MicroRNA-155表达与非小细胞肺癌放疗敏感度关系的研究

苏 群　李益民　韩鹏柄　董 方　张 明　高力英

（甘肃省肿瘤医院放疗科，甘肃 兰州 730000）

肺癌是当前全球范围内的常见恶性肿瘤之一[1]。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常见的肺癌类型，对放射治疗呈中度敏感，约70% NSCLC患者需要接受放疗[1]。但一些NSCLC患者对放疗不敏感，从而影响了疗效[2]。探索与放疗敏感度相关的分子标志物，用以设计个体化的综合治疗方案是提高放疗疗效的重要手段[1-2]。microRNA-155（miR-155）由B细胞整合簇基因第3外显子高度保守区域编码，位于人染色体21q21[3]。miR-155属于癌性微小RNA，已有多项研究表明miR-155在多种肿瘤中表达升高，与肿瘤的发生发展及患者预后关系密切[3-4]。但对于miR-155与放疗敏感度关系的研究较少。因此，本次研究旨在组织水平了解miR-155表达与NSCLC患者放疗敏感度的联系，以期为改善NSCLC患者放疗疗效提供初步临床依据。

1　材料与方法

1.1临床资料：选取2011年5月至2016年12月就诊于甘肃省肿瘤医院的NSCLC患者60例，其中男性32例，女性28例，年龄41～69岁，鳞癌31例，腺癌29例。所有患者均经病理诊断，术后接受三维适形放射治疗，2 Gy/次，5次/周，治疗总剂量达50～70 Gy，疗程8周。

1.2RNA提取及实时荧光定量PCR：按照总RNA提取试剂盒（Qiagen）方法进行操作，并逆转录为cDNA。采用TaqMan MicroRNA Assay试剂盒（Applied Biosystems）进行实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）。miR-155和内参U6的上游引物分别为5'-ACACTCCA GCTGGGTTAATGCTAATCGTG-3'、5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'。通过比较循环数（Ct）计算miR-155的相对表达量。

1.3放疗敏感度评价标准：按照WHO肿瘤疗效评价标准进行疗效评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病进展（PD）、稳定（SD）。CR和PR定义为放疗敏感，PD和SD为放疗抵抗。

1.4统计学分析：计数资料采用例数表示，组间比较采用卡方检验；计量资料采用均数±标准差表示，组间比较采用t检验。logistic回归分析miR-155表达对放疗敏感度的预测价值。使用SPSS 19.0进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1miR-155表达水平与临床病理因素的关系：60例患者中CR有10

例，PR有19例，SD有19例，PD有12例，放疗敏感率为48%。qRTPCR结果显示，放疗抵抗组的miR-155表达水平高于放疗敏感组（0.069±0.021 vs.0.035±0.019，P＜0.001）（图1）。miR-155表达水平在不同年龄、性别、病理类型中无统计学差异（P＞0.05），而与TNM分期、淋巴结转移浸润有关（P＜0.05）。

图1　放疗敏感组与放疗抵抗组miR-155表达水平的比较

表1　miR-155表达水平与临床病理因素的关系（

表1　miR-155表达水平与临床病理因素的关系（

变量　例数　miR-155表达水平　t值　P值性别男性　32　0.046±0.029　1.49　0.14女性　28　0.056±0.022年龄(岁)≥60岁　35　0.052±0.031　0.40　0.69＜60岁　25　0.049±0.027病理类型腺癌　31　0.041±0.024　1.32　0.19鳞癌　29　0.051±0.034 TNM分期　7.04　＜0.001Ⅰ期　18　0.026±0.017Ⅱ～Ⅳ期　42　0.067±0.022淋巴结转移　6.93　＜0.001阳性　24　0.071±0.010阴性　36　0.043±0.018

2.2miR-155表达水平与放疗敏感度关系分析：以miR-155表达水平的均数为界值（0.052）将患者分为低表达（n=31）和高表达组（n=29），miR-155高表达组的NSCLC患者放疗抵抗发生率高于低表达组（70% vs.29%，P＜0.05）。单因素及多因素logistic回归分析均表明miR-155高表达是发生放疗抵抗的危险因素（比值比3.99，95%CI 1.36-11.68，P＜0.05）。

3　讨　论

放疗是治疗NSCLC的重要手段，但不同个体对放疗的敏感度不同[1]。细胞凋亡、DNA损伤修复能力、细胞周期、缺氧程度、肿瘤干细胞等是影响肿瘤放射治疗敏感度的重要因素，而miRNAs在调控肿瘤放射敏感度的作用是近年来研究的热点问题[2]。Zang等[5]发现miR-155可通过调控Apaf-1影响细胞凋亡和DNA损伤，诱导NSCLC的发生发展。程田力等[6]研究显示miR-155可通过下调靶基因PTEN的表达，促进肺腺癌的侵袭和转移。何斐等[7]纳入7个研究进行meta分析发现，miR-155高表达预示NSCLC患者发生复发或转移等肿瘤相关恶性结局风险增高（风险比1.48，95%CI 1.07～2.06）。新近Wang等[8]meta分析同样发现miR-155高表达的NSCLC患者预后不良。但目前关于miR-155与NSCLC放疗敏感度相关研究较少。

Babar等[9]在肺癌细胞中的体外研究结果提示，miR-155可能通过抑制FOXO3A、TP53INP1减弱放疗敏感度，而抑制miR-155表达能提高放疗效果。本次研究在组织水平检测miR-155的表达水平，发现放疗抵抗患者的miR-155表达水平较放疗敏感患者增高，miR-155表达与TNM分期、淋巴结转移浸润有关，进一步校正混杂因素的logistic回归分析结果表明癌组织中miR-155高表达的患者比低表达者出现放疗抵抗风险升高约4倍。因此，miR-155可能是NSCLC放疗疗效的重要预测指标，在患者接受放疗前检测癌组织中miR-155表达水平有助于实现NSCLC患者的个性化治疗。

综上所述，NSCLC患者在接受放疗前癌组织中miR-155的表达水平与对放射线的敏感度呈负相关，miR-155有望成为预测放疗疗效的重要指标。检测miR-155表达能否改善非小细胞肺癌患者预后以及能否将miR-155作为非小细胞肺癌治疗的重要靶点，有待于进一步的研究探索。