PCV2 LAMP现场可视化定性和荧光定量PCR快速检测试剂盒

2017年3月22日，上海市政府在上海展览中心隆重举办了上海市科学技术奖励大会，上海市农业科学院生物技术研究所赵凯研究员主持的《断奶仔猪多系统衰竭综合征防控新技术的建立及应用》项目荣获2016年上海市科技进步三等奖。

1 项目所属科学技术领域

屬于农业生物技术领域。

2 主要技术内容

2.1 猪断奶后多系统衰竭综合征

断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的一种重要疾病，严重发病地区死淘率达40%以上。由于PCV2严重破坏猪的免疫系统，使各种疫苗免疫失败。因此，PCV2感染的早期诊断和病猪的淘汰成为PMWS防治的重点。

2.2 PMWS防控新策略和支撑技术的建立

有鉴于此，申请人提出了PMWS防控新 策略：

（1）首先养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测猪群，将被PCV2感染的猪与健康猪隔离开来，防止交叉感染。

（2）用定量PCR试剂盒对被PCV2感染的猪进行定量检测，文献报道猪体内PCV2病毒超过4 000拷贝/mL血液就会患病，而患病猪很难康复，因此，建议将PCV2病毒超过4 000拷贝/mL血液的猪直接淘汰。

（3）母猪会将PCV2传播给仔猪，公猪会将PCV2传播给母猪，因此养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测种猪，将被PCV2感染的种猪直接淘汰。因此，通过以上两种方法组合起来进行检测、隔离和对病猪的适当淘汰可以防控PMWS，最大限度减少养殖户经济损失。

为此我们建立了PCV2 LAMP现场可视化定性和荧光定量PCR快速检测支撑技术并成功开发出试剂盒。将两种试剂盒组合起来防控PMWS，最大限度减少养殖户经济损失。

3 成果科技创新程度

（1）PCV2 LAMP现场可视化快速定性检测试剂盒：

a 设计的PCV2 LAMP引物序列未见报道；

b 增加了一对环引物，可使LAMP反应时间减少一半，这是前人工作所没有的；

c 在LAMP反应体系中添加了甜菜碱，加速了解链速度，这是前人工作所没有的；

d 首创了不提取PCV2病毒核酸、直接以猪血清样本为模板加入反应体系进行LAMP反应，减少了操作时间和步骤，降低成本。

（2）PCV2荧光定量PCR定量检测试剂盒：

a 设计的荧光定量PCR引物和探针序列未见报道；

b 创造和优化了PCV2荧光定量PCR反应体系和参数，效果大大优于前人的报道；

c 该方法被美国佐治亚疾控中心所采用。

（3）首次提出了将基于LAMP现场可视化快速定性检测方法和荧光定量PCR定量检测方法组合起来进行猪PCV2定性、定量检测以防控PMWS的检测策略和技术。

（4）检测灵敏度达到进出口畜产品检测国际标准。无论在技术水平，还是试剂盒的灵敏度上，均高于国内外同类研究。

4 知识产权及应用推广情况

申请专利3项，获授权国家发明专利1项，提出PMWS防控新策略一种，开发试剂盒2种。

在江、浙、沪、皖、鲁、豫养猪场将这一新策略和技术进行了示范推广，用于PMWS防控。使PMWS发病率大大降低。由于利用此技术减少了药物和饲料及人工成本，每头猪节约30元。累积节约10.5亿元养殖投入。采用此技术全国每年将节约180亿元的养殖成本。