厦门市售贝类中氯霉素残留情况调查分析

林功师，郑冬云，洪 江，刘丽丽

(厦门市海洋与渔业研究所，福建 厦门 361008)

海洋物种多样、资源丰富，长期以来是人类食物的重要来源之一。其中贝类产品，因其肉味鲜美、营养丰富，蛋白质和不饱和脂肪酸含量较高，脂肪含量低，易被人体消化吸收，并且富含钙、铁、镁、硒、锌、碘等多种人体必需的微量元素和维生素[1]，可作为人类的营养食品，而深受广大消费者的喜爱。据渔业部门相关数据统计，目前我国是贝类养殖大国，养殖规模和产量均居于世界前列，其中牡蛎(Ostreagigastnunberg)、贻贝(Mytilusedulis)、菲律宾蛤仔(Ruditapesphilippinarum)、文蛤(Meretrixmeretrix)、扇贝(Chlamysfarreri)等品种占贝类养殖总产量的60%以上[2-3]。

氯霉素是一种可人工合成的抑菌性广谱抗生素，因其抗菌效果好，曾长期用于防治渔业病害、水体消毒等水产养殖过程。但氯霉素在动物可食用组织中的残留量会通过食物链进入到人体，人类如果长期食用含有氯霉素残留的食品，不仅会使人体肠道正常菌群失调[4]，还会导致再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏等疾病[5]。鉴于氯霉素的毒副作用，其残留问题已经引起美国、欧盟、中国等国家及国际组织的高度重视，并相继出台了相关的规定，要求水产品中氯霉素残留的限量为不得检出[6-7]。但氯霉素类药物具有价格低廉、抑菌效果好、容易获得等优点，使一些养殖户、商贩仍违法违规使用。因此，开展贝类中氯霉素残留量的监测，有利于及时了解贝类食用的安全性，为广大消费者的健康提供保障。

本次开展的贝类中氯霉素残留量的检测所使用的超高效液相色谱串联质谱法是在GB/T 20756—2006国家标准方法上建立的[8]，该方法在浓度0.5～20 ng/mL范围内具有良好的线性关系，线性方程y= 0.601 59x+ 0.043 27，相关系数R2为0.999 8，氯霉素残留量检出限为0.1 μg/kg。

1 材料与方法

1.1 样品

采集厦门市水产品批发市场、超市、养殖场等场地的菲律宾蛤仔、文蛤、牡蛎、缢蛏(Sinonovaculaconstricta)、贻贝、泥蚶(Tegillarcagranosa)、寻氏肌蛤(Musculussenhousei)、扇贝共8种常见贝类，169份样品。牡蛎和缢蛏样品每份重约2.0 kg，其余贝类样品每份重约4.0 kg。贝类样品的产地主要来自广西、广东、江苏、辽宁、浙江、福建等省份。

1.2 仪器与试剂

超高效液相色谱(1290 Infinity UHPLC，美国 Agilent 公司)；三重四级杆串联质谱仪(AB SciexTriple Quad 4500，美国AB公司，配有电喷雾 ESI 离子源)；MS3 Digital 漩涡振荡器(德国IKA公司)；BS110S电子天平和TE212电子天平(德国Sartorius公司)；Sorvall Stratos高速冷冻离心机(美国Thermo公司)；Milli-Q Gradient超纯水仪(美国Millipore公司)；20 μL、50 μL、100 μL、1000 μL移液器(法国Gilson公司)。乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈均为色谱纯(德国MERCK公司)。氯霉素标准品(纯度为98.5%， Dr.Ehrenstorfer公司)， 氯霉素-D5标准溶液(100 μg/mL，Dr.Ehrenstorfer公司)。

1.3 方法

1.3.1 仪器条件

色谱柱为Zorbax Eclipse Plus-C18(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；流动相A为乙腈，流动相B为超纯水；柱温40℃；流速0.40 mL/min；进样量20 μL；液相色谱流速及梯度洗脱程序见表1。离子源为电喷雾离子源ESI，毛细管电压为-4 500 V，离子源气流量为50.0 mL/min，锥孔气流量35.0 mL/min。采用负离子扫描方式，多反应监测模式(MRM)。质谱定性定量离子对信息见表2。

表1 液相色谱梯度洗脱条件

注：流动相A 为乙腈，流动相B 为超纯水。

Note：The mobile phase A was acetonitrile，while the mobile phase B was water.

表2 目标化合物液质测定条件

注：*定量离子。

Note：The asterisk represented the quantitation ion.

1.3.2 样品处理

准确称取搅碎的湿样品5.0 g于50 mL离心管中，加入20 μL 100 ng/mL内标工作溶液涡旋混合1 min，再加入15 mL乙酸乙酯涡旋1 min，以4 500 r/min离心5 min。将上层清液转移至含有5 g无水硫酸钠并用乙酸乙酯润洗的漏斗中，漏斗下方放置100 mL鸡心瓶以便收集提取液。再往50 mL离心管中加入15 mL乙酸乙酯并涡旋混合1 min，重复上述操作一次，合并全部提取液于鸡心瓶中，然后用10 mL乙酸乙酯将残留在无水硫酸钠中的目标物冲洗至鸡心瓶中。摇匀后，将提取液于40℃温度下旋转浓缩至干。残渣用1 mL水溶解，超声3 min，加入适量正己烷涡旋混合1 min，静置分层，弃掉上层的正己烷。将水相过0.22 μm滤膜后，待测。

本次检测过程，每10批次样品加测2份样品的加标回收实验，加标水平为1.0 μg/kg。加标回收率在88%～104%之间。

1.3.3 贝类中氯霉素的判定标准

农业部235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定[9]，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。

2 结果

8种贝类中氯霉素残留总体检出情况：169份贝类样品中，共有6份样品有检出氯霉素残留，氯霉素总检出率为3.6%(6/169)，含量最高为7.05 μg/kg；以菲律宾蛤仔检出率最高，检出率为7.7%(3/39)，其次为文蛤，检出率为6.7%(2/30)；贻贝的检出率为5.3%(1/19)；牡蛎、缢蛏、泥蚶、寻氏肌蛤、扇贝共计81份样品中均未检出氯霉素残留。氯霉素残留检出率为：菲律宾蛤仔>文蛤>贻贝>牡蛎、缢蛏、泥蚶、寻氏肌蛤、扇贝，具体情况见表3。依据农业部235号公告，在动物性食品中氯霉素不得检出的规定，则样品中检出氯霉素残留，即为超标，判定样品不合格。

表3 氯霉素的总体检出情况

注：N.D.指的是低于检出限(0.1 μg/kg)。

Note：N.D.represented the result below detection limit (0.1 μg/kg).

3 讨论

从本次监测的数据可以看出，8种贝类中以菲律宾蛤仔(Ruditapesphilippinarum)和文蛤(Meretrixmeretrix)样品中的氯霉素残留检出率较高，贻贝(Mytilusedulis)样品中的氯霉素残留量仅在检出限附近。氯霉素添加到鲜活贝类产品养殖水体中，具有延长贝类存活时间，抑制病情、消毒等作用。部分养殖户及经营者对氯霉素流入市场的危害性认识不足，在贝类育苗阶段、运输过程和零售市场暂存暂养过程可能违规使用氯霉素，而双壳贝类特殊的生长习性也导致其吸收的有害物质更容易积累，从而出现贝类中氯霉素残留量超标的情况。本次抽样检测的贝类样品中，6批次的检出样品均来自于批发市场和超市，而采自养殖产地的24批次样品均未检出氯霉素残留。由于本次采集的贝类样品，每个贝类品种检测样品的数量有限，个别贝类品种检测数量比较少，故检出率、检出品种不一定完全有代表性，但检测结果已显示市面上的贝类中确实含有氯霉素残留，相关管理部门应该加强宣传和监管监控，从而保障广大消费者的身体健康。

参考文献：

[1]李苹苹.五种经济贝类的营养成分及蛋白质质量分析[J].食品研究与开发，2014，35(15)：99-101.

[2]农业部渔业局.中国渔业年鉴(2011)[M].北京：中国农业出版社，2012：185.

[3]王增焕，王许诺.华南沿海贝类产品重金属含量及其膳食暴露评估[J].中国渔业质量与标准，2014，4(1)：14-20.

[4]文卫，钮伟民，许伟芳.氯霉素残留检测技术的研究进展[J].现代预防医学，2007，34(1)：67-68.

[5]吴永宁，邵兵，沈建忠.兽药残留检测与监控技术[M].北京：化学工业出版社，2007：189.

[6]汤轶伟，励建荣，孟良玉，等.水产品中氯霉素药物残留检测方法研究进展[J].食品科学，2013，34(11)：333-337.

[7]谭磊，施远国，罗燕，等.动物源性食品中氯霉素残留检测方法的优化[J].国外畜牧学，2015，35(7)：66-68.

[8]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 20756—2006可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法[S].北京：中国标准出版社，2006.

[9]中华人民共和国农业部.中华人民共和国农业部公告第235号[EB/OL].(2005-10-28).[2018-03-05].http：//jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.