重视血小板减少标本的血涂片复检及假性减少的纠正方法

随着医学的发展，血细胞全自动分析仪已被广泛使用，其中血小板计数是众多血细胞分析仪的一项重要检测参数之一，其准确性直接关系到临床对相关疾病的诊断和治疗，但由于血小板体积小，具有黏附性和聚集性，易受多种因素的影响，常常造成血小板计数假性减少，如常见的EDTA-K2导致假性血小板减少现象，在国内外均有多例报道[1-4]。本文对296例血细胞分析仪检测首次血小板计数＜100×109/L的患者进行复检，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 检测对象

收集我院2017年6—12月门诊和住院患者及正常体检者，血细胞分析仪检测首次血小板计数＜100×109/L的患者共296例，男 184例，女112 例，年龄5～80岁，进行血涂片瑞氏-姬姆萨染色，显微镜镜检复查。

1.2 仪器和试剂

XE-5000和XS-1000i全自动血细胞分析仪及原装配套试剂；质控品（Sysmex公司生产）；OLYMPUS CX41显微镜；瑞氏-姬姆萨染液（珠海贝索生物技术有限公司）。仪器严格按要求进行维护和保养，每天检测室内质控的各项参数都在允许的x-±2s以内，确保仪器及试剂稳定可靠。

1.3 检测方法

（1）按要求采集EDTA-K2 抗凝血2 ml混匀，按照XS-1000i血细胞分析仪的操作规程检测，筛选出血小板计数＜100×109/L的血样，进行血涂片瑞氏-姬姆萨染色镜检，观察血涂片血小板是否有聚集。

（2）对血小板有聚集患者，采用末梢新鲜指血采集方式，用两种方法验证并确定血小板数；一是迅速采集不加抗凝剂末梢新鲜血0.5 ml左右并混匀，立即用XS-1000i血细胞分析仪检测，二是参照《全国临床检验操作规程》[5]，由2位经验丰富的主管检验师进行手工镜检计数求平均值，取得的结果与xs-1000i的检测结果进行比较。

1.4 统计学方法

应用SPSS17.0统计软件处理，检测所得数据以（±s） 表示，组间比较采用方差分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

对18例血涂片血小板有聚集患者采用三种方法比较，F=188.2，总体差异有统计学意义；其中EDTA-K2抗凝血和末梢新鲜指血使用xs-1000i血细胞分析仪检测，三种测得结果进行比较分析发现，末梢新鲜指血和手工计数二者组间比较P=0.25，P＞0.05，差异无统计学意义；而EDTA-K2抗凝血明显比其它两种方法血小板测得结果低，组间比较P=0.001，P＜0.05，差异有统计学意义。见表1。

3 讨论

随着全自动血细胞分析仪的广泛应用，假性血小板减少的病例屡见不鲜。 导致假性血小板减少的原因很多，其中以EDTA依赖的假性血小板减少症（EDTA-PTCP）为常见，其发生机制很复杂，一方面与血小板表面存在的某种隐匿性抗原有关[6]，EDTA可诱导其构象发生改变，从而与血浆中可能存在的抗血小板抗体或抗心磷脂抗体结合而发生聚集，另一方面EDTA可诱导血小板膜表面的GPⅡb/Ⅲa与来自中性粒细胞Fc段受体结合形成卫星现象，这种现象的发生率为1.2万分之一[7]，其临床意义尚不清楚。2005年国际血液学组织提出了显微镜复检的41条建议性标准，得到了中国血液检验学界的密切关注。复检规则要求，对于首次检测血小板计数小于100×109/L或大于1000×109/L 应涂片复检[8]。本组按复检规则要求，对18例判断为假性血小板减少的样本，通知相关科室患者前往血液组采集两份血样，第一份快速采集末梢新鲜血，立即用XS-1000i检测，第二份按操作规程定量采集末梢血，加入到草酸铵稀释液。结果显示，两种方法复检后血小板显著增多，与EDTA-K2抗凝血检测血小板结果差异有统计学意义（P＜0.05）。

血细胞分析仪计数血小板具有快速、简便、重复性好等优点，但随着对血小板功能研究的不断深入，发现血小板和内皮细胞也参与炎症反应、肿瘤和淋巴管的活动[9]。因此，在自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和妊娠等都增加了PTCP的发生率[10]。虽然EDTA-PTCP与多种疾病状态有关，但至今未有证实哪种疾病能够直接引起该现象的产生。曾有针对健康人群EDTA-PTCP发生因素的调查[11]，而对住院患者EDTA-PTCP的危险因素尚未见报道。假性血小板减少所致原因复杂，如临床疾病或药物引起的患者自身因素、实验室检测因素（采血过程、与EDTA抗凝剂有关的假性减少、测定时间和温度的影响、血细胞分析仪计数血小板方法学的缺陷）等[12]。

综上所述，无论多么先进的仪器设备都需要结合一定的手工镜检，血小板假性减少发生率较低，但准确检出具有重要临床意义。对于用仪器法检测患者血小板结果偏低时＜100×109/L，应及时推片镜检，结果不相符的，积极采取措施复检，如重新采样，更换抗凝剂，或采集末梢新鲜血等，必要时还可手工计数血小板，以提高检验结果的准确性，为临床医师和患者提供最准确、最可靠的结果，避免假性血小板减少所致的误诊、误治和医疗纠纷的发生。

表1 18例血涂片血小板有聚集样本三种方法检测结果比较（±s）×109/L

表1 18例血涂片血小板有聚集样本三种方法检测结果比较（±s）×109/L

方法 EDTA-K2抗凝血 末梢新鲜指血 手工计数血小板数 60.4 ±18.9 188.7 ±22.5 180.1 ±24.8

[1]毛维玉，霍梅，叶素丹，等. EDTA依赖的假性血小板减少的实验分析与对策[J]. 中国实验血液学杂志，2014，22（5）：1345-1347.

[2]程翔，郑善銮. 血小板减少治疗过程中发生EDTA依赖性血小板假性减少症1例[J]. 国际检验医学杂志，2014，35（6）：800.

[3]刘俊闪. EDTA-K2 抗凝剂致血小板假性减少现象及纠正方法的分析 [J]. 临床医药文献杂志，2015，2（8）：1442.

[4]Akbayram S，Dogan M，Akgun C，et al. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia in a child[J]. Clin Appl Thromb Hemost，2011，17（5）：494-496.

[5]尚红，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 4版. 北京：人民卫生出版社，2015：14-15.

[6]Bragagni G，Bianconcini G，Brogna R，et al. Pseudothrombocytopenia：clinical comment on 37 cases[J]. Minerva Med，2001，92（1）：13-17.

[7]Bizzaro N，Goldschmeding R，von dem Borne AE. Platelet satellitism is Fc gamma RIII (CD16) receptor-mediated[J]. Am J Clin Pathol，1995，103（6）：740-744.

[8]龚道元，张纪云. 临床检验基础[M]. 4版. 北京：人民卫生出版社，2015：76-77.

[9]左元玲，赵益明. 血小板与内皮细胞相互作用的研究进展[J]. 中国实验血液学杂志，2013，21（4）：1078-1082.

[10]Isik A，Balcik OS，Akdeniz D，et al. Relationship Between Some Clinical Situtions，Autoantibodies，and Pseudo thrombocytopenia[J].Clin Appl Thromb Hemost，2012，18（6）：645-649.

[11]Xiao Y，Yu S，Xu Y. The prevalence and biochemical profiles of EDTA-Dependent pseudothrombocytopenia in a generally healthy population[J]. Acta Haematol，2015，134（3）：177-180.

[12]张振龙. 易致假性血小板减少的因素与分析[J]. 世界最新医学信息文摘，2016，16（49）：107.