缬沙坦对原发性高血压患者外周PBMC中IL—17表达的影响

乔君 高翔 王瑜 梅仁彪

摘 要：目的 探討血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂缬沙坦对高血压患者外周血单核细胞中IL-17表达的影响。方法 选取2016年9月～2017年10月在我院收治的原发性高血压患者98例，将所有患者按照随机数字表法分为缬沙坦组和硝苯地平组，各49例，缬沙坦组患者使用缬沙坦治疗，硝苯地平组患者使用硝苯地平缓释片治疗，另选取健康体检者20例为正常组。采集患者治疗前及治疗4周后静脉血，分离PBMC体外培养5 h后用RT-PCR法测定IL-17 mRNA表达水平；培养上清液采用ELISA法测定IL-17浓度。结果 治疗4周后缬沙坦组与硝苯地平组血压变化比较，差异无统计学意义（P>0.05）；缬沙坦组治疗后PBMC中IL-17 mRNA表达及培养上清液中IL-17浓度分别为（0.29±0.09），（76.16±20.56）pg/ml，低于硝苯地平组的（0.50±0.15），（137.84±39.97）pg/ml，组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 缬沙坦可显著降低高血压患者PBMC中IL-17的表达，有助于延缓疾病发展。

关键词：缬沙坦；高血压；IL-17

中图分类号：R544.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.07.021

文章编号：1006-1959（2018）07-0065-04

The Effect of Valsartan on the Expression of IL-17 in Peripheral PBMC of Patients with Essential Hypertension

QIAO Jun1，2，GAO Xiang3，WANG Yu1，MEI Ren-biao1

（1.Department of Medical Science and Research，Anhui University Of Science and Technology Medical College，Huainan 232001，Anhui，China；

2.Department of Laboratory，Huainan Second People's Hospital，Huainan 232072，Anhui，China；

3.Department of Internal Medicine，Huainan Second People's Hospital，Huainan 232072，Anhui，China）

Abstract：Objective To investigate the effect of valsartan， an angiotensinⅡreceptor blocker，on the expression of IL-17 in peripheral blood monocytes of patients with hypertension.Methods 98 patients with essential hypertension admitted in our hospital from September 2016 to October 2017 were randomly divided into valsartan group and nifedipine group（49 cases each）.Patients in valsartan group were treated with valsartan，nifedipine group was treated with nifedipine sustained release tablet，and 20 healthy cases were selected as normal group.Venous blood was collected before and after 4 weeks of treatment.The expression of IL-17 mRNA was measured by RT-PCR method after 5 h culture of PBMC in vitro，and the IL-17 concentration was measured by ELISA method in the supernatant of culture supernatant.Results After 4 weeks of treatment， there was no significant difference in blood pressure between valsartan group and nifedipine group，the difference was not statistically significant（P>0.05），the IL-17 mRNA expression in PBMC and the concentration of IL-17 in the culture supernatant of the valsartan group were（0.29±0.09），（76.16±20.56）pg/ml，respectively，lower than that of the nifedipine group（0.50±0.15），（137.84±39.97）pg/ml，the difference between the groups was statistically significant（P<0.05）.Conclusion Valsartan can significantly reduce the expression of IL-17 in the PBMCs of hypertensive patients and help to delay the development of the disease.

Key words：Valsartan；Hypertension；IL-17

原发性高血压（essential hypertension，EH）是指以体循环动脉压增高为特征的临床综合征。长期高血压可影响心、脑、肾等重要器官的功能，最终导致这些器官功能衰竭，引发心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、心源性猝死、脑卒中、肾小球硬化及肾实质纤维化等多种并发症。目前研究证实高血压与免疫紊乱具有相关性，白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）是一种促炎细胞因子，在高血压时通过多重作用，对高血压的维持和发展起重要作用。血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂（angiotensin Ⅱ receptor blocker，ARB）可与血管紧张素Ⅱ1型受体（angiotensin II type 1 receptor，AT1R）结合从而拮抗血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）的升压作用。钙通道阻滞剂（calcium-channel blocker，CCB）主要通过阻断心肌和血管平滑肌细胞膜上的钙离子通道，抑制细胞外钙离子内流，使细胞内钙离子水平降低而引起心血管等组织器官功能改变。ARB和CCB都是治疗高血压的常用药物。目前研究发现ARB在发挥降压作用的同时，对机体的免疫系统也会产生影响。本研究旨在探究ARB与高血压患者外周PBMC中IL-17蛋白及其mRNA表达是否存在关联以及如何影响IL-17蛋白及其mRNA的表达。

1 材料与方法

1.1 材料 PBMC分离液（Solarbio），PMA（Mkbio），Ionomycin（Mkbio），RPMI-1640（Hyclone），逆转录试剂盒（Thermo scientific），Taq PCR Master Mix（上海生工），PCR引物（上海生工），IL-17A ELISA試剂盒（eBioscience），梯度PCR仪（Biometra Tgradient）， Multiskan Mk3型酶标仪（Thermo Fisher Scientific），VIW-2三恒电泳仪（浙江建德电表仪器厂），凝胶成像仪（Bio-Rad）。

1.2一般资料 2016年9月～2017年10月在淮南市第二人民医院门诊体检正常者20例为正常组，门诊或住院治疗的原发性高血压患者98例。本研究经医院伦理委员会批准。入组标准：①符合《国家基层高血压防治管理指南2017》中的诊断标准；②年龄>18岁且<80岁；③所有受试对象均知晓本次研究并签署知情同意书。排除标准：①各种继发性高血压患者；②自身免疫性疾病患者；③严重感染性疾病及血液病患者。根据随机数字表法将98例原发性高血压患者分为缬沙坦组和硝苯地平组，每组49例。缬沙坦组中，男26例，女23例，年龄36～77岁，平均年龄（65.32±7.65）岁；1级高血压19例，2级高血压25例，3级高血压5例。硝苯地平组中男，25例，女24例，年龄37～76岁，平均年龄（65.98±7.15）岁；1级高血压20例，2级高血压23例，3级高血压6例。正常组中，男11例，女9例，年龄39～75岁，平均年龄（62.32±6.62）岁。三组性别、年龄、高血压分级比较，差异无统计学意义（P>0.05），研究可进行。

1.3方法 患者入组前均未接受过降压药物治疗或停用2周以上降压药物。缬沙坦组给予缬沙坦分散片（80 mg，皇隆制药，H20050508）80 mg，1次/d，清晨口服；硝苯地平组给予硝苯地平缓释片（Ⅰ）（10 mg，步长高新制药，H61023583）10 mg，2 次/d；两组患者疗程均为4周。

1.3.1血压的测量 清晨空腹安静状态下用水银柱血压计测量3次血压，每次间隔1 min。3次读数取平均值作为最终测量结果。

1.3.2 PBMC中IL-17 mRNA的检测 治疗前后清晨空腹用肝素真空采血管采集肘静脉血3 ml，使用PBMC分离液分离PBMC，用RPMI 1640调整细胞浓度为2×106/ml。取细胞悬液300 μl加入12 μg/ml PMA工作液7.5 μl和50 μg/ml Ionomycin工作液6 μl，混匀，于5% CO2培养箱37 ℃培养5 h。加入Trizol 1 ml，按照氯仿-异丙醇法提取总RNA，随后按照逆转录试剂盒说明书合成cDNA第一链。用Primer premier 6.0软件设计IL-17 mRNA引物，以GAPDH mRNA为内参。引物序列如下：GAPDH上游引物5'-GCCACATCGCTCAGACA-3'，下游引物5'- CCTGCTTCACCACCTTCT-3'，产物长度812bp；IL-17上游引物5'-CAACCTGAACATCCATAACC-3'，下游引物5'-GTCGGCTCTCCATAGTCT-3'，产物长度380bp。PCR反应体系组成：Taq PCR Master mix 12.5 μl，cDNA模版2 μl，上游引物（10 μmol/L）1 μl，下游引物（10 μmol/L）1μl，RNase-Free ddH2O 8.5 μl， 混匀并短暂离心。PCR扩增参数为：预变性95 ℃ 5min，变性94 ℃ 30 s，退火55 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 30 s，共35个循环，终末延伸72 ℃ 10 min。产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳30 min（100 V），使用凝胶成像仪拍照并测量IL-17 mRNA的相对表达量。

1.3.3培养上清液中IL-17浓度的检测 上述培养液在加入Trizol前，先离心后收集部分上清液置-85 ℃冰箱冷冻保存。按照ELISA试剂盒使用说明书操作，使用酶标仪测量OD值并计算IL-17血浆浓度。

1.4统计学处理 采用SPSS13.0软件进行统计学分析，试验结果数据均以（x±s）表示，组间比较应用单因素方差分析（oneway，ANOVA），若方差齐者则采用LSD法比较两组间差异，数据间相关性采用Pearson检验，当P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示统计学差异显著。

2 结果

2.1两组治疗前后血压的比较 两组治疗前收缩压与舒张压差异无统计学意义（P>0.05），治疗后两组收缩压与舒张压均显著下降，但两组间差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2两组治疗前后IL-17 mRNA表达及IL-17浓度变化的比较 两组治疗前IL-17 mRNA表达及IL-17浓度差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后，缬沙坦组IL-17 mRNA表达及IL-17浓度显著下降，差异有统计学意义（P<0.01），硝苯地平组IL-17 mRNA表达及IL-17浓度下降不明显，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3缬沙坦组IL-17 mRNA及IL-17表达水平与血压水平的相关性分析 缬沙坦组高血压患者经治疗后PBMC中IL-17 mRNA相对表达量的下降值与收缩压的下降值进行线性相关统计学分析，相关系数r=0.854，双侧Pearson检验P<0.05，有统计学意义，见图1。PBMC培养上清液中IL-17浓度下降值与收缩压下降值进行线性相关统计学分析，相关系数r=0.798，双侧pearson检验P<0.05，有统计学意义，见图2。

3 讨论

目前研究证实高血压的发生、发展中存在着低程度的炎症反应与免疫紊乱。AngⅡ作为肾素-血管紧张素系统（RAS）中的循环激素在心血管系统中发挥重要的调节作用，此外还可能作为组织RAS的成分发挥局部作用。生理水平的AngⅡ与属于G蛋白偶联受体家族的AT1R结合，后者激活并促进细胞内信号级联放大，最终发挥调节血压和体液平衡的作用。AT1R的过度刺激可引起高血压等疾病，在这一过程中血压轻度升高可能引起轻微的组织损伤以及损伤相关分子模式和新抗原的形成，导致抗原提呈细胞活化、初始CD4+T细胞极化为炎性细胞，分泌多种炎性因子，结果使得组织器官损伤加重、血压进一步升高。

ARB是治疗高血压的常用药物之一，降压作用明确且降压效果与其他抗高血压药物相似，可单独或与其他抗高血压药联合使用。ARB是非肽类小分子量化合物，可与AngⅡ竞争性结合AT1R，从而阻断AngⅡ的升压作用，此外，ARB在减轻左心室肥厚、小动脉重塑[1]、大动脉硬化[2]方面的作用优于其他抗高血压药物。目前研究发现ARB可通过影响动脉重塑及减少动脉壁纤维化而缓解血管硬化[3]，但具体机制仍不清楚。近期发现属于ARB的缬沙坦可调节心脏水通道蛋白1和血管生成因子的表达而发挥心血管的保护作用[4]。

在涉及高血压的炎性细胞中，Th17细胞发挥着重要作用。Th17细胞是一群独特的CD4+细胞，因分泌IL-17而得名。IL-17具有强大的促炎作用，可促进其他炎性细胞因子、趋化因子的产生，并有促进纤维化作用[5]，此外还可调节肾钠转运，促进血管、肾脏的损伤及高血压的维持[6]。那么ARB的治疗作用与IL-17是否存在某种关联呢？这就是我们此项研究的切入点。

我们在研究中发现，经缬沙坦治疗之后患者血压显著下降，说明缬沙坦具有确切的抗高血压作用。同时我们还发现，经缬沙坦治疗之后患者外周PBMC中IL-17 mRNA表达显著下调，培养上清液中IL-17浓度显著下降，且下降值与血压下降值存在显著的正相关性。鉴于IL-17强大的促炎作用，其mRNA及蛋白表达的下调对于组织器官损伤的修复无疑是有益的，那么，缬沙坦对于改善血管内皮功能和减少血管及肾脏等器官纤维化的作用是不是通过或部分通过IL-17信号来实现的呢？这还有待于进一步研究。总之，缬沙坦可以有效地降低血压并可降低外周PBMC中IL-17 mRNA表达以及IL-17浓度，有助于减轻或延缓高血压并发症的发生。

参考文献：

[1]Agabiti-Rosei E，Heagerty AM，Rizzoni D.Effects of antihypertensive treatment on small artery remodelling[J].J Hypertens，2009，27（6）：1107-1114.

[2]Boutouyrie P，Lacolley P，Briet M，et al.Pharmacological modulation of arterial stiffness[J].Drugs，2011，71（13）：1689-1701.

[3]Laurent S，Boutouyrie P.Dose-dependent arterial destiffening and inward remodeling after olmesartan in hypertensives with metabolic syndrome[J].Hypertension，2014，64（4）：709-716.

[4]Jiang Y，Wang HY，Zheng S，et al.Cardioprotective effect of valsartan in mice with short-term high-salt diet by regulating cardiac aquaporin 1 and angiogenic factor expression[J].Cardiovasc Pathol，2015，24（4）：224-229.

[5]Saleh MA，Norlander AE，Madhur MS.Inhibition of Interleukin 17-A but not Intereukin-17F Signaling Lowers Blood Pressure and Reduces End-organ Inflammation in Angiotensin Ⅱ-induced Hypertension[J].JACC Basic Transl Sci，2016，1（7）：606-616.

[6]Norlander AE，Saleh MA，Kamat NV，et al.Interleukin-17A regulates renal sodium transporters and renal injury in Angiotensin Ⅱ-induced hypertension[J].Hypertension，2016，68（1）：167-174.

收稿日期：2018-2-24；修回日期：2018-3-2

編辑/成森