豆腐柴提取物对果蝇寿命的影响研究

◎ 孙 翌，李京雨，刘冀捷，王虹懿，彭 景

（扬州大学，江苏 扬州 225127）

豆腐柴（Premna microphylla Turcz）又名腐婢、观音草、臭黄荆、土黄芪（浙江）、满山香、止血草等，为马鞭草科豆腐柴属多年生落叶灌木，多生于山坡或林下等地，主要分布于热带及亚热带区域，如亚洲、澳大利亚、非洲等地，是一种重要的药食两用植物[1]。在我国，豆腐柴广泛分布于华东、华中、华南、四川、贵州等省区，是一种较为多见的药食两用植物[2]。《中药辞海》记载，豆腐柴性寒、味苦涩、主治疟疾、泻痢、痈、肿痛。《本草正义》记载，豆腐柴味苦气寒，专主温热邪病，实热蕴结及痈疮肿毒诸症，可服食，可外敷[3]。民间常用来治疗创伤出血、清热解毒、跌打损伤、烧伤、毒蛇咬伤及痢疾等症[4]。现代医学证明，豆腐柴具有增加体重但不增加脂肪含量、抗疲劳、抗炎、抗菌、抗氧化等作用。豆腐柴叶子中含有大量的果胶成分，可用来制作绿色果冻类食品，具有很高的食用价值。果蝇模型是经典的抗衰老模型之一，本实验以果蝇为实验对象，观察豆腐柴提取物对果蝇寿命的影响，以期为豆腐柴的开发利用提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 豆腐柴提取物的制备

取市售豆腐柴粉末120 g，加入蒸馏水于30 ℃水浴锅中浸泡24 h后进行过滤得到滤液，后经旋转蒸发得到提取物，于50 ℃干燥箱中干燥，制成粉末。

1.1.2 实验动物

美国野生型Oregon K黑腹果蝇，由南京医科大学提供。

1.2 方法

1.2.1 果蝇培养基

共制备4组果蝇培养基。普通培养基参考王彦平等人[5]的方法制备：玉米粉25 g，白糖25 g，琼脂粉1.875 g，酵母粉0.7 g，水250 mL。实验组培养基共设立低、中、高3种不同剂量，其豆腐柴提取物的浓度分别为1.2、2.4、3.6 mg/mL。

1.2.2 果蝇的处理及培养

取8 h内羽化未交配的果蝇成虫，乙醚麻醉后雌雄分管培养，对照组用普通培养基，实验组设为低、中、高3组含不同豆腐柴提取物剂量的培养基，每组雌雄果蝇各60只，每根培养管中装入20只果蝇，即每组有3管雌果蝇和3管雄果蝇共120只，在温度（25±1）℃，相对湿度为50%～60%的恒温恒湿培养箱中培养，每4 d更换1次培养基。

1.2.3 寿命统计

每天统计果蝇的生存数和死亡数（对于飞走和非正常死亡的果蝇不计入统计），全部果蝇寿命的算术平均数为果蝇的平均寿命，前半数果蝇寿命的算术平均数为果蝇的半数死亡期，每组最后死亡的10只果蝇的算术平均数为果蝇的最高寿命。

1.2.4 数据统计

利用Excel和SPSS 16.0统计软件方差分析对数据进行统计学处理，数据以平均值±标准差（x-±s）表示。

2 结果

2.1 豆腐柴提取物对果蝇平均寿命的影响

由表1可知，低剂量组和中剂量组均能延长雌性果蝇的平均寿命，其中低剂量组延长幅度比中剂量组大，低剂量组与对照组相比具有极显著差异（P＜0.01），中剂量组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05），高剂量组则减少雌性果蝇的平均寿命，与正常组相比具有极显著差异（P＜0.01）。低、中、高剂量组均可以增加雄性果蝇的平均寿命，延长幅度低剂量组最好，高剂量组最差，与对照组相比低剂量组具有极显著差异（P＜0.01），中剂量组具有显著差异（P＜0.05）。

表1 豆腐柴水提取物对果蝇平均寿命的影响表s）

表1 豆腐柴水提取物对果蝇平均寿命的影响表s）

注：*表示与正常组相比存在显著差异，P＜0.05；**表示与正常组相比存在极显著差异，P＜0.01。

对照组 雌性 53 41.77±3.10雄性 54 36.48±3.05低剂量组 雌性 59 48.08±5.42** 15.11雄性 57 43.96±5.33** 20.86中剂量组 雌性 50 43.74±4.60* 4.71雄性 57 38.05±3.80* 4.61高剂量组 雌性 58 39.09±3.37** -6.43雄性 54 37.74±3.18 3.75

2.2 豆腐柴提取物对果蝇半数死亡期的影响

由表2可知，低、中剂量组可以延长雌性果蝇的半数死亡期，低剂量组的延长幅度最大，低剂量组与正常组相比具有极显著差异（P＜0.01），高剂量组则可以降低雌性果蝇的半数死亡期，且与正常组相比具有极显著差异（P＜0.01）。低、中、高剂量组均能延长雄性果蝇的半数死亡期，其中低剂量组的延长幅度最大，中、高剂量组延长幅度相近，低剂量组与正常组相比具有极显著差异（P＜0.01）。

表2 豆腐柴水提取物对果蝇半数死亡期的影响表（s）

表2 豆腐柴水提取物对果蝇半数死亡期的影响表（s）

注：**表示与正常组相比存在极显著差异，P＜0.01。

组别 性别 果蝇数 半数死亡期/d 延长幅度/%对照组 雌性 27 39.74±3.03雄性 27 34.22±2.26低剂量组 雌性 30 44.33±4.18** 11.56雄性 29 39.52±2.53** 15.47中剂量组 雌性 25 40.08±3.28 0.85雄性 29 35.17±2.48 2.78高剂量组 雌性 29 36.24±1.79** -8.81雄性 27 35.15±2.03 2.71

2.3 豆腐柴提取物对果蝇最高寿命的影响

由表3可知，低、中剂量组可以延长雌性果蝇的最高寿命，其中低剂量组的延长幅度最大，低、中剂量组与对照组相比均具有极显著差异（P＜0.01），高剂量组对延长雌性果蝇的最高寿命有副作用，与对照组相比不具有显著差异（P＞0.05）。低、中、高剂量组均可以增加雄性果蝇的最高寿命，低剂量组延长幅度最大，中剂量组次之，高剂量组延长幅度最小，低、中剂量组与对照组相比均具有极显著差异（P＜0.01），高剂量组与对照组相比具有显著差异（P＜0.05）。

表3 豆腐柴水提取物对果蝇最高寿命的影响表（s）

表3 豆腐柴水提取物对果蝇最高寿命的影响表（s）

注：*表示与正常组相比存在显著差异，P＜0.05；**表示与正常组相比存在极显著差异，P＜0.01。

对照组 雌性 53 45.00±0.67雄性 54 40.60±0.97低剂量组 雌性 59 56.00±2.45** 24.44雄性 57 51.90±1.66** 27.83中剂量组 雌性 50 49.40±1.26** 9.78雄性 57 43.50±1.78** 7.14高剂量组 雌性 58 43.90±1.20 -2.44雄性 54 42.00±0.82* 3.45

3 讨论

果蝇是一种真核多细胞生物，具有生命周期短、可在短时间内大量繁殖、饲养简单、反应灵敏等优点，其代谢系统、生理功能、生长发育等同哺乳动物基本相似，所以在衰老与抗衰老研究中，果蝇以其自身的诸多优势成为研究抗衰老的实验材料。衰老是一个十分复杂的现象，研究表明衰老与机体的氧化损伤有关，是由于机体代谢产生的活性氧成分造成的损伤累积引起的[6]。前期有报道指出豆腐柴根的三氯甲烷-甲醇（2∶1）提取物可增强机体非特异性免疫功能[7]。此外，从豆腐柴叶中分离得到的一种三萜皂苷具有显著的抗菌作用及细胞毒性[8]。XU等[9]研究发现豆腐柴根和叶中抗坏血酸及β-胡萝卜素含量丰富，此二者均具有明显的抗氧化作用[10]。谢娟平[11]研究了犁头草、商陆、车前草、豆腐柴及箭叶淫羊藿5种天然植物的抗氧化能力，实验证明这5种天然植物均具有较强的抗氧化能力，但其中抗氧化作用最强的是豆腐柴。

在本实验的研究中，添加不同剂量的豆腐柴提取物的低、中、高3组实验组与对照组相比，低剂量组对果蝇的平均寿命、半数死亡期和最高寿命的延长幅度最佳。产生这一现象的可能原因是豆腐柴提取物具有的味道果蝇并不喜欢，所以浓度增大对于果蝇的摄入量会有影响。同时观察得到不同剂量组对果蝇寿命的影响存在性别上的差异，高剂量组对雌性果蝇的寿命延长具有不利的影响，而对雄性果蝇的寿命延长能产生有利影响，造成这种差异的原因有待于进一步研究。本实验初步得到适当浓度的豆腐柴提取物可以延长果蝇寿命，具备一定的抗衰老作用，但仍需要进一步研究从而阐明其内在的影响机制，为豆腐柴今后的充分开发利用提供科学依据。

[1]Ayinampudi S，Domala R，Merugu R，et al.New icetexane diterpenes with intestinal α-glucosidase inhibitory and free-radical scavenging activity isolated from Premna.tomentosa roots[J].Fitoterapia，2012，83（1）：88-92.

[2]中国科学院植物所.中国高等植物图鉴[M].北京：科学出版社，1983.

[3]高燕妮，路 锋，高 昂，等.豆腐柴药学研究概况[J].安徽农业科学，2011，39（32）：19811-1982.

[4]HU Z，XUE Y，YAO G，et al. Chemical constituents from the leaves of Premna microphylla turcz[J].J Chin Pharmaceutical Sci，2013，22（5）：431-434.

[5]王彦平，曹 娅，谢克英，等.紫山药多糖抗氧化及延长果蝇寿命的作用[J].营养学报，2017（4）：386-389.

[6]Harman D. The aging process[J].Proc Natl Acad Sci USA，1981（78）：7124-7128.

[7]高贵珍，曹稳根，刘晓阳，等.豆腐柴根提取物对小鼠非特异性免疫功能的影响[J].生物学杂志，2003，20（1）：25-26.

[8]ZHAN Z，TANG L，SHAN W. A new triterpene glycoside from Premna microphylla[J].Chem Nat Comp，2009，45（2）：197-199.

[9]XU F，LI L，HUANG X，et al. Antioxidant and antibacterial properties of the leaves and stems of Premna microphylla[J].J Med Plants Res，2010，4（23）：2544-2550.

[10]NORHAIZA M，MAZIAH M，HAKIMAN M.Antioxidative properties of leaf extracts of a popular alaysian herb, Labisia pumila[J].J Med Plant Res，2009，3（4）：217-223.

[11]谢娟平，姜雄波.5种天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比较研究[J].食品科学，2010，31（21）：173-175.