人乳头瘤病毒感染的民族分布特点与宫颈病变的分析研究

徐文波　向秀华*冯 磊　李 丹　田 辉

乳头瘤病毒属于空泡病毒科乳头瘤病毒属，包括多种动物乳头瘤病毒和人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)，HPV不但具有宿主特异性，而且具有组织特异性，只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞。感染生殖道的HPV根据其致病力的强弱可分为HPV低危型和HPV高危型两种。常见的低危型如HPV-6型及HPV-11型等，仅能导致生殖道尖锐湿疣，而高危型则可引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈上皮内瘤，高危型主要有如HPV-16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型及68型等，现已证实HPV高危型具有潜在的致癌性，其与宫颈癌的发生发展密切相关[1]。据统计，70%～80%的女性一生中至少会感染1次HPV病毒；约有5%～10%因自身因素或其他因素不能将病毒清除，导致HPV持续感染，最终可能发展为宫颈癌[2-3]。

我国是宫颈癌的高发国家，尤其是年轻宫颈癌患者近年来有明显上升趋势，HPV高危亚型的感染还存在地域和民族间的差异。为此，本研究以云南玉溪地区彝族、哈尼族和傣族妇女为主要研究人群，对3个少数民族的妇女HPV基因型频率分布特点及检出率、各年龄段分布及HPV感染检出率、HPV二重及多重感染基因类型以及宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)与HPV多重感染的关系等进行调查研究。

1　资料与方法

1.1　一般资料

玉溪市人民医院收集2014年8月至2017年8月云南玉溪地区常住的少数民族1155例妇女宫颈脱落细胞标本(1155份)，其中彝族958例，哈尼族145例，傣族52例，均为门诊患者及健康体检者，年龄18～75岁，平均年龄(38.6±14.7)岁。按年龄分为≤20岁、21～30岁、31～40岁、41～50岁和＞51岁的5个年龄段。所有受检者直系三代均为少数民族，所有受检者均为自愿检测，签署知情同意书。

1.2　仪器与材料

采用ABI7000型实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)仪(上海普迪生物技术有限公司)。PCR基因组提取试剂盒(广东凯普生物科技股份有限公司)；微阵列芯片法，晶芯® HPV分型检测试剂盒(北京博奥生物集团有限公司)；荧光PCR法，HPV核酸检测试剂盒(西安天隆科技有限公司)。

1.3　检测方法

1.3.1标本采集

使用HPV专用采样刷在宫颈管内鳞状上皮交界处采样，采样时稍用力转动两周，取得宫颈脱落细胞。迅速将迅速将采集到的1155份宫颈脱落细胞采样刷浸入装有细胞保存液的保存管内，分别进行液基薄层细胞学检查和HPV检测。

1.3.2HPV基因分型检测

(1)HPV-DNA提取。使用PCR基因组提取试剂盒，严格按照其操作步骤提取。不立即进行扩增，提取的DNA可暂存于4 ℃冰箱，长期保存需要置于-20 ℃存放。

(2)HPV-DNA扩增。按照PCR扩增试剂盒操作程序，使用ABI7000型实时荧光定量PCR仪进行扩增。PCR产物保存备用，短时间可于4℃存放，长时间保存则需置于-20 ℃存放。

(3)HPV基因分型。①微阵列芯片法，采用晶芯®HPV分型检测试剂盒；②荧光PCR法，采用HPV核酸检测试剂盒。

(4)使用第三方质量控制。检测时加入质控探针：表面化学物质探针(QC)、杂交阳性对照探针(PC)、空白对炸探针(BC)、阴性对照探针(NC)及人基因组DNA探针(IC)，同时参加原卫生部室间质评，结果合格。

1.4　结果判读

室内阴阳性质控合格，检测结果由“晶芯®HPV分型检测系统”进行自动判读。本试剂盒中各HPV型的cut off值主要采用受试者操作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线法计算得到。当各型探针的检测信号值大于或等于该探针的cut off值时，判断该探针为阳性，待检样品中含有该HPV型；当探针的检测信号值小于该探针的cut off值时，判断该探针为阴性，待检样品中不含有该HPV型。试剂盒中各型cut off值已经整合到HPV分型检测系统判别软件中，由软件自动对样品检测结果进行判别。

1.5　统计学方法

采用SPSS17.0版软件进行所有数据的统计学处理，采用多个样本率x2检验，以α=0.05为检验水准，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　三个少数民族的妇女HPV基因型频率分布特点及检出率

在3个少数民族的1155例妇女中彝族958例，哈尼族145例，傣族52例。彝族958例HPV感染的主要型别依次为HPV-33型、51型、52型、56型、58型、59型、66型和68型；哈尼族145例HPV感染的主要型别依次为HPV-51型、52型、56型、68型和33型；傣族52例HPV感染的主要型别依次为HPV-58型、52型、16型和39型，彝族、哈尼族、傣族以52型、56型、58型、68型基因型最为多见，3个少数民族HPV-33型、51型检出率差异无显著性意义)其余各型检出率差异具有显著性意义P＜0.01，见表1。

2.2　三个少数民族的妇女各年龄段分布及HPV感染检出率

在3个少数民族的1155例妇女中共检出高危型HPV感染832例，感染率为72.0%(832/1155)，在3种少数民族的5个年龄段中，≤20岁阳性人数45例、阳性检出率5.4%；21～30岁阳性人数270例、阳性检出率32.4%；31～40岁阳性人数221例、阳性检出率26.6%；41～50岁阳性人数189例、阳性检出率22.7%；＞51岁感染91例、阳性检出率11.0%。其中21～30岁和31～40岁为HPV感染的主要群体，见表2。

表1　三个少数民族的1155例妇女HPV主要型别频率分布和检出率[例(%)]

表2　三个少数民族1155例妇女各年龄段HPV感染分布及检出率

2.3　三个少数民族的妇女HPV二重及多重感染基因型

(1)3个少数民族的1155例妇女HPV二重感染219例：①彝族二重感染124例，基因型为22例51+58型、24例52+68型、27例52+58型、22例52+63型、14例52+66型、8例51+63型、7例51+68型；②哈尼族二重感染70例，基因型为19例51+52型、17例51+56型、14例51+68型、8例52+56型、4例52+68型、3例56+58型、5例51+81型；③傣族二重感染25例，基因型为8例16+52型、6例16+58型、5例16+39型、4例52+58型、2例39+52型。

(2)3个少数民族的1155例妇女HPV三重感染52例：①彝族三重感染15例，基因型为5例51+52+58型、3例52+56+68型、3例52+56+63型、2例52+63+68型、2例58+63+66型；②哈尼族三重感染14例，基因型为7例51+52+81型，4例51+56+68型，3例52+56+68型；③傣族三重感染23例，基因型为14例16+52+58型，5例16+52+39型，4例16+39+58型。

2.4　三个少数民族的妇女CIN与HPV多重感染的关系

(1)在3个少数民族的1155例妇女中共检出高危型HPV感染832例，感染率72.0%(832/1155)。感染者可疑部位活检发现，宫颈炎症为501例；CIN为331例，其中CINⅠ级85例，CINⅡ级176例，CINⅢ级70例。

(2)HPV阳性的CINⅠ级患者中，一重感染率为54.1%(46/85)，二重感染率为40.0%(34/85)，三重及以上为5.9%(5/85)；HPV阳性的CINⅡ级患者中，一重感染率为35.8%(63/176)，二重感染率为54.5%(96/176)，三重及以上9.7%(17/176)；HPV阳性的CINⅢ级患者中，一重感染率为25.7%(18/70)，二重感染率为4 5.7%(3 2/7 0)，三重及以上28.6%(20/70)。

(3)3个少数民族的妇女CIN级别与HPV感染重数阳性率相关，差异有统计学意义(x2=27.0，P＜0.05)。经相关分析CIN等级与HPV感染重数有显著相关性差异，并具有统计学意义(x2=12.0，r=-0.736，P＜0.05)。表明彝族、哈尼族及傣族高危型HPV感染与宫颈病变严重程度相关，HPV感染的多重性与癌前病变级别升高有关联性。3个少数民族832例妇女高危型HPV感染CIN的Thinprep细胞学检测(Thinprep cytologic test，TCT)结果与HPV感染情况见表3。

表3　832例高危型HPV感染妇女CIN的TCT结果与HPV感染情况(例)

3　讨论

本研究中，少数民族感染人群年龄依次21～30岁、31～40岁、41～50岁、＞51岁、≤20岁，而≤20岁组HPV阳性检出率比报道汉族妇女高，提示本地区HPV感染性有年龄差异。目前认为，HPV高危亚型的感染是宫颈癌发生的必要条件，年龄对宫颈癌的筛查有着重要的意义[6]。文献报道HPV各亚型的分布存在地区性差异[2-5]。本地区彝族、哈尼族、傣族以52型、56型、58型、68型基因型最为多见，傣族妇女检出HPV16型，彝族、哈尼族未检出，彝族、哈尼族部分基因型相似，这可能与少数民族的居住环境、生活方式、地区经济发展、风俗习惯和婚恋习俗及性生活特征等因素有关[2-5]。3个少数民族HPV-33型、51型检出率经卡方检验差异无显著性意义，其余各型检出率差异具有显著性意义。彝族、哈尼族部分基因型相似，考虑彝族、哈尼族居住山区、环境、风俗习惯以及婚恋习俗相似所致。因此，了解本地区的HPV基因型的分布情况，为将来HPV疫苗的普及应用、宫颈癌的治疗方向等提供客观依据。

在CIN与HPV多重感染的关系中，3个少数民族的妇女HPV感染以一重感染为主，经相关分析CIN等级与HPV感染重数有显著相关性。表明HPV感染的多重性与宫颈癌及癌前病变级别升高有关联性。在3个少数民族的妇女中，高危型HPV的阳性率随宫颈病变严重程度的增加而逐渐增高。通过HPV感染患者的高效筛查和密切监测能有效防止宫颈癌的发生。少数民族HPV阳性检出率明显高于报道的汉族女性，HPV感染率与人群的年龄、性生活过早以及地区差异相关[6]。HPV感染通常在年轻的女性中容易高发，并且随着年龄的增长而呈明显的下降趋势，其与多个性伴侣、吸烟、经济与文化水平较为落后，卫生资源较为匮乏、自然环境以及医疗条件较差等相关[1]。

HPV检测是一种客观性、可重复性强的检测手段，可避免不同检测者之间的主观差异，减少细胞学检查的假阴性结果。由于HPV感染后1～2年内会被机体清除，宫颈癌的发生率很低，应该将液基细胞学和HPV-DNA检测联合应用，作为宫颈癌筛查的首选方法。