SBP1在鼻咽癌患者病理组织标本的表达分析及临床意义

秦开烈 张自雄 许昱

硒被认为是有效的抗癌剂，硒结合蛋白1（SBP1）是其在细胞代谢中产物之一，是发挥硒抗癌作用的重要中介，且在恶性肿瘤中呈现低表达趋势，并可能与患者预后密切相关而成为研究的热点[1]。SBP1可以存在于细胞浆和细胞核，也有报道提出在不同的细胞类型、分化程度和环境信号下SBP1定位可能有所差异[2]，这种差异甚至可能和肿瘤的恶性程度相关系。SBP1在人体各种器官组织中均有表达，包括心脏、肺、肾和肠道等等，但是引起人们关注的是一些在肿瘤细胞中的低表达趋势。我们以恩施地区的鼻咽癌患者作为研究对象，对其病理组织标本进行了检测分析，对其治疗后的预后进行了追踪随访，分析结果如下。

资料与方法

1 临床资料

选取2007～2012年在我院取材确诊为低分化鳞状细胞癌并进行常规放化疗的99例患者作为研究对象，其中男67例，女32例，年龄15～73岁，中位数为56岁。按照TNM标准进行分级分期，如表1。

表1 99例鼻咽癌患者分级分期情况（例，%）

入组标准为：①在我院病理科取材病理检查确诊为（鼻咽部）低分化鳞状细胞癌的患者； ②在我院肿瘤科进行了常规的放射治疗（达到直线加速器根治性剂量标准）和化疗（标准方案顺铂+5-氟两个疗程及以上）；③除患鼻咽癌以外其他身体机能状态良好；④确认最后死因为鼻咽癌所致或鼻咽癌晚期并发症；⑤较好的随访依从性。

2 病理组织标本检测

查找这些鼻咽癌患者蜡封病理组织标本，常规切片再次确认鼻咽癌的组织标本后进行免疫组化检测SBP1在标本组织中的表达，其结果由两位病理科副主任医师进行评判，并进行定性评级，分为“0～+++”四个等级，其中“0”代表病理组织标本基本没有SBP1表达，即每高倍视野下未见标记蛋白；“+”代表病理标本组织有零星或少量SBP1表达，即每高倍视野下可见标记蛋白细胞少于25%；“++”代表病理标本组织有较多的SBP1表达，即每高倍视野下可见标记蛋白细胞大于25%，但少于50%；“+++”代表病理标本组织有大量的SBP1表达，即每高倍视野下可见标记蛋白的细胞大于50%。最后将“0，+”定义为SBP1在组织标本中低表达，将“++，+++”定义为SBP1在组织标本中高表达。SBP1在鼻咽癌及鼻咽正常黏膜组织表达的典型表现，见图1。

图1 SBP1在病理组织标本中表达水平分级比较。图1-A代表“0”；图1-B代表“+”；图1-C代表“++”；图1-D代表“+++”。

3 鼻咽癌患者治疗后的追踪随访

通过整理肿瘤科鼻咽癌患者的跟踪随访记录，入组病例均达到了以下随访要求：①入组患者每半年有一次电话随访记录，直至死亡或本项研究开始之际；②入组患者每一年有一次入院全身体检记录，体检内容包括鼻咽部电子喉镜检查、鼻咽部水平位CT、颈部及全身主要脏器彩超检查，并将复诊结果记录在案；③随访到鼻咽癌死亡患者能够精确时间到月，同时明确死亡原因为鼻咽癌或其并发症；④本研究的随访截止日期为2016年10月。

4 统计学分析

运用卡方检验分析鼻咽癌病理组织标本中SBP1的表达趋势。运用kaplan meier方法分析评估鼻咽癌患者病理组织标本SBP1表达与患者无转移生存时间、无复发生存时间以及总体生存时间的相关性。运用二元逻辑回归分析评估SBP1表达和鼻咽癌患者分级分期的相关性。所有数据均使用SPSS 21.0(IBM Corporation,Armonk,NY)软件进行统计分析。P值＜0.05被认为差异具有统计学意义。

结果

1 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶组织标本中呈现出低表达趋势

利用免疫组化分析将所有鼻咽癌患者病理组织标本99例的SBP1表达进行病理医师评判，表达评定为 SBP1低表达 73例，其中“0”级 58例，“+”级15例；评定为SBP1高表达26例，其中 “++”级25例，“+++”级 1 例。通过分析 χ2=71.303a，P 值为 0，具有显著的统计学意义。

2 在鼻咽癌患者的病理组织标本中的癌巢SBP1表达与周边正常组织和覆盖其上的正常黏膜对比表达显著降低。利用免疫组化对比分析鼻咽癌的癌巢细胞与覆盖的正常黏膜组织和正常淋巴结组织可以显示癌细胞呈现SBP1的显著低表达，典型对比见图2。

图2 SBP1在病理组织标本中表达对比图。图2-ABD代表SBP1在周边正常组织细胞和癌巢细胞中表达对比；图2-C代表SBP1在覆盖的正常黏膜细胞和其下的癌巢细胞中表达对比。

3 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶组织标本中的表达与肿瘤的分级分期无明显相关性。将鼻咽癌患者病理组织标本中的SBP1表达的高低与患者的TNM及临床的分期进行相关性分析研究，没有发现明显的相关性，见表2，同时也说明SBP1在组织中的表达并没有随着肿瘤的进展而进一步发生表达的下

表2 SBP1在病理组织标本中的表达与鼻咽癌患者TNM和临床分期的相关性

4 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶组织标本中的表达与患者的预后具有显著相关性。通过对入组鼻咽癌患者的跟踪随访，记录患者的无复发生存期、无转移生存期和总生存期，并与其病理标本中SBP1的表达进行对比分析，其无复发生存期、无转移生存期和总生存期存在相关性，见图3，差异具有统计学意义。

图3 SBP1在病理组织标本中的表达与患者生存状况相关性分析图。图3-A，代表SBP1在病理组织标本中的表达与患者总体生存期相关性分析图；图3-B，代表SBP1在病理组织标本中的表达与患者无复发生存期相关性分析图；图3-C，代表SBP1在病理组织标本中的表达与患者无转移生存期相关性分析图。

讨论

SBP1基因差异表达在人类前列腺癌细胞中首先被发现，11株前列腺癌细胞中仅有4株可以检测到SBP1 mRNA的微弱表达[3]。接下来类似的现象在其他恶性肿瘤细胞中也得以证实，例如在胃腺癌与周边正常组织黏膜蛋白印迹对比中发现SBP1水平明显减少[4]，而且利用组织芯片检测观察到正常胃黏膜组织、癌前病变组织和癌组织SBP1表达水平随着疾病的进展而逐步减少的现象[4]，同样的结果也在食管腺癌中发现[5]。通过蛋白印迹、组织芯片等分析比较SBP1在肿瘤和正常组织出现显著下降的还包括肺腺癌、直肠癌、食管腺癌、肝细胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]。致使SBP1在人类癌症表达下降的原因仍有待于确定，一个可能的解释是在肿瘤进展过程中失去了SBP1基因部分。近来有学者发现表观遗传机制可能参与SBP1基因表达的转录调控，但目前仍无法得到明确的结果[7]。然而更吸引研究者兴趣的是SBP1在恶性肿瘤中的表达情况与患者预后的相关性，由此可以通过SBP1的表达水平来推断肿瘤的恶性程度和评估总体生存时间。在诊断为胸膜间皮瘤的患者检测到27个基因的表达与患者的生存率存在相关性，SBP1就是其中之一[8]。通过一些回顾性研究，使用蛋白印迹或组织芯片检测肿瘤组织中SBP1的表达，与临床随访的结果利用kaplan-meier进行生存率分析，发现SBP1表达越低就意味着越差的总体生存时间，这些已经在直肠癌、肺腺癌、胃癌、肝细胞癌、乳腺癌和结肠癌患者中得到了验证[9]，因此，SBP1表达水平下降被证明是恶性肿瘤患者预后不良的指标之一。

在我们的研究中，99例鼻咽癌患者按照入组要求作为研究对象，并进行了长期严格的随访，同时对入组患者的病理组织标本进行了免疫组化分析，得出了以下结论：鼻咽癌患者组织标本中的SBP1的表达呈现出下降的趋势，主要体现在两个方面，一是在入组患者病理标本中SBP1低表达者占据绝对优势（73/99）；二是入组患者病理标本中在癌巢细胞中SBP1的表达比周边正常组织中的黏膜和淋巴结的表达要明显减低。这与其他学者在肺腺癌、直肠癌、食管腺癌、肝细胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]研究中发现的现象保持了一致性，但是SBP1在肿瘤细胞中表达下降的具体机制仍不清楚，是肿瘤发生后的伴随表现还是SBP1在肿瘤发生、发展中扮演了关键角色仍需进一步的研究。同时SBP1的调控机制以及在硒代谢中扮演的角色研究甚少，需要进一步的研究探索。本研究中第二个发现就是鼻咽癌的无复发、无转移和总体生存期与病理组织标本中的SBP1的表达呈现显著的相关性，这一特点可能成为预测鼻咽癌患者预后的标志物之一。为进一步研究SBP1的表达与预后的相关性，一些研究者对肿瘤细胞进行了深入研究，SBP1表达促进了肿瘤细胞扩散和迁移,加快细胞分化与血管入侵。相比之下，增强SBP1表达式可能会导致肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移和肿瘤生长[10，11]，这些结果在动物身上也被验证。我们进一步分析SBP1表达与鼻咽癌患者TNM分级和临床分期之间无明显相关性，由此也可以推测SBP1在肿瘤的发展过程中并无进一步下调的趋势，这一结论与其他作者在胸膜间皮瘤[8]研究并不一致，因此还需要我们利用更多的数据进一步的研究证实。

总之,我们的研究表明鼻咽癌患者病理组织标本中SBP1的表达与正常组织相比有显著差异，并与鼻咽癌患者的预后密切相关,这样的结论有助于我们对鼻咽癌患者预后进行评估。但SBP1的表达下降的调控机制仍不明确且在肿瘤发生、发展中的作用和机制也有待于进一步阐明。

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