正交试验优化参芪妇康颗粒的提取工艺Δ

2018-06-14孙臻张影汪杰陈明聪黄祖光高华宏三亚市妇幼保健院海南三亚57000三亚市中医院海南三亚57000广东省中药研究所广州510095

中国药房 2018年10期

孙臻，张影，汪杰，陈明聪，黄祖光，高华宏（1.三亚市妇幼保健院，海南三亚57000；.三亚市中医院，海南三亚 57000；3.广东省中药研究所，广州 510095）

参芪妇康颗粒为纯中药复方制剂，原方为三亚市妇幼保健院周玉海主任中医师临床经验方，有多年临床应用史。该方由黄芪、党参、当归、赤芍、红藤、败酱草、川楝子、香附、益母草、丹参、三棱、甘草等12味中药材组合而成，具有益气化瘀、清热祛湿之功效。临床研究表明，该方能显著降低人体血液黏稠度，改善微循环，提高免疫功能，用于治疗慢性盆腔炎的总有效率达93.33%[1]。

该方原为汤剂给药，易吸收、起效快，但口感差，不方便服用、携带和贮存。为提高患者用药依从性，本课题组以传统中医药理论为指导，结合现代制药技术，采用干法制粒技术将其改制为颗粒剂[2]，在保持汤剂优势的前提下，克服其不足，达到服用剂量小、疗效稳定、使用方便的目的。为确保制剂的提取效果，保证成品质量和疗效，本课题组根据处方药材的主要有效成分性质、药理作用、中药配伍原则和临床用药特点，确定采用全方水提取的方法，以干膏得率和75%乙醇浸出物含量作为评价指标，采用正交试验对该药的提取工艺进行优化，以期为其工业化生产提供一定参考。

1 材料

1.1 仪器

TC20KA型电子称、JJ300型电子分析天平（常熟市双杰测试仪器厂）；DHG-9036A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）；HHS-2型电子恒温不锈钢水浴锅（上海虞龙仪器设备有限公司）。

1.2 试剂

试验所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

1.3 饮片

黄芪（批号：20160401）、党参（批号：20160401）、当归（批号：20160501）、赤芍（批号：20160401）、红藤（批号：20160501）、败酱草（批号：20151102）、川楝子（批号：20151101）、香附（批号：20160501）、益母草（批号：20151103）、丹参（批号：20160401）、三棱（批号：20151101）、甘草（批号：20160401）均购自海南健鹏药业有限公司，经三亚市中医院药检室张影副主任中药师鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 指标的测定

2.1.1 干膏得率精密量取“2.2.2”项下样品溶液20 mL，分别置于干燥至恒定质量的蒸发皿中，水浴蒸干，浓缩、干燥，得干膏。按2015版《国家药典》（四部）通则0831“干燥失重测定法”[3]测定质量，计算干膏得率。干膏得率（%）=浸膏质量×200/（药材质量×20）×100%。

2.1.2 75%乙醇浸出物含量精密量取“2.1.1”项下干膏，粉碎，过2号筛，得干膏细粉，备用。称取上述干膏细粉2～4 g，精密称定，置于250 mL锥形瓶中，加75%乙醇溶液100 mL，密塞，称定质量，静置1 h；连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h；放冷，取下锥形瓶，密塞，称定质量，用75%乙醇溶液补足减失的质量，摇匀；用干燥滤器滤过，精密量取续滤液25 mL，置于干燥至恒定质量的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h；移至干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定质量。以干燥品计算供试品中75%乙醇浸出物含量（%）[3]。浸出物含量（%）＝（m/M）×（100/25）×100%，其中，m为蒸发皿中干膏质量，M为干燥样品质量。

2.2 单因素试验

2.2.1 药材吸水率考察按处方的2倍量称取药材，共3批，分别加10倍水量（L/kg，下同）浸泡药材至透心，6 h后弃去多余水分，称定药材质量，计算药材吸水率[4]。结果，药材吸水率为170%（RSD＝1.59%，n＝3）。因此，在第1次提取时应加1.7倍水量。

2.2.2 浸泡时间考察称取1/2处方量药材，第1次以1.7倍水量浸泡，第2次以10倍水量浸泡，均浸泡0.5、1、1.5、2 h，提取2次，每次1 h；滤过，取续滤液，合并，浓缩，放冷，以水定容至200 mL，得样品溶液。精密量取上述样品溶液20 mL，分别置于干燥至恒定质量的蒸发皿中，水浴蒸干。按2015版《国家药典》（四部）通则0831“干燥失重测定法”[3]测定质量，并计算干膏得率[5]。结果表明，浸泡时间对干膏得率影响不大，考虑节约时间和成本的原则，选择浸泡0.5 h。

2.3 正交试验

采用水提取法制备本品。以单因素试验结果为基础，确定第1次提取时加1.7倍水量，浸泡0.5 h。以干膏得率和75%乙醇浸出物含量为指标，以提取时间（A）、加水倍量（B）和提取次数（C）[6-8]为因素，采用L9（34）正交表进行试验设计优化提取工艺。采用加权综合评分法对正交试验所得的干膏得率和75%乙醇浸出物含量（%）进行综合评分[9]，权重系数各为0.5。加权综合评分＝（干膏得率×50/最高干膏得率）+（75%乙醇浸出物含量×50/最高75%乙醇浸出物含量）。因素与水平见表1，正交试验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 因素与水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素影响程度排序为C＞A＞B，直观分析得最优提取工艺为A3B2C3；A因素和B因素的影响均无统计学意义（P＞0.05），C因素的影响具有统计学意义（P＜0.05）。故从省时、降低生产成本等角度综合考虑，最后确定提取方案为A1B1C3，即加8倍水量，提取3次，每次1 h。

2.4 验证试验

称取1倍处方量药材，加8倍水量，提取3次，每次1 h，按“2.1”项下方法测定干膏得率和75%乙醇浸出物含量，按“2.3”项下方法计算加权综合评分。平行测定3批，结果见表4。结果表明，本工艺稳定可行。

表2 正交试验设计与结果Tab 2 Design and results of orthogonal tests

表3 方差分析结果Tab 3 Analysis result of variance

表4 验证试验结果（n＝3）Tab 4 Results of validation tests（n＝3）

3 讨论

干浸膏是口服中药复方制剂发挥临床疗效的最基础的物质，干膏得率高低直接影响制剂工艺和临床疗效，是水提工艺最有效、最直接的控制标准[10]。

本处方在临床以汤剂的形式使用多年，疗效显著。本课题组结合医院制剂室的生产条件，为尽量保持原方的疗效优势，故选择与汤剂相同形式的水提取法。

浸出物含量是复方中药制剂质量控制的另一个重要指标，通过测定浸出物含量可对中药复方制剂有效成分进行控制，充分体现中药复方多成分、多靶点治疗疾病的整体观，是保证中药制剂药效的重要手段[11]。方中黄芪、党参为君药，二者配伍使用，出自《脾胃论》中的补中益气汤，黄芪主要有效成分为黄芪甲苷等黄酮苷类[12]，党参主要有效成分为党参炔苷、苍术内酯、党参苷类[13]；臣药红藤、败酱草、益母草、香附、川楝子有效成分为生物碱[14-16]，上述有效成分均易溶于75%乙醇溶液。因此，本课题组以75%乙醇溶液为溶剂，对正交提取工艺水提液所得干膏进行浸出物含量测定。

中药复方制剂由于成分复杂、剂型多样化，用单一的考察指标筛选最佳提取工艺并不全面，亦不能代表中药制剂的整体质量和优劣。故采用加权综合评分方法，将干膏得率和75%乙醇浸出物含量作为提取工艺的考察指标，权重系数各设为0.5，按各指标对有效成分产生的影响进行权重分配，避免了考察指标的片面性，使优化的提取工艺更具科学性。

综上所述，优化的提取工艺操作稳定、质量可控，可为参芪妇康颗粒的工业化生产提供一定参考。

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