透明质酸、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体-3和高尔基蛋白73联合检测在肝脏疾病诊断中的价值*

胡恒贵，秦淑国，欧雁冰，方高洁

(皖北煤电集团总医院检验科，安徽宿州 234000)

原发性肝癌是人体常见的恶性肿瘤，并有逐年上升趋势，其中肝细胞癌占95%以上，病情进展快，恶性程度高，治疗难度大。原发性肝癌在早期无明显的临床症状，当出现临床症状时已经是中晚期，已错过了手术的机会[1]。临床上对于原发性肝癌的预警尤为重要[2]。如何早发现、早诊断、早治疗原发性肝癌是当前医疗技术急需解决的问题。多种血清肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断具有重要价值，可以弥补单一项目灵敏度和特异度低的不足。本研究主要通过对甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体-3(AFP-L3)、高尔基蛋白73(GP73)和透明质酸(HA)血清水平进行检测分析，进一步探讨这4项指标单一检测及联合检测对原发性肝癌的诊断及与其他肝病的鉴别价值。

1　资料与方法

1.1一般资料收集2014年1至2016年7月在本院进行治疗的122例肝病患者的临床资料和血清学检测结果。依据肝病种类分组：原发性肝癌组36例，其中男21例、女15例，年龄42～73岁；肝硬化组46例，其中男33例、女13例，年龄25～72岁；慢性肝炎组40例，其中男25例、女15例，年龄27～59岁。各类肝病患者均经临床结合免疫学、B超、CT检查确诊。肝硬化和肝炎的诊断参照2010年中华医学会肝病分会、感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》的标准[3]。原发性肝癌患者均经过超声影像学、病理组织证实，诊断符合全国肝癌学术会议制订的《原发性肝癌临床诊断与分期标准》[4]。选取同期健康体检者50例作为对照组，其中男35例、女15例，年龄31～77岁。4组研究对象的性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器及方法所有被检测者均在早晨采集空腹静脉血3 mL，标本经3 000 r/min离心10 min，分离血清后于当日完成检测。GP73检测试剂和耦联有小扁豆凝集素微球的AFP-L3亲和吸附离心管由北京热景生物技术有限公司提供。AFP-L3的纯化按照参考文献[5]进行，HA、原始血清AFP和纯化后AFP-L3检测由深圳新产业化学发光分析仪完成，仪器配套试剂由该公司提供，GP73检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，具体操作方法均参照试剂盒进行严格操作。

2　结　　果

2．14组间HA、AFP、AFP-L3、GP73水平的比较原发性肝癌组的HA、AFP、AFP-L3、GP73水平较慢性肝炎组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；原发性肝癌组的AFP、AFP-L3水平较肝硬化组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；原发性肝癌组的HA、GP73水平与肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05)；肝硬化组的HA、AFP、AFP-L3、GP73水平较慢性肝炎组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2ROC曲线分析结果以非肝癌患者为对照，绘制HA、AFP、AFP-L3、GP73在原发性肝癌诊断中的ROC曲线，见图1。HA、AFP、AFP-L3、GP73的临界值分别为216.3 ng/mL、314.1 IU/mL、26.8 IU/mL和137.4 ng/mL，曲线下面积(AUC)分别为0.691、0.712、0.790和0.611。

图1　以非肝癌血清标本为对照，各项指标诊断原发性肝癌的ROC曲线分析

表1　　4组研究对象中HA、AFP、AFP-L3、GP73水平比较

注：与慢性肝炎组比较，*P<0．05；与肝硬化组比较，△P<0．05

2．3各指标单项及联合检测对原发性肝癌的诊断价值从表2可以看出，单项检测中，AFP-L3灵敏度和特异度最高，分别为76.4%和83.1%。在联合检测中，HA、AFP、AFP-L3、GP73四项联合检测的灵敏度和特异度分别为89.5%和91.7%，高于其他任一组合。

表2　　HA、AFP、AFP-L3和GP73联合检测对原发性肝癌诊断价值比较

3　讨　　论

原发性肝癌的早期诊断缺乏金标准，肿瘤标志物联合检测在原发性肝癌的诊断中发挥着重要的作用。AFP是诊断原发性肝癌的传统标志物，广泛用于原发性肝癌的诊断、疗效监测，然而其诊断灵敏度、特异度均较低，有许多的原发性肝癌患者血清AFP持续浓度低值，而部分慢性肝炎和肝硬化患者AFP水平中度升高，所以AFP轻度、中度增高很难区分肝癌与良性肝病。本研究中，原发性肝癌组AFP的灵敏度为58.8%，特异度为77.9%，显示较低的灵敏度和特异度，在良、恶性肝脏肿瘤方面存在一定的局限性。

AFP根据与LCA的亲和力不同分为AFP-L1(主要存在于慢性肝炎和肝硬化患者)、AFP-L2(主要存在于孕妇)和AFP-L3(主要存在于细胞性肝癌患者)，AFP-L3为肝癌细胞特有。近年来AFP-L3越来越被国际公认为灵敏度高于AFP的诊断标志物，许多学者均对其诊断原发性肝癌的价值给予很高评价。有研究显示AFP-L3在诊断原发性肝癌时特异度达90.0%以上,灵敏度为70.0%～75.5%[6]。本研究也显示血清AFP-L3在诊断原发性肝癌的灵敏度为76.4%,特异度为83.1%，可见,AFP-L3在诊断原发性肝癌无论是灵敏度还是特异度都优于AFP,而且本研究显示，原发性肝癌组患者血清AFP-L3水平较肝硬化组和慢性肝炎组患者高，这一结果与文献[7]报道结果相似。本研究中AFP、AFP-L3联合检测的灵敏度为76.4%,特异度为86.1%，在特异度方面优于AFP。AFP、AFP-L3联合检测成为原发性肝癌诊断和诊疗、肝癌与良性肝病鉴别诊断的常用指标[8]。

GP73为高尔基体的一种跨膜糖蛋白，主要表达在人类多种正常组织的上皮细胞，在肝硬化和肝癌细胞中也表达上调。最近国内文献报道肝硬化患者的GP73大量表达而且高于肝癌患者，本研究以非肝癌患者的标本(包括慢性肝炎、肝硬化)为对照，结果显示肝硬化组的GP73水平高于原发性肝癌组，但两者之间差异无统计学意义(P>0.05)，与文献[9]报道一致。表明GP73对肝癌的鉴别诊断价值不大，这与GP73在原发性肝癌、肝硬化患者中水平高有关。

HA是肝细胞外间质中蛋白多糖的一个组成部分。当肝组织受损时，HA的合成增多、降解减少，致血清中HA的水平增高。HA与肝组织纤维化的分期呈正相关，可作为测定活动性肝纤维化和肝损害的定量指标。庄燕等[10]报道肝纤维化时HA变化最大，明显升高，是反映各型肝病肝纤维化和炎性改变最灵敏的指标，并且在肝硬化和肝癌患者中也维持在较高水平。本研究显示，肝硬化组和原发性肝癌组血清中HA的水平明显高于慢性肝炎组，差异有统计学意义(P<0.05)，而肝硬化组和原发性肝癌组之间的HA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，可能与肝硬化向原发性肝癌不断进展有密切关系。

综上所述，联合检测AFP、AFP-L3、GP73和HA 4项肿瘤标志物极大地提高对早期肝硬化甚至原发性肝癌的灵敏度和诊断率，弥补单项检测的不足，降低原发性肝癌的漏检率，为临床诊断和治疗原发性肝癌提供可靠的参考价值。