氟尼辛葡甲胺注射液对靶动物奶牛的安全性研究

孟 芳，郑 莉，林 红，冯言言，田振平，孔 梅*，吴连勇*

(1.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100；2.齐鲁晟华制药有限公司，山东德州251500)

氟尼辛葡甲胺，为非甾体类抗炎药物(NSAIDs)，美国先灵葆雅公司于20世纪90年代将其开发成注射剂并于1998年由FDA[1]批准用于治疗由牛呼吸系统疾病、内毒素血症及急性奶牛乳房炎所导致的发热。2007年，农业部第865号公告批准氟尼辛葡甲胺注射液用于家畜及小动物发热性、炎症性疾患、肌肉痛和软组织痛。与传统的NSAIDs相比，氟尼辛葡甲胺化学结构独特，解热镇痛作用强，毒副作用低，在牛奶中代谢迅速，休药期短[2-3]。NSAIDs由于起效迅速，可解热、减轻炎症肿胀及疼痛并能改善功能，对控制疾病的进程乃至预后发挥着至关重要的作用，临床中常与抗生素联合使用[4-5]，需求量十分巨大，因此，其在临床使用中的安全性尤为重要。目前国内尚无氟尼辛葡甲胺注射液对靶动物奶牛安全性的相关研究。本试验选用健康泌乳奶牛进行氟尼辛葡甲胺注射液的靶动物安全性试验，以期为临床用药提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 药品 氟尼辛葡甲胺注射液，规格100 mL：5 g；批号：1402001，由齐鲁动物保健品有限公司提供；推荐用药方法：静脉注射：一次量，每1 kg体重，奶牛2.2 mg/kg，连用不超过5 d。

1.2 仪器 全自动血细胞分析仪(CELL-DYN 400，美国雅培公司)；Technion全自动生化分析仪(RA-1000，美国泰尔康公司)；牛奶体细胞计数仪(KD-400，北京康达智信科技有限公司)。

1.3 动物 从北京市房山区奶牛场的240多头荷斯坦奶牛(胎次：2～3胎)中随机选择泌乳期健康奶牛20头，体重为400～450 kg。

1.4 试验分组及给药[6]20头奶牛随机分成4个组，每组5头。其中3个受试药物组，即1×(2.2 mg/kg bw)、3×(6.6 mg/kg bw)、5×(11.0 mg/kg bw)推荐剂量组，每日上午8点挤奶后颈静脉注射给药1次，连续给药7 d，并于最后一次给药后临床观察3 d。空白对照组，注射灭菌注射用水。

1.5 观测指标

1.5.1 奶牛临床表现和乳房局部症状 整个试验期间，观察记录用药奶牛的精神状态、采食饮水、粪尿排泄、直肠温度、呼吸、脉搏、乳房局部症状(肿胀、潮红发热、疼痛等)等临床表现，分别在首次给药前第0日和首次给药后第3日和第7日对各组奶牛的上述临床表现按给定标准进行评分(表1～表2)。

表1 奶牛一般临床表现观察Tab 1 General Physical Examination of dairy cow

表2 奶牛临床症状和乳房局部症状评分表Tab 2 The score of clinical symptom of mammary gland

1.5.2 血液生理指标 分别在首次给药前第0日和首次给药后第3日和第7日对各组奶牛颈静脉采血5～10 mL，进行血常规检查。检测参数包括红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血红蛋白(HGB)、平均红细胞体积(MCV)、血小板计数(PLT)等。

1.5.3 血液生化指标 分别在首次给药前第0日和首次给药后第3日和第7日对各组奶牛颈静脉采血5～10 mL，进行血液生化学检查。检测参数包括胆固醇(CHOL)、血尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、肌酐(CREA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)等。

1.5.4 体细胞数 在首次给药前第0日和首次给药后第3日和第7日对各组奶牛进行桶奶采集，采集为每日挤奶三次的中间一次，即上午给药后的那一次，进行桶奶牛奶中体细胞数指标测定。

1.6 结果判定、数据处理 观察记录各剂量组和空白对照组试验奶牛用药前后的临床症状，记录各试验组奶牛的血液生理指标和血清生化指标数值，使用SPSS20.0统计软件计算各指标的平均值与标准差，采用t检验比较各指标的差异性。

2 结果与分析

2.1 各剂量组奶牛直肠体温、脉搏和呼吸次数 整个试验期间，给药组和对照组奶牛直肠体温、脉搏和呼吸次数均在正常范围之内。在不同组别的不同时间以及同一组别不同时间点，上述三个指标差异均不显著(P>0.05)。

2.2 各剂量组奶牛临床表现和乳房局部症状评分

对泌乳期奶牛连续给药7 d及停药后3 d的试验期间，观察其精神状态、采食饮水、粪尿排泄和乳房局部症状(肿胀、潮红发热、疼痛等)，随着给药剂量增加、给药后体内作用时间延长，不同组别的不同时间以及同一组别不同时间点，所有动物行为未见异常，未见明显不良反应，也未发现动物死亡。

2.3 各剂量组奶牛血液生理、血清生化指标比较

2.3.1 血液学指标检查 随着给药剂量增加，给药后体内作用时间延长，各试验组与对照组奶牛在不同时间点以及同一组别不同时间点的血液学指标平均值未出现异常，均在奶牛正常生理指标范围之内(表3～表6)，因此，未进行统计学分析，说明即使5×推荐剂量氟尼辛葡甲胺注射液对奶牛血液指标也无显著影响。

表3 空白对照组给药后0 d、3 d、7 d时血液学指标值Tab 3 The Hematology of the control group on day 0,3,7 after

红细胞数(RBC)；平均红细胞体积(MCV)；红细胞平均血红蛋白含量(MCH)；血红蛋白(HGB)；白细胞(WBC)；淋巴细胞(LYM#)；血小板计数(PLT)(下同)

表4 1×剂量组给药后0 d、3 d、7 d时血液学指标值Tab 4 The Hematology of the 1× group on day 0,3,7 after

表5 3×剂量组给药后0 d、3 d、7 d时血液学指标值Tab 5 The Hematology of the 3× group on day 0,3,7 after

表6 5×剂量组给药后0 d、3 d、7 d时血液学指标值Tab 6 The Hematology of the 5× group on day 0,3,7 after

2.3.2 血清生化指标检查 1×、3×推荐剂量组奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日和7日以及5×推荐剂量组奶牛首次给药前第0日和首次给药后3 d的血清生化数据与对照组奶牛不同采样点时间获得的血清生化指标均在正常范围之内，之间无显著差异(表7～表10)，但对于5×推荐剂量组奶牛，首次给药后7 d，5头奶牛中有2头奶牛出现尿素氮和肌酐水平升高，说明5×推荐剂量注射给药对部分奶牛肾脏功能有影响。

表7 空白对照组奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日时血清生化指标值Tab 7 The Blood Chemistry of the control group on day 0,3,7 after

续表

白蛋白(ALB)；碱性磷酸酶(ALKP)；丙氨酸氨基转移酶(ALT)；天冬氨酸转氨酶(AST)；血尿素氮(BUN)；胆固醇(CHOL)；肌酐(CREA)；直接胆红素(DBIL)；葡萄糖(GLU)；总胆红素(TBIL)；胆碱酯酶(CHE)；总蛋白(TP)(下同)

表8 1×剂量组奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日时血清生化指标值Tab 8 The Blood Chemistry of the 1× group on day 0,3,7 after

表9 3×剂量组奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日时血清生化指标值Tab 9 The Blood Chemistry of the 3× group on day 0,3,7 after

表10 5×剂量组奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日时血清生化指标值Tab 10 The Blood Chemistry of the 5× group on day 0,3,7 after

2.4 试验奶牛乳汁体细胞数 各组试验奶牛在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日采集奶样进行SCC检测，统计分析结果见表11。数据可见：在首次给药前第0日和首次给药后第3日、第7日各组试验奶牛的SCC算术平均值均未超过50万/mL，且组内与组间不同时间点相比，统计学差异不显著，而且体细胞数均在正常范围内，说明奶牛乳房处于健康状态。

表11 试验奶牛首次在给药前第0日和首次给药后第3日、第7日乳汁SCC检测值比较Tab 11 The SCC in milk of each group on day 0 and 7 after

3 结 论

本试验评估了氟尼辛葡甲胺注射液对奶牛的靶动物安全性，为该制剂在奶牛临床中的使用提供了科学依据。美国食品药品监督管理总局(FDA)报道了先灵葆雅公司开发的氟尼辛葡甲胺注射液对肉牛靶动物安全性试验研究[1]，试验中分别给予1×(2.2 mg/kg bw)、3×(6.6 mg/kg bw)、5×(11.0 mg/kg bw)推荐剂量，每日静脉注射1次，连续给药9 d，结果显示，3×和5×给药剂量组动物的尿液中血细胞比例明显增加，甚至出现尿液潜血的现象，这说明高剂量给药对牛肾脏功能有影响。本研究中，氟尼辛葡甲胺注射液对奶牛的临床症状、乳房局部症状、血液学指标无影响，仅5×推荐剂量组在给药后7 d，有2头奶牛出现尿素氮水平升高，说明高剂量给药对奶牛的肾脏功能有显著影响，与FDA的报告基本一致。

国内尚无氟尼辛葡甲胺注射液在奶牛上使用的安全性研究。吴文学[7]等的研究中采用15头长白杂交商品猪，分为1×(1.1 mg/kg bw)、3×(3.3 mg/kg bw)、5×(5.5 mg/kg bw)推荐剂量组三个组，给药后进行临床观察、显微病理和血液生化检查，3×、5×剂量组猪注射部位局部轻度肿胀，5×剂量组猪的血红蛋白值、淋巴细胞百分数和肌酐水平下降，丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶升高，可见高剂量的氟尼辛葡甲胺会对猪的肝脏功能造成一定程度的影响。

在本文研究中，1×、 3×推荐剂量组奶牛分别给予2.2、6.6 mg/kg bw剂量的氟尼辛葡甲胺注射液，每日1次，连用7 d，所有奶牛的临床症状、乳房局部症状、血液生理指标和血清生化指标均未受到影响，说明氟尼辛葡甲胺注射液临床应用于奶牛是安全的，不影响奶牛的正常生理功能，不会对奶牛产生治疗外的影响。需要注意的是5×推荐剂量组给药7 d后有2头奶牛出现尿素氮、肌酐水平升高，尿素氮和血肌酐是肾功能的两个重要指标，这两个指标升高可能是由于微小循环损伤、肾小球损伤和基底膜损伤等主要病理变化所引起，由于未进行病理剖检，因此，未最终确诊病理改变。由此得出，氟尼辛葡甲胺注射液超剂量长期使用会对奶牛的肾脏功能造成一定程度损伤，因此，在临床使用中严禁超剂量长期使用。

参考文献：

[1] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/Products/ApprovedAnimalDrugProducts/FOIADrugSummaries/ucm064905.pdf.

[2] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Maximum_Residue_Limits_-_Report/2009/11/WC500014324.pdf.

[3] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/Products/ApprovedAnimalDrugProducts/FOIADrugSummaries/ucm064910.pdf.

[4] Thiry J,Gonzalez-Martin JV,Elvira L,et al. Treatment of naturally occurring bovine respiratory disease in juvenile calves with a single administration of a florfenicol plus flunixin meglumine formulation[J]. Vet Rec,2014,174(17):430.

[5] Guzel M, Karakurum M C, Durgut R, et al. Clinical efficacy of diclofenac sodium and flunixin meglumine as adjunts to antibacterial treatment of respiratory disease of calves[J]. Aust Vet J,2010,88(6):236-239.

[6] https://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/GuidanceComplianceEnforcement/GuidanceforIndustry/UCM052464.pdf.

[7] 吴文学，王中杰，李金祥.新兽药氟尼辛葡甲胺的研究[J]中国兽医杂志，2006，42(1)：51-53.

WU wenxue,WANG zhongjie,LI jinxiang.The study of the new animal durg flunixin meglumine[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine，2006,(42)1:51-53.