赖性；即：峰值作用的波长取决于检测仪器设备的类型和功率。因此，对用户来讲最重要的是要知道：检测区域内测得的最大吸收率对这种检测方法有着决定性的意义，并且应该≥0.7吸收等级。

分辨率的验证

如果分光光度计的分辨率受损，两个彼此靠近的峰值可能会出现混合峰值，从而导致读数错误。因此，定期审核验证是至关重要的。

美国药典857章建议：用甲苯溶解在乙烷中的溶液作为乙烷的参照溶液进行检测，建议采用的检测方法如下：

■波长大约269和266纳米时，在甲苯-乙烷溶液和参照液体乙烷液中检测得到的最大值和最小值之间的比例。

■测得的吸收比取决于检测仪表的光谱带宽。美国药典第857章规定：大多数医用分析的光谱带宽采用2纳米就足够了。验收标准是：最大吸收比为1.3。