芩枳丸多指标成分含量测定研究△

白雪洁，于淼，刘秀华

(1.长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2.长春三德天晟科技有限公司，吉林 长春 130012；3.吉林省吉测检测技术有限公司，吉林 长春 130117)

1 仪器与试剂

Agilent 1220型高效液相色谱仪(美国安捷伦)；KQ-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；ME204E电子天平(梅特勒-托利多)。

纯净水(娃哈哈)，甲醇(色谱纯)，其他试剂均为分析纯。橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚对照品(含量均大于99%，批号分别为110721-201014、110715-201016、111595-200905、110756-200110、110796-201017，中国食品药品检定研究院)。芩枳丸(规格为：5.4 g/袋；批号分别为S1：V01020，S2：V01021，S3：V01022，S4：V01023，S5：V01024，S6：T01005，S7：T01006，S8：T01007，S9：T01008，S10：T01009)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent 1220型高效液相色谱仪，Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5m)色谱柱；进样量：10 μL；柱温：25 ℃；检测波长：260 nm；流动相：甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)；流速：1.0 mL·min-1。

表1 梯度洗脱程序

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 取芩枳丸1袋，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液制备 分别精密称取橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚对照品适量，精密称定，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1.0 mL置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.060、0.098、0.008、0.012、0.025 mg·mL-1的混合对照品溶液。

2.3 多指标含量测定方法学

2.3.1 线性关系考察 分别吸取2.2.2混合对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，按2.1项下色谱条件进行测定，以各对照品的进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，计算得线性方程。结果表明各对照品在相应进样量范围内线性关系良好。

表2 回归方程与线性范围

2.3.2 稳定性试验 取同一供试品(S3)溶液，分别于0、4、8、12、24、48 h按2.1项下色谱条件进行测定，结果橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚含量的RSD分别为1.2%、0.7%、1.6%、1.4%、1.3%。

2.3.3 精密度试验 取同一供试品(S3)溶液，按2.1项下色谱条件下连续进样6次，结果橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚含量的RSD分别为1.1%、0.6%、1.1%、1.2%、1.2%。

2.3.4 重复性试验 取同一供试品(S3)按2.2.1项下方法制备6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，结果橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚含量的RSD分别为1.7%、0.9%、1.4%、1.2%、1.4%。

2.3.5 加样回收率试验 分别精密称取橙皮苷对照品17.54 mg、黄芩苷对照品32.02 mg、黄芩素对照品2.82 mg、大黄素对照品3.14 mg、大黄酚对照品7.52 mg于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。取已知含量的同一批芩枳丸(S3)6份各约0.25 g，精密称定，分别加入上述橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚混合对照品1 mL，按2.2.1项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，进行加样回收率考察，橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚的平均回收率结果见表3。

2.3.6 样品含量测定 精密称取10批芩枳丸样品，分别按2.2.1项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚的含量，结果见表4。

表3 芩枳丸中5种成分加样回收率试验( n=6)

表4 10批芩枳丸中5种成分含量测定结果

注：A.混合对照品溶液；B.供试品溶液；1.橙皮苷；2.黄芩苷；3.黄芩素；4.大黄素；5.大黄酚。图1 芩枳丸及对照品高效液相色谱图

3 讨论

本实验分别对乙腈-磷酸溶液及甲醇-磷酸溶液作为流动相进行了考察[5-9]，甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相的梯度洗脱系统，洗脱能力强，色谱信息量大，分离度较好，因此选择甲醇-0.1%磷酸溶作为流动相系统。考察了不同厂家及型号的色谱柱，Diamonsil(钻石)C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、ACE C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，选定了Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，该色谱柱对芩枳丸的分离效果较好。采用二极管阵列检测器进行全波长检测，在260 nm时，各峰比例适中，故选择以 260 nm作为检测波长。

本方法操作简便，结果准确，可用于同时测定芩枳丸中橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚的含量。