一种复配黏膜消毒剂杀灭微生物性能的研究

蒋邱逃 王嵬(通讯作者)

（1成都市武侯区疾病预防控制中心 四川 成都 610041）

（2江苏省疾病预防控制中心 江苏 南京 210009）

黏膜是一种重要的人体器官，可以直接或者间接的与外环境接触，可能受到各种有害微生物的侵犯。虽然人体也有正常菌群和皮肤黏膜屏障等防卫措施，可以使人体免于被那些临时污染的病原体致病，但当人体免疫力低下或者有外伤的情况下，外部的致病菌或者人体的条件致病菌也有可能导致疾病。因此，黏膜消毒剂应运而生，被广泛的应用于黏膜和创面消毒。本研究所使用的消毒剂是一种以硼酸和醋酸氯己定为主要成分的复配黏膜消毒剂，为了解其对不同微生物和皮肤自然菌的杀灭效果，在实验室进行了悬液定量杀菌实验和皮肤消毒现场试验研究以验证其性能。

1.材料和方法

1.1 材料

实验菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、大肠杆菌（8099）、铜绿假单胞菌（ATCC15442）和白色念珠菌（ATCC10231）均由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提供。37℃恒温培养箱为美墨尔特(上海)贸易有限公司产品，胰蛋白大豆琼脂培养基和沙堡葡萄糖琼脂为北京路桥技术有限责任公司产品。

1.2 方法[1]

1.2.1 实验菌悬液制备 取四种试验菌第6代的24h新鲜培养物，用稀释液（PBS）稀释至适当的浓度并与有机干扰物（30g/L小牛血清白蛋白）溶液对倍稀释作为实验菌液，备用。

1.2.2 中和剂选择试验 选择金黄色葡萄球菌作为中和剂选择试验的指标菌，实验设六组，分别为：1组为消毒剂+菌悬液；2组为（消毒剂+菌悬液）+中和剂；3组为中和剂+菌悬液；4组为（消毒剂+中和剂）+菌悬液；5组为菌悬液+TPS对照；6组为对照组（稀释液、中和剂、培养基）。按中和剂选择试验程序进行，第1组不长菌或者远小于第2组，第3、4、5组有相似菌落数生长，且组间菌落数误差率不超过15%，第6组无菌生长。

1.2.3 悬液定量杀菌试验 试验在20℃水浴中进行。取1.0mL菌悬液与4.0mL消毒液混匀并计时，作用至预定时间后取0.5mL混合液至4.5mL中和剂中混匀，作用10分钟，进行10倍系列稀释，选择合适稀释度，分别取1.0mL接种至两块平皿中做活菌培养计数，计算杀灭对数值。

1.2.4 皮肤消毒现场试验 随机选择30名成年志愿者，让受试者前臂内侧相互充分搓擦，用1支棉拭子无菌蘸取中和剂采样液在左前臂内侧皮肤5cm×5cm面积内作涂抹采样；将采样后的棉拭子投入到5mL中和剂采样液试管内作为阳性对照组；用该消毒液原液对右前臂内侧皮肤进行擦拭消毒并保持作用3min，用同样方法进行消毒后试验组采样，将棉拭投入到5mL含中和剂采样液试管内。将各组采样标本进行充分振荡洗脱，取洗脱液进行活菌计数,计算对自然菌杀灭对数值。

2.结果

2.1 中和剂选择试验结果

结果表明，用含1%硫代硫酸钠、1%软磷脂、1%吐温-80的TSB作为中和剂，能有效终止含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液的残留作用，中和剂和中和产物对受试菌和培养基均无不良影响（表1）。

表1 中和剂选择试验结果

2.2 定量杀菌试验结果

结果表明，含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液作用1.5分钟，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的杀灭对数值均大于5.00，对照组菌落对数值分别为7.36、7.29、7.04；消毒剂原液作用1.5分钟，对白色念珠菌的杀灭对数值大于4.00，对照组菌落对数值为6.51。符合消毒剂定量杀菌试验的要求（表2）。

2.3 皮肤消毒现场试验

含有2%硼酸和0.23%醋酸氯己定的消毒液对志愿者前臂内侧皮肤擦拭消毒3分钟，对皮肤表面的自然菌平均杀灭对数值大于1.00。消毒后的皮肤上残留的平均菌落数为3cfu/cm2，对照组皮肤上残留的平均菌落数为357cfu/cm2,符合皮肤消毒现场试验的要求。

表2 定量杀菌试验结果

3.讨论

硼酸和醋酸氯己定作为黏膜消毒剂都有一定的历史。硼酸具有消炎和抑菌的效果，和廖香草酚及普鲁卡因等成分复配，常用来治疗口腔糜烂、牙龈炎、牙周炎及术后辅助治疗[2、4]。许万祥等人的研究证明[3]，硼酸对昆明系雌性小鼠经口染毒LD50为3749.73mg/kg，属于低毒化合物。卢勇涛等人的研究表明[4]，复方硼酸含漱液的毒性试验显示其无口腔黏膜刺激性和致敏性。所以，只要不是口服而作为皮肤黏膜消毒剂的低剂量的硼酸对人体的危害有限，但仍需关注使用时是否有相关的炎症或者疾病的发生。醋酸氯己定是氯己定的醋酸盐，从20世纪50年代即已用于手、皮肤和黏膜的消毒。因其杀菌效果好、性能稳定、对人体毒性小、使用方便等优点，在黏膜消毒剂的使用中一直占有一定的地位[5]。

本研究中使用的消毒剂是2%硼酸和0.23%醋酸氯己定复配的消毒剂，既有硼酸的抑菌作用，又具有醋酸氯己定的低效、作用时间长的消毒功能，在试验中对三种细菌繁殖体和一种真菌作用1.5分钟的杀灭对数值都达到了定量杀菌试验的要求；在皮肤消毒现场试验中，作用3分钟的平均杀灭对数值大于1.0，以上试验结果均符合GB27954-2011《黏膜消毒剂通用要求》的要求。综上所述，这种黏膜消毒剂是一种快速、杀菌效果好、可用于黏膜消毒并且安全性较好的黏膜消毒剂。