规模化猪场猪瘟免疫程序优化研究

赵 海

（辽宁省大连市甘井子区动物卫生监督所，辽宁 大连 116031）

张建勋等[1]对辽宁地区15家规模化养殖场的150头1月龄未免疫仔猪进行猪瘟隐性感染情况血清学调查发现，辽宁地区猪瘟隐性感染率为36%，与国内其他地区研究结果相比，辽宁地区感染率数中等偏高水平。综合辽宁地区近几年猪瘟免疫成果发现，影响猪瘟疫苗免疫效果较大的因素有首免时间、免疫抑制因素、免疫程序的问题。从辽宁省2012～2013年的检测结果看，由于免疫程序存在差异，散养猪只是春秋集中免疫，种猪场和商品猪场采用程序免疫方案，种猪场和商品猪场明显高于散养猪的免疫合格率[2]。本试验通过选取大连地区某规模化猪场年龄、体重相近、品种相同的仔猪筛选首免和二免时间与剂量，优化规模化猪瘟免疫程序。

1 材料与方法

1.1 试验动物种类及其数量选择大连地区3个规模化猪场（即A场、B场、C场），选取年龄、体重相近的母猪，试验前进行猪瘟空免1个周期，其所产新生仔猪猪场A、B各250头，猪场C 50头，共550只，品种为杜洛克。

1.2 试验试剂猪瘟病毒抗体检测试剂盒：北京爱德士元亨生物科技有限公司。

1.3 试验疫苗猪瘟活疫苗（传代细胞源）：规格：20头份/瓶，每头份至少含10 000个兔体感染量，批准文号：兽药生字（2016）190591084。

1.4 试验动物的饲养与管理 各试验组仔猪分圈饲养，试验全过程按照两个规模化猪场常规标准饲养管理模式进行，保持良好通风，每日清理圈舍，定时饲喂，自由饮水。各试验组仔猪的饲养管理方法和环境条件完全一致。

1.5 主要试验器材与仪器消毒药品、采血管、注射器、针头、药棉、消毒设备、移液器、枪头、板膜、吸水纸、数显恒温培养箱、离心机、酶标仪等。

1.6 试验分组设计

1.6.1 确定猪瘟优化免疫程序猪场A、B选取体重、年龄相近的新生仔猪，各150头，品种为杜洛克，随机均分为3组，即试验1、2组为不免疫母源抗体消长规律监测组。分别在出生后第1 d、7 d、21 d、28 d、35 d进行前腔静脉采血，分离血清，监测仔猪母源猪瘟抗体水平消长规律及抗体阳性率变化。试验3、5组为2头份组，试验4、6组为4头份组，将仔猪母源猪瘟抗体水平下降临界点作为首免时间，监测首免后第7 d、21 d、35 d、42 d抗体水平变化，筛选二次免疫时间及免疫剂量，确定猪瘟优化免疫程序。

1.6.2 验证优化的猪瘟免疫程序猪场A、B、C分别选择年龄、体重相近的新生仔猪各50头，品种为杜洛克，共150头，即免疫优化A组、B组、C组。21日龄首免2头份，56日龄二免4头份，分别在免疫后第35 d、49 d、63 d、77 d、91 d、105 d、119 d监测仔猪猪瘟抗体水平变化。

1.7 样品的处理与保存方法 分别于前腔静脉采集试验组仔猪5 mL/头血液，用高速冷冻离心机4 000 r/min离心10 min，取上层血清分装，于-20℃避光保存至分析。检测前，将血清与试剂盒恢复至室温方可使用。

1.8 样品的检测方法

1.8.1 原理IDEXX猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒。该试剂盒是用病毒抗原包被的微量反应板，利用阻断ELISA原理来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体。

1.8.2 数据统计与分析方法阴性对照的平均OD450大于0.500，阳性对照的阻断率大于50%，该检测结果有效。若试验不成立，有可能是试验操作失误造成，应严格按照说明书再检测1次。

1.9 数据统计与分析Excel统计表整理数据，SPSS Statistics 17.0配对样本T检验进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 猪场 A、 B仔猪母源猪瘟抗体水平消长规律及抗体合格率变化猪场A、B不免疫母源抗体消长规律监测组仔猪1日龄母源猪瘟抗体合格率最高，分别为90%、86%，但猪瘟抗体水平未达到100%保护，母源猪瘟抗体水平随日龄的增加而相应降低，第21日龄母源猪瘟抗体合格率为76%、72%，则根据抗体消长半衰期检测，在第28日龄时仔猪母源猪瘟抗体合格率低于国家70%合格率的要求，因此，21日龄作为首次免疫时间（见表1）。

2.2 猪场 A、 B仔猪首免后猪瘟抗体水平消长规律及抗体合格率变化经统计发现，猪场A、B仔猪首免后，猪瘟抗体合格率均在第42天（即63日龄）时低于国家合格率70%的要求，即首免后第35天（即56日龄）作为二次免疫时间。比较2头份组和4头份组猪瘟抗体合格率发现，2头份组猪瘟抗体合格率整体高于4头份组猪瘟抗体合格率，说明仔猪首免2头份剂量产生猪瘟抗体水平较好（见表2、表3）。

表1 猪场A、B试验1、2组（不免疫母源抗体消长规律监测组）仔猪母源猪瘟抗体合格率变化Table 1Change of the rate of maternal classical swine fever antibody in one and two field tests in group A、B(monitoring group of growth and decline of maternal immune antibodies)

表2 猪场A试验3、4组（2头份组和4头份组）仔猪猪瘟抗体合格率比较Table 2Comparison of pigs'antibody rate of piglets in group 3 and 4(2 and 4 groups)pig farm A trials

表3 猪场B试验5、6组（2头份组和4头份组）仔猪猪瘟抗体合格率比较Table 3 Comparison of pigs'antibody rate of piglets in group 5 and 6(2 and 4 groups)pig farm B trials

2.3 猪场A、 B原有猪瘟免疫程序仔猪猪瘟抗体水平消长规律 猪场A超前免疫对照组免疫程序为首免超前免疫，35日龄二次免疫，乳前免疫猪瘟活疫苗2头份，免疫后1日龄仔猪猪瘟抗体水平达到最高，合格率为92%，随着日龄的增大，仔猪猪瘟抗体合格率相应降低，二次免疫猪瘟活疫苗2头份后，仔猪猪瘟抗体水平有所上升，但难以维持较高的水平，猪瘟抗体合格率逐渐低于国家70%的合格率要求（见表4）。

猪场B常规免疫对照组免疫程序为首免28日龄，70日龄二次免疫，28日龄首免猪瘟活疫苗2头份，免疫后仔猪猪瘟抗体水平达到最高，合格率为94%，随着日龄的增大，仔猪猪瘟抗体合格率逐渐降低，二次免疫猪瘟活疫苗2头份后，仔猪猪瘟抗体水平有所上升，但难以维持较高的水平，猪瘟抗体合格率逐渐低于国家70%的合格率要求（见表5）。

2.4 验证试验猪场A、B、C在21日龄首免猪瘟活疫苗2头份，56日龄进行二次加强免疫猪瘟活疫苗4头份，仔猪猪瘟抗体合格率变化（见表6）。

2.5 原场免疫程序与优化免疫程序效果比较统计发现，首免与二免后，猪场A优化的免疫程序抗体水平极显著（P＜0.01）高于原场免疫程序；首免后与二免后7 d，猪场B优化的免疫程序猪瘟抗体水平显著（P＜0.05）高于原场免疫程序，二免后21 d、35 d、49 d，猪场B优化的免疫程序猪瘟抗体水平极显著（P＜0.01）高于原场免疫程序（见表7）。

表4 猪场A超前免疫对照组仔猪猪瘟抗体合格率变化Table 4 Changes in the passing rate of swine fever antibody in piglets with a pre-immune control group

表5 猪场B常规免疫对照组仔猪猪瘟抗体合格率变化Table 5 Changes of the passing rate of swine fever antibody in piglets with routine immunization in pig farm B

表6 猪场A、B、C优化猪瘟免疫程序猪瘟抗体合格率变化Table 6 Pig farm A,B,C optimization of swine fever immunization program swine fever antibody pass rate change

图1 猪场A、B、C优化猪瘟免疫程序猪瘟抗体水平变化Fig.1 Pig farm A,B,C optimization of swine fever immunization program swine fever antibody level changes

表7 猪场A、B前后免疫程序猪瘟抗体合格率的比较Table 7 Comparison of Passion Rate of Classical Swine Fever Antibody in A and B farms

3 讨论

3.1 猪场 A、B仔猪母源猪瘟抗体水平消长规律与抗体合格率变化分析仔猪通过吮吸母猪的初乳，被动地获得母源猪瘟抗体的保护，即获得性免疫[3]。仔猪母源猪瘟抗体水平较高会中和猪瘟疫苗而不产生猪瘟抗体，间接影响猪瘟疫苗免疫效果，若在仔猪母源猪瘟抗体水平过低后首免会出现免疫空白期，易受环境中猪瘟病毒的感染[4]。因此，最佳首免日龄是仔猪母源猪瘟抗体水平降到最低临界保护值，一方面避免母源抗体的干扰，另一方面维持血清抗体效价[5]。据报道，由于母猪免疫猪瘟疫苗的时间和机体免疫应答的能力不同，母源抗体持续的时间不尽相同，一般母源猪瘟抗体的半衰期为14 d左右[6-7]。母源猪瘟抗体水平随着仔猪日龄的增加逐渐从高水平下降至临界保护水平（抗体阳性率50%，平均阻断率40%），一般母源抗体对仔猪的保护周期在28～42 d之间，谭良溪等[8]的研究与张新成等[6]所报道基本一致。

本试验通过猪场A、B仔猪母源猪瘟抗体水平消长规律测定发现，猪场A、B不免疫母源抗体消长规律监测组仔猪1日龄母源猪瘟抗体合格率最高分别为90%、86%，在21日龄猪瘟抗体合格率高于国家合格率70%的要求，35日龄猪瘟抗体合格率低于国家合格率70%的要求，检测半衰期28日龄仔猪母源猪瘟抗体合格率均低于国家70%合格率的要求，因此，21日龄作为首次免疫时间。罗先等[9]试验结果发现，仔猪出生后血清猪瘟抗体阳性率在5～10日龄间可达到100%，15日龄后血清猪瘟抗体阳性率逐渐降低，在25日龄左右达到临界保护值。Vandeputte等[10]试验发现，仔猪哺乳2h后就可以检测到母源猪瘟抗体且持续49日龄以上。陈西钊等[11]利用正向间接凝血抑制试验检测新生仔猪血清母源猪瘟抗体水平，结果发现，20～25日龄时，所有仔猪母源猪瘟抗体水平均在保护值以上，20日龄仔猪母源猪瘟抗体阳性率达到92.8%，25日龄仔猪母源猪瘟抗体阳性率下降到62.5%，可能与仔猪21日龄断奶有关。母猪通过乳汁将母源抗体传递给仔猪，而仔猪母源猪瘟抗体水平持续时间与母猪自身猪瘟抗体水平及仔猪吃初乳情况有关[12]。陈明凯等[13]研究，仔猪比较适合免疫的时机在低母源抗体情况下，随着免疫剂量的增加，抗体阳性率不断升高，抗体离散度也不断缩小，四组免疫组在免疫两次传代细胞源猪瘟活疫苗后，1头份的免疫剂量抗体阳性率和离散度是最好的。因此，本试验监测母源猪瘟抗体水平仔猪在21～35日龄迅速下降，且本地区生猪饲养中，仔猪一般在21日龄断奶，为保证仔猪机体猪瘟抗体水平，且不受猪瘟病毒感染，仔猪最佳首免日龄在21日龄，避免首免日龄过晚，出现免疫空白期。

本试验结果与李儒曙等[14]、李明义等[15]、罗勇等[16]研究猪瘟母源抗体消长规律的试验结果相似，于21日龄首次免疫猪瘟疫苗。但也与某些试验结果不同，在于猪的品种、饲养管理模式、检测试剂盒等因素的影响。

3.2 猪场A、 B仔猪首免后猪瘟抗体水平消长规律及抗体合格率变化分析猪场A、B仔猪在21日龄首免后第7天（即28日龄），仔猪猪瘟抗体合格率最高，随着日龄增加，猪瘟抗体合格率相应下降，在首免后第35天（即56日龄）猪瘟抗体合格率高于国家合格率70%的要求，半衰期第42天（即63日龄），猪瘟抗体合格率低于国家70%合格率的要求，有受猪瘟病毒感染的风险，因此，需要进行二次加强免疫，提高仔猪猪瘟抗体水平，避免猪瘟病毒侵袭猪群，即首免后35 d（即56日龄）作为二次免疫时间。2000版《中国兽用生物制品规程》中明确猪瘟疫苗推荐免疫程序，即无猪瘟疫病流行地区，仔猪断奶后体内无母源抗体，接种猪瘟疫苗一次即可；若是猪瘟疫病流行地区，仔猪在21～30日龄和65日龄左右分别接种猪瘟疫苗一次。本试验优化的猪瘟免疫程序为首免21日龄，二免56日龄，此免疫程序与《中国兽用生物制品规程》相近。陈果亮[17]研究规模化猪场猪瘟疫苗群体免疫程序试验发现，免疫程序为21～56日龄免疫试验小组，试验组内个体在一免和二免后抗体都呈上升趋势，试验指出，在抗体阴性群体中，21日龄首免是可行的，首免和二次加强免疫时隔3周以上，免疫效果都是可行的，这与本试验结果相似。

3.3 猪场A、 B仔猪原有猪瘟免疫抗体水平消长规律分析猪场A、B超前免疫对照组、常规免疫对照组仔猪猪瘟免疫程序免疫，首免后，随着日龄的增大，仔猪猪瘟抗体合格率相应降低，二次免疫后，仔猪猪瘟抗体水平有所上升，但仔猪猪瘟抗体合格率相应降低，且难以维持较高而稳定的猪瘟抗体水平。因此，说明猪场A、B原有猪瘟免疫程序不适合该场仔猪免疫，免疫效果不理想。

新生仔猪吃初乳前注射猪瘟疫苗，称之为“乳前免疫”或“零时免疫”，可达到弥补仔猪母源猪瘟抗体不足的情况，预防仔猪初生因体内母源猪瘟抗体不足而感染猪瘟病毒[18]。猪场A采用超前免疫的方法，可避免母源猪瘟抗体的干扰，但随着仔猪日龄的增长，猪瘟抗体水平不断下降，难以抵御猪瘟感染的风险，因此，35日龄加强免疫，但仔猪猪瘟抗体水平不能稳定维持在高水平上。张大华等[19]通过ELISA检测方法对比三种猪瘟疫苗免疫程序的研究结果显示，仔猪超前免疫（0，60）的免疫效果优于其他方法。曲哲会等[20]通过比较三种猪瘟疫苗免疫程序的研究结果显示，仔猪（0，35，75）的免疫效果优于其他方法。由此说明，猪场A采用超前免疫虽然可更大程度的保护仔猪不受猪瘟感染，但二次加强免疫时间过早，不利于仔猪产生猪瘟抗体，而后再不进一步加强免疫，就造成仔猪猪瘟抗体水平难以稳定且不断下降。许多研究也表明，由于新生仔猪免疫器官发育不健全，超前免疫存在诸多的风险，如造成仔猪免疫副反应[21]、阻碍仔猪生长发育等。严达伟等[22]研究，仔猪14～28日龄为防治猪瘟的一个空白区，为防止仔猪感染猪瘟，正常仔猪猪瘟最佳首免日龄应在14～28日龄。猪场B仔猪猪瘟抗体水平随日龄降低，且不能稳定维持较高猪瘟抗体水平，可能是由于首免时间过晚，仔猪体内母源猪瘟抗体水平随日龄降低，达不到保护力。

综上所述，为达到更好的仔猪猪瘟免疫效果，既要选择优质的猪瘟疫苗，又要根据母猪自身抗体水平和仔猪母源抗体水平，综合制定合适的仔猪猪瘟免疫程序。

3.4 猪瘟免疫程序应用实践首免与二免后，猪场A优化的免疫程序抗体水平极显著（P＜0.01）高于原场免疫程序；首免后与二免后7d，猪场B优化的免疫程序猪瘟抗体水平显著（P＜0.05）高于原场免疫程序，二免后21 d、35 d、49 d，猪场B优化的免疫程序猪瘟抗体水平极显著（P＜0.01）高于原场免疫程序，说明优化的猪瘟免疫程序较原场免疫程序好，仔猪不受母源抗体的干扰，产生较高且稳定的猪瘟抗体水平，具有较好的抗猪瘟感染的保护力。罗勇等[16]研究对各试验猪场进行超免和不超免的免疫程序的对比，发现猪瘟进行超免不会影响母源猪瘟抗体水平，但会导致哺乳仔猪在较长的时间里保持较高的猪瘟抗体水平，建议推迟首免时间，在60日龄左右进行加强免疫，生产猪群均产生较高的猪瘟抗体水平和免疫合格率，这些均与本试验结果相似，说明优化的猪瘟免疫程序较好，免疫后产生的猪瘟抗体具有较好的抗猪瘟感染的保护力。严达伟等[22]研究，正常仔猪猪瘟最佳首免日龄在14～28日龄。

试验优化的猪瘟免疫程序，仔猪猪瘟抗体合格率维持在一个较高的水平上。陈明凯等[13]研究发现，在母源抗体水平较低的情况下免疫猪瘟传代细胞源活疫苗，二免前猪瘟抗体水平呈略微上升或下降的趋势，二免后猪瘟抗体水平呈快速上升的趋势。查云峰等[23]研究发现，仔猪二免后，猪瘟抗体水平整体呈上升趋势，猪瘟抗体合格率均在80%以上。这些试验结果与本试验结果相似。

猪场C按照优化免疫程序进行猪瘟免疫后，机体猪瘟抗体水平维持在较高且稳定的水平上，符合国家70%合格率的要求，说明优化的猪瘟免疫程序可以在该地区选择应用。

4 结论

确定优化猪瘟免疫程序为首免21日龄，免疫剂量为2头份，二免56日龄，免疫剂量为4头份。二次加强免疫后，仔猪猪瘟抗体维持在较高的水平上，合格率高于国家要求的70%以上标准，持续监测发现，猪瘟抗体水平可维持112 d。