饲料中添加发酵沙棘籽渣对蛋鸡生产性能及肠道菌群的影响

廖天江

摘要：以黑曲霉作为发酵菌，在35℃环境下，按照接种量5%、料水比80%的奈件进行发酵试验，并对发酵产物的粗蛋白、蛋白酶、纤维素酶含量和氨基酸总量进行检测。为了研究发酵沙棘籽渣对蛋鸡生产性能及肠道菌群的影响，试验选取36羽270日龄蛋鸡，以玉米豆粕型为基础日粮，对4组蛋鸡分别饲喂添加0、0.4%、0. 8%或1.2%发酵沙棘籽渣的基础日粮，进行为期6周的饲养试验。试验结果显示沙棘籽渣经黑曲霉发酵后，粗蛋白含量和蛋白酶含量显著提高。与对照组相比，添加发酵沙棘籽渣对蛋鸡产蛋率和饲料转化率均有一定的改善作用，各试验组肠道中大肠杆菌数（单位为CFU/g）分别降低10. 66%、6.23%和4.67%（P<0.01）：添加0.8%的发酵后沙棘籽渣，双歧杆菌数量有极显著提高（P<0.01）。试验证明黑曲霉发酵可以提高沙棘籽渣的饲料价值，其不仅可以提高蛋鸡的生产性能，而且可以优化肠道中的菌群结构。

关键词：沙棘籽渣;发酵;蛋鸡;生产性能;肠道菌群

中图分类号：S 831.5

文献标志码：A

文章编号：1001-0769（2018）10-0061-03

沙棘为胡颓子科沙棘属落叶灌木或小乔木，生长适应性强，是我国广泛栽培的资源植物，果实营养价值丰富，饲料开发价值高。在沙棘果榨取果汁过程中，有果渣和籽渣的残渣物，含有多种营养成分和生物活性物质，如氨基酸、生物碱类、挥发油类、维生素、微量元素等，具有一定的营养价值，能提高饲料利用率，还具有增强免疫、抗应激、调节新陈代谢等作用，对畜禽的生长和生产性能的提高具有不同程度的促进作用。

本试验利用黑曲霉发酵沙棘籽渣为试验材料，通过试验分析黑曲霉发酵对沙棘籽渣营养成分的影响，进一步探讨饲料中添加发酵沙棘籽渣对蛋鸡生产性能的影响，分析蛋鸡肠道菌群的变化，构建不同比例发酵籽渣与蛋鸡生产性能及肠道菌群之间的量效关系，为在家禽养殖业利用沙棘籽渣提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试验菌株

黑曲霉由西北农林科技大学提供。将由斜面上刮下的黑曲霉孢子加入到用无菌水配制的20%的甘油中，然后接种到无菌的冷藏管中，低温保存。

1.1.2试验原料

沙棘籽渣由天水昌盛食品有限责任公司提供。沙棘果实经低温冷冻处理，再经机械挤压使沙棘籽粒与果皮、果汁分离，所得沙棘籽粒烘烤至含水量为3%。再将沙棘籽粉碎，粉碎度为100目，储存沙棘籽粉末，备用。

1.1.3培养基

马铃薯葡萄糖琼脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培养基：马铃薯200 g、琼脂20 g、葡萄糖20 g、蒸馏水1 000 mL。将去皮切塊的马铃薯置于锅中，加水1 000 mL煮1 h，取双层纱布过滤液，加糖和琼脂，溶解，补水至1 000 mL，121℃灭菌20 min。

1.2试验方法

1.2.1菌种的扩大培养

接种黑曲霉菌丝到PDA培养基上，恒温培养（28℃）72 h。

1.2.2种子液的制备

用无菌水冲洗扩大培养的黑曲霉，置于50 mL离心管（己灭菌）中，制成孢子悬浮液，用血球计数板计数。

1.2.3固态发酵

按照80%的料液比，取500 g沙棘籽渣，与水混匀装入聚丙烯袋中，高压灭菌25 min，温度121℃。将上述原料降至室温接种黑曲霉种子液（接种量为5%），置于35℃发酵72 h。发酵结束后，样品55℃烘干并粉碎。

1.2.4日粮添加试验

试验在天水市麦积区甘泉镇养鸡场进行。选用270日龄蛋鸡36羽，分为4组，每个组3羽，3个平行样，分别添加0、0. 4%、0.8%或1.2%的发酵沙棘籽渣到1（对照组）、2组、3组和4组蛋鸡饲料的基础日粮中，基础日粮为玉米一豆粕型，试验期为42 d。

基础日粮组成及营养水平（风干基础）：玉米（63.7%）、豆粕（24.5%）、贝壳粉（2%）、石粉（4.5%）、食盐（0.3%）、预混料（5%）、赖氨酸（0.93%）、蛋氨酸（0.35%）、蛋氨酸十胱氨酸（0.63%）、粗蛋白质（16.85%）、钙（3.64%）、总磷（0.61%）和非植酸磷（0.39%）。

预混料为每千克饲料提供8 000 IU维生素A、2 000 IU维生素D、20 IU维生素E、1.5 mg维生素K3、2 mg维生素B.、6 mg维生素B2、8 mg泛酸、30 mg烟酸、0.2 mg生物素、0.5 mg叶酸、0.01 mg维生素B12、60 mg铁、10 mg铜、70 mg锌、80 mg锰、0.5 mg碘和0.24 mg硒。

1.3测定方法

1.3.1沙棘籽渣粗蛋白、蛋白酶、纤维素酶含量和氨基酸总量测定方法

粗蛋白用定氮仪（瑞典特卡托，FOSS-2300）测定;按中华人民共和国国家标准GB-T28715-2012测定蛋白酶含量;氨基酸用全自动氨基酸分析仪（L-8900，日本日立）测定;按中华人民共和国国家标准NY/T912 2004测定纤维素酶含量。

1.3.2生产性能指标

料蛋比=试验期内耗饲料总量/试验期产蛋总重×100%。

产蛋率=总产蛋数/蛋鸡数×100%。

破软蛋率=（破蛋总数+软蛋总数）/产蛋总数×100%。

平均蛋重=产蛋总重/产蛋数×100%。

1.3.3肠道菌群的测定

试验结束后，每个平行样品随机选1羽鸡，屠宰后用细线紧紧扎住回肠和盲肠入口处，然后取下盲肠，测定内容物中大肠杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的含量。

在超净台中，取0.5 g内容物置于无菌试管内，加入无菌水4.5 mL，振荡20 min混合均匀，再取0.5 mL混合液，加4.5 mL灭菌的生理盐水，依此做四个浓度梯度：10^-1、10^-2、10^-3和10^-4。将不同梯度的稀释液分别接种于相应的选择性培养基上，检测4个稀释梯度，做3个平行样，培养24 h，温度37℃，用CO₂培养箱培养乳酸杆菌和双歧杆菌48 h，细菌数量采用平板菌落计数法进行统计，菌落在30～300个为宜，单位为CFU/g。

1.4饲养管理

采用笼养，光照16 h/d，鸡舍内光照、温度和湿度按养殖标准控制，舍内保持清洁卫生，自由采食和饮水，按照一般程序进行免疫、饲养管理。

1.5数据处理

数据分析使用SPSS17.0统计软件，用“平均值（x）±标准差（SD）”表示分析结果。

2结果与分析

2.1发酵后沙棘籽渣中粗蛋白、蛋白酶、纤维素酶含量和氨基酸总量变化

由表1可见，与对照组相比，经黑曲霉发酵后的沙棘籽渣粗蛋白和蛋白酶含量增加显著（P<0.05），分别增加了7. 11%、705. 56%;纤维素酶含量和氨基酸总量有所下降，但无显著差异。黑曲霉是食品工业上重要的发酵用菌，可产生蛋白酶、淀粉酶、果胶酶等。本试验中沙棘籽渣经黑曲霉发酵后，各样品粗蛋白含量与对照样品中粗蛋白含量相比較，都有显著提高，这可能与黑曲霉本身含有的菌体蛋白有关，这和已有的研究结果基本一致，可能是由于黑曲霉可以将样品中的非蛋白氮转化成蛋白氮，从而提高了粗蛋白含量。

2.2发酵后沙棘籽渣对蛋鸡生产性能的影响

由表2可见，与1组（对照组）相比，2组、3组、4组产蛋率和平均蛋重分别提高4. 60%、6.68%、6. 19%和3.61%、4.11%、5.41%，均有显著差异（P<0.05）;与1组相比，2组、3组和4组料蛋比和破蛋率无显著差异。沙棘的果实中含有多种活性成分，其中黄酮类有20多种，酯类有20多种，维生素类有10多种及多种甾体类化合物，发酵沙棘籽渣也含有丰富生物活性物质，对促进动物生长及提高生产性能有明显促进作用，比如黄酮类物质可促进母鸡激素的分泌，促进产蛋率提升;多酚类化合物可以提升饲料的营养价值及动物的生产性能。本试验表明，饲料添加发酵沙棘籽渣可提升蛋鸡的平均蛋重及产蛋率，降低破（软）蛋率及料蛋比，说明发酵后沙棘籽渣对饲料的转化率有一定的改善作用。

2.3发酵后沙棘籽渣对蛋鸡肠道菌群的影响

由表3可见，与1组相比，2组、3组和4组盲肠大肠杆菌数量（单位为CFU/g）分别减少10. 66%、6. 23%、4.67%（P<0.01）;3、4组沙门氏菌数量（单位为CFU/g）与1组相比，分别降低11. 04%、9.68%，有极显著降低（P<0. 01）;3组样品添加0.8%的发酵后沙棘籽渣，盲肠双歧杆菌数量与1组相比极显著提高（P<0. 01）;2组、3组和4组乳酸杆菌数量与对照组相比无差异（P>0.05）。畜禽类动物肠道内有多种细菌构成的肠道菌群，这些细菌包括有益于宿主健康的有益菌，也包括对动物健康产生危害的有害菌（如致病性大肠杆菌和沙门氏菌）。本试验结果表明，日粮中添加发酵沙棘籽渣能够极显著增加双歧杆菌的含量，降低大肠杆菌和沙门氏菌的含量，调节肠道微生物菌群的平衡，促进肠道有益细菌的生长，改善肠道微生物菌群的结构，这和沙棘果渣对肠道微生物菌群的调节和促进肠道有益细菌的生长的研究结果基本一致。结果表明，蛋鸡日粮中添加0.8%的发酵后沙棘籽渣肠道菌群结构较佳。

3结论

采用黑曲霉作为发酵菌，在35℃环境下，按照接种量5%，料液比80%的条件进行发酵试验，并对发酵产物的粗蛋白、蛋白酶、纤维素酶含量和氨基酸总量进行检测。试验结果表明，沙棘籽渣经黑曲霉发酵后，粗蛋白含量和蛋白酶含量显著提高。说明黑曲霉发酵可以提高沙棘籽渣的饲料价值，并可以作为饲料原料加以利用。

日粮中添加发酵后的沙棘籽渣，与对照组相比，可提高蛋鸡的产蛋率和平均蛋重，降低料蛋比和破（软）蛋率，对饲料转化率有一定的改善作用，还可优化肠道中的菌群结构。试验结果表明，蛋鸡日粮中添加0.8%的发酵后沙棘籽渣效果较佳。