小鹅瘟病毒卵黄抗体的保存期试验

2018-06-19孙心姜宇梁宛楠哈药集团生物疫苗有限公司

兽医导刊 2018年11期

孙心姜宇梁宛楠/哈药集团生物疫苗有限公司

小鹅瘟（Goose parvovius，GP），是由鹅细小病毒（Goose parvovius，GPV）引起雏鹅急性肠炎及肝、肾、心实质脏器炎症，病原性强，死亡率高，该病主要感染1月龄以内的雏鹅，雏番鸭也很易感染，可经呼吸道和消化道感染，并能经卵垂直传播，发病率和死亡率可高达90%～100%，对养鹅业危害严重。为了有效的防控该病的发生，通过现地分离的病毒接种于鹅胚后，收获培养物，经灭活剂灭活后制成免疫原，接种健康产蛋母鸡，收集鸡卵，提取卵黄抗体，并加入适当防腐剂制成小鹅瘟病毒卵黄抗体。卵黄抗体（immunoglobulin of yolk ；IgY）是禽类经特定抗原免疫后，在卵黄中所产生的相应特异性抗体。IgY是一种天然存在、无残留、无毒副作用的免疫球蛋白，是抗生素的替代品。目前卵黄抗体广泛应用于一些疾病的紧急预防和治疗。本研究将试制的3批小鹅瘟病毒卵黄抗体，置室温和2℃～8℃冰箱内保存，间隔不同时间测定抗体的物理性状检查，并检测卵黄抗体的效价及对雏鹅攻毒的保护效力，从而确定有效的保存时间，为提高本病的治疗和紧急预防提供依据。

一、材料和方法

1.供试验的疫苗。3批小鹅瘟病毒卵黄抗体为本实验自行研制，批号为 201601、201602、201603，琼扩效价≥1∶16，卵黄抗体原液效价为1∶128。

2.试验方法。将研制的3批小鹅瘟病毒卵黄抗体，分别置于室温和2℃～8℃保存，分别在6、12、18、24个月取出做物理性状检查，并检测卵黄抗体的效价及对雏鹅攻毒的保护效力。

3.研究指标。（1）物理性状检验：按现行《中国兽药典》附录进行检验，应呈略带白色澄明液体，久置后有少量白色沉淀；（2）无菌检验：按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长；（3）抗体效价测定按琼扩试验方法进行，卵黄抗体的琼扩效价应≥1∶16；（4）制定指标按下述标准判定保存的抗体是否合格。

合格：卵黄抗体性状，达到《质量标准》的要求；抗体无菌生长；琼扩试验测定抗体效价不降低。雏鹅保护试验时应达80%以上的保护率；不合格：达不到上述标准的抗体判为不合格。

二、结果评估

1.结果判定。分别记录每次检测的所有数据，就可以得出抗体经保存后的物理性状及抗体效价的变化情况。

2.试验的有效性。试验测定了3批抗体的保存期，保存后于不同时间测定抗体的琼扩效价，充分保证试验结果的可靠性，本试验可以认为有效。

表1 室温保存的效价测定结果

三、结果

1.物理性状检查结。于室温和2℃～8℃保存的卵黄抗体，分别在保存后的6、12、18和24个月，对保存的卵黄抗体做了物理性状检查，其结果基本一致。外观呈略带白色澄明液体，瓶底部有少许白色沉淀。

2.无菌检验结。按现行《中国兽药典》附录进行检验，无菌生长。

3.支原体检验结果。按现行《中国兽药典》附录进行检验，无支原体生长。

4.外源病毒检验结果。按现行《中国兽药典》附录进行检验，无外源病毒污染。。

5.卵黄抗体效价测定结果。取3批卵黄抗体置室温（25℃）及2℃～8℃条件下作不同保存时间测定，测定时，各取3瓶保存的抗体混合后，作琼扩试验，记录保存前后的效价变化情况，结果见表1、2。

从表1，2可以看出，卵黄抗体经2℃～8℃保存，效价未降低，进一步的保存时间正在测定之中。在室温保存时，个别批次保存9个月后琼扩效价降低。

6.雏鹅的攻毒试验结果。制备的抗体经一定时间保存后，除以琼扩试验测定抗体效价的变化情况以外，在保存后的不同时间，将抗体接种雏鹅，测定攻毒后的雏鹅保护率，结果见表3。

四、结论

将制备的小鹅瘟病毒卵黄抗体置室温及2℃～8℃保存，经过一定时间保存后测定，保存抗体的物理性状良好，符合现行《中国兽药典》标准。另外，在室温保存6个月或2℃～8℃保存24个月后，琼扩效价不降低。但个别批次的卵黄抗体，于室温保存9个月后，效价降低。将保存的小鹅瘟病毒卵黄抗体注射雏鹅后再攻击小鹅瘟强毒，结果室温保存6个月及2℃～8℃保存6、12、18、24个月的抗体注射雏鹅后，全部获得保护，对照8/10以上死亡，证明提取的卵黄抗体具有良好的稳定性，可在2℃～8℃保存24个月。