96例初诊急性白血病MICM分型的诊断分析

栗 杰 高九青 李斯展 张艺露

（阜新矿业集团总医院，辽宁 阜新 123000）

急性白血病（AL）属于一种高度一致性疾病，不同类型的AL与治疗的方案、疗效与预后密切相关，所以全面的了解AL的类型及特点对临床治疗具有指导意义。在对白血病的判断中FAB形态分型与诊断标准[1]提供了重要的依据，但是该诊断标准只是根据细胞形态学与化学特性进行了分型，存在局限，而白血病形态学、免疫学、细胞遗传学（MIC）分型则与FAB分型、AL治疗与预后密切联系。

1 资料与方法

1.1 病例资料：均来自阜新矿业集团总医院血液科2010年1月至2014年12月初治的急性白血病（AL）96例，其中男54例，女42例，年龄13～81岁（中位年龄47岁）。骨髓采自化疗前，由血液细胞室和细胞遗传室提供专用抗凝管瓶。所有病例经MICM分型明确诊断为急性淋巴细胞白血病27例，急性髓系白血病62例，急性杂合白血病6例，急性浆细胞白血病1例。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞形态、细胞组化：抽取骨髓液，外周血及骨髓涂片干后用瑞氏染色分析细胞形态，经POX，PAS，NAE染色和NaF抑制试验，按FAB分型对细胞进行形态学分型[2]。

1.2.2 免疫表型检测：在治疗前取患者骨髓液2～3 mL，肝素抗凝，分离制备单个核细胞悬液。采用活细胞直接免疫荧光法单色标记，FCM检测。所用单抗检测的抗原包括：①HLA-DR、抗TdT、CD34造血干/祖细胞表达抗原；②B细胞表达抗原：CD19、CD20、CD22、CD79a；③T细胞表达抗原：CD3、CD7、CD5、CD2、CD1a、CD4、CD8；④髓系细胞表达抗原：CD13、CD33、CD15、CD11b、CD14、CD64、CD117、MPO、GlyA和CD56。方案参照欧洲白血病免疫学特征研究组（EGIL）的：CD34抗原阳性细胞≥10%，髓系/巨核系/淋系抗原阳性细胞≥20%[3]。

1.2.3 细胞遗传学：骨髓采集，肝素抗凝，分离单个核细胞。经24 h培养后，制备染色体标本，R显带，根据《国际人类细胞遗传学国际命名法（ISCN）》[3]核型分析。FISH检测采用正常骨髓样本作阴性对照。分界值为3.38%，将阳性细胞百分率＞该值的标本，判定为阳性。

表1 AL形态学分型结果（例）

1.2.4 分子生物学检测融合基因：RT-PCR检测白血病相关融合基因，分别于治疗前、缓解期取EDTA抗凝的骨髓标本2～3 mL，采用TRIzol试剂提取（1～2）×106个有核细胞总RNA，采用紫外分光光度计测量RNA样品纯度，用两步法PCR试剂盒反转录和PCR。

2 结 果

2.1 AL形态学分型结果：根据AL FAB分型标准，采用形态学检查，获得的分型结果见表1。

2.2 免疫学分型：其中96例白血病患者中免疫分型初诊单纯型AML 45例，变异型AML 17例；单纯型ALL 13例（B型76.9%，T型23.1%），变异型ALL14例；双表型6例（TB双表型16.7%，B混合型5.0%，T混合型33.3%）；未分化型2例。具体分型结果，见表1。

2.3 各型抗原的表达结果：AML中抗原表达CD33、CD13和CD117最常见，分别占84.2%、81.9%和70.4%；B-ALL中抗原表达CD19、CD10和CD20最常见，分别占100%、69.4%和0.2%；CD34和HLA-DR属于干/祖细胞的相关抗原，二者多在低分化的亚型中表达；T-ALL中抗原表达CD3、CD7最为常见；CD117是一种C-Kit原癌基因细胞表面分化的抗原，同时也表达多能干细胞的相关抗原。CD14是一种比较特异的单核细胞表面标志，灵敏度低，M4、M5出现CD14阳性表达比例在30%左右；AML患者表达淋系抗原的患者占20%左右，依次是CD7＞CD19＞CD22＞CD2。ALL患者中表达髓系抗原的患者占到40%左右，依次是CD13＞CD33＞CD15。

2.4 细胞遗传学分析：96例急性白血病病例中有57例（61.4%）检测到克隆性染色体异常。其中结构异常37例（38.5%），其中有5例检测到11号染色体易位，分别为：t（9；11）2例，t（11；19）2例，t（6；11）伴复杂染色体的1例。所有阳性病例同步进行FISH检测，2例t（8；14）进行FISH检测MYC-IgH融合基因均阳性。数量异常22例（22.9%）。

2.5 分子生物学分析（RT-PCR检测融合基因）：有42例（59.4%）检测到克隆性染色体异常。分别为：BCR-ABL（P210）为2例，BCRABL（P190）为6例，PML-RARα（L）为9例、PML-RARα（S）为2例，AML1-ETO为9例，CBFβ-MYH11为4例，MLL-AF4，MLLAF6为1例，MLL-ELL为2例，E2A-PBX1为1例。

3 讨 论

研究对96例白血病患者进行了骨髓细胞形态学检查，结果显示仅采用形态学检查，其准确率为81.3%，和多数研究报道的60%～80%[4]相比更高，这可能与本实验中参与工作者的经验与专业知识有关。结果提示，在白血病的诊断中骨髓细胞形态学检查是最基础、最快捷和有效的手段。

免疫学分型是形态学分型的一个重要补充方法，在白徐诶那个诊断中发挥着巨大的作用，这是因为白血病细胞通常会有过度表达、某些抗原缺失和系列交叉异常的免疫分子表达，因此有利于白血病免疫分型的诊断。研究中我们发现AML患者有20.9%出现淋系抗原表达，其中最常见的为CD7。结果显示，AML患者表达CD7抗原的预后不理想，较差，患者无法长期生存。同时通过免疫分型可更加客观的对急性白血病分型，结果也更加的可靠，利用抗原表达差异可以明确白血病细胞惜别与具体的亚型。在M3型、急性单核细胞白血病的确诊中，利用免疫分型诊断具有关键性的作用。CD14是一种比较特异的单核细胞表面标志，在M4或M5型AML患者有高表达，因此在M4、M5型和其他亚型的鉴别诊断中更加有利；CD34和HLA-DR属于干/祖细胞的相关抗原，是细胞标志物，在M3型AML患者中仅有极少的表达。在对M3、M2型AML的鉴别诊断中进一步的利用细胞遗传学分析、融合基因检测手段可起到显著的鉴别诊断价值。需要特别提出的是：我们进行FISH及RT-PCR检测均发现染色体核型分析未见异常情况下出现BCR-ABL，AML1-ETO及CBFβ-MYH11融合基因阳性各1例；说明常规R显带技术进行染色体核型分析存在一定局限性。

综上所述，在AL的诊断中仍以细胞形态学FAB分型为主，也是诊断的基础，而MICM检查针对各检测项目有不同的检查程度，因此将FAB分型、MICM检查联合应用才能得到更加完善和准确的结果。

[1] 张之南,沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].3版.北京：科学出版社,2007：116-134.

[2] 许晓东,胡翠华,常乃柏,赵声明.成人急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床预后分析[J].中国实用诊断学,2010,14(3)：423-426.

[3] 胡晓梅,杨晓红,王洪志等.急性髓细胞白血病表达CD7抗原的临床意义以及与细胞遗传学的相关性[J].临床血液学杂志,2009,22(1)：2-5.

[4] 郭凡,潘洁茹,肖平.急性早幼粒白血病65例MICM分型分析[J].实用医技杂志,2015,22(11)：1195-1196.