香龙血树组织培养研究

2018-05-14漆丽萍马剑李剑美李援龙强继业

安徽农业科学 2018年34期

漆丽萍马剑李剑美李援龙强继业

摘要 [目的]通过香龙血树组织培养技术研究，建立香龙血树再生繁殖体系。[方法]以茎段作为外植体，探索最适灭菌时间以及诱导培养基及增殖培养基最适6-BA和NAA的浓度组合。[结果]灭菌最适宜时间9 min;以MS作为基本培养基，诱导培养最适的6-BA和NAA浓度组合：2.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA易诱导长出丛芽，5.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA和5.0 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA易诱导形成愈伤组织;以MS作为基本培养基，增殖培养最适6-BA和NAA浓度组合：3.0 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA。[结论]利用带腋芽茎段作为组织培养的外植体可迅速建立香龙血树离体快繁体系。

关键词组织培养;香龙血树;带腋芽茎段;快速繁殖

中图分类号 Q943.1文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）34-0071-04

龍血树（Dracaena cambodian）属于百合科龙血树属，树叶为线状披针形，簇生于枝条顶端，树形极具特点，可塑性强，可以根据人的意愿塑造出不同形状，树干古朴沧桑，同时还能在顶部萌发新枝，给人一种沉稳而不失朝气的感觉，且十分耐阴，可在室内盆栽多年仍然绿意盎然，是园林绿化及家庭盆栽的名贵树种，具有很好的观赏价值。同时药用价值极高，具有止血、生肌、行气等功效。

香龙血树（Dracaena fragrans）是百合科龙血树属植物，别名也门铁、大龙血树、香千年木、巴西木、巴西铁树、山德氏龙血树[1-4]。香龙血树茎干挺拔，株形整齐，是重要的室内观叶树种; 其小花具有浓烈的香气，因此是良好的香味树种;它喜光照充足、高温、高湿环境，耐阴、耐干燥，多生长于热带或亚热带地区[5]。也门铁具有绿叶也门铁品种，后来又相继出现了金心也门铁、金斑也门铁和金边也门铁新品种，成为近年来异军突起的时尚观叶植物新宠[6]。香龙血树为单茎直立灌木，叶丛生于茎顶，无柄叶长宽线形，叶缘具波纹，呈深绿色，常见品种包括金边香龙血树（cv.Victoriae），叶缘深黄色带白边;金心香龙血树（中斑香龙血树）（cv.Massangeana），叶面中央具黄色纵条斑;黄边香龙血树（cv.Linderi），叶缘淡黄色;银边香龙血树（cv.Lindeniana），叶片边缘乳白色[4，7]。这些品种与上文提到的也门铁新品种是相同变种。

2007年春，广东大规模推广种植的也门铁呈现爆发式开花，开花率为80%～90%，而按照以往种植经验也门铁是很少开花，尤其是种植3年以下的幼株鲜有开花，由于花后死亡的传言让漂亮成品滞留花场，但也门铁爆发式开花涉及内因和外因，原因尚待考证[8]。实际上香龙血树需经过多年才能进入开花期，香龙血树室内栽培很少开花，观察发现，香龙血树在北方室内栽培13年才首次开花，香味浓烈，但开花后不能结果[5]。香龙血树目前多采用扦插法繁殖[ 7]。但由于香龙血树为直立单茎灌木，分枝极少，扦插繁殖不能满足大规模种苗需求，而组织培养途径可以有效地解决市场种苗短缺的问题[2]。目前关于香龙血树组织培养方面的研究报道较多，组织培养多采用MS作为基本培养基，培养基中添加的植物生长调节物质有6-BA、IAA、IBA、KT、NAA等，通常以顶芽、嫩茎段、腋芽、叶片作为外植体进行接种，都取得了较好的结果[2，9-13]。笔者对香龙血树品种的组织培养技术进行研究，以期建立龙血树品种快速繁殖体系，为满足园林绿化苗木和市场对药用资源的需求并进行规模化生产提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料香龙血树顶芽和带腋芽茎段取自于喜庆园林责任有限公司，取材时间是正午。

1.2 方法

1.2.1 外植体预处理。采集外植体前应对母株或器官的生长环境进行评估（有害微生物的滋生程度），这是灭菌的重要依据。为了减少在组织培养中的褐化，可以对材料进行避光保湿（用湿润的毛巾包裹，装到避光处理的容器中），然后对外植体进行修整，切除枝条上的叶片及附属物，用软毛刷在流水下进行刷洗，清洗好以后，用毛巾把水吸干，然后将外植体剪成带2～3个节的茎段，最后再用流水冲洗。龙血树属于木本植物，容易褐化，所以材料需要在流水下冲洗12 h，才能彻底冲洗净外植体表面所附带的泥土、虫卵、病菌孢子。

1.2.2 外植体灭菌。对预处理的外植体用75%乙醇擦拭，然后拿到超净工作台上用紫外灯消毒30 min，接着用0.1%升汞消毒处理5～10 min，每种处理用20个外植体。将外植体接种于MS培养基中，45 d后统计外植体的污染率、存活率，筛选龙血树外植体最佳消毒时间。污染率指污染芽数占总接种芽数的比例;死亡率指未污染芽中死亡芽数占总接种芽数的比例;存活率指未污染芽中存活芽数占总接种芽数的比例。

1.2.3 香龙血树诱导培养。以带腋芽茎段为外植体接种到诱导培养基上，诱导培养基配方：MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+0.3 g/L活性炭+6-BA+NAA，6-BA设置2.0、5.0 mg/L 2个浓度，NAA设置0.20、0.50、1.00 mg/L 3个浓度。6种诱导培养基配方见表每个培养基处理接种20个外植体。

1.2.4 香龙血树增殖培养。以诱导培养获得的不定芽为外植体接种到增殖培养基上，增殖培养基配方：MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+0.3 g/L活性炭+6-BA+NAA，6-BA设置2.0、3.0 mg/L 2个浓度，NAA设置0.05、0.10、0.50 mg/L 3个浓度。6种增殖培养基配方见表每个培养基处理接种10个外植体。

1.3 诱导培养和增殖培养条件温度（25±2）℃，光照时间12～14 h/d，光照强度1 500～3 000 lx，光质为T4灯管发出的光。

1.4 统计公式各处理均在培养45 d后统计结果，记录诱导率、出芽情况、芽增殖倍数及生长状况。诱导率=[形成愈伤组织的茎段数/（接种总的茎段数-污染数）]×100%;芽增殖倍数=（增殖后芽总数/增殖前芽个数）×100%。

1.5 统计分析数据采用Excel 2010进行分析。

2 结果与分析

2.1 外植体最佳灭菌时间筛选由表3可知，灭菌9 min效果最好，灭菌存活率最高，死亡数相对较低，污染率较低。

2.2 外植体诱导培养

由表4可知，外植体在接种45 d后，1～6号培养基都有愈伤组织形成（图1），其中4号培养基诱导形成愈伤组织数量最多，诱导率为40%，其次为3号培养基，诱导率为35%。由此可见，MS+5.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA和MS+5.0 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA更易诱导形成愈伤组织，并具有分化能力;1～6号培养基都诱导长出芽（图1），其中1号培养基（MS+2.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA）更易诱导长芽。综合看来初代培养中每种培养基都有较好的效果。

2.3 不定芽增殖培养从表5可以看出，8号和11号培养基增殖倍数最高为2.0，8号培养基不定芽有2株长出根，生长良好（图2），11号培养基不定芽长势好，叶片绿;7号培养基增殖倍数为1.9，但不定芽生长缓慢，有一些开始变黄;9号和10号培养基增殖倍数为1.6，9号培养基不定芽长根同时带有红色分泌物附着在培养基表面，10号培养基不定芽长势不明显，有红色分泌物附着在培养基表面（图3）;12号培养基增殖倍数最低为1.5，但不定芽长势好，叶片绿。综合看来11号培养基增殖效果最好（图4）。

3 结论与讨论

组培香龙血树用到的是长了2～3个月的枝条，选用的都是解剖刀能切割下来的带腋芽茎段，外植体灭菌过程中要根据植物的生长环境以及生长时间来制定灭菌时间，需严格执行，探索中发现用升汞灭菌9 min能达到灭菌效果，诱导过程中存活数最高，死亡数较少，这与黄莉雅等[14]研究结果一致。

香龙血树接种在培养基MS+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+0.3 g/L活性炭+2.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA上更容易诱导长出丛芽，在培养基MS +30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+0.3 g/L活性炭+5.0 mg/L 6-BA+0.20 mg/L NAA和MS +30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+0.3 g/L活性炭+5.0 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA上更容易诱导形成愈伤组织，形成的愈伤组织经诱导分化能长出生长健壮的苗。

血竭来源于自然界中生长10年以上的龙血树，这种龙血树受到刻伤、病害、虫害，才会分泌一种红色的液体附在伤口表面，在增殖培养中发现，有些培养基表面附有一些红色分泌物，可能是血竭。杨本鹏等[15]在海南龙血树组织培养过程中进行了不同生长调节剂及浓度对血竭形成诱导的研究，结果表明在含有GA3、 KT、 AD、 NAA、2，4-D和 IAA这 6 种生长调节剂的培养基上均不产生红色，只有在含 6-BA的培养基上才能诱导龙血树无菌组培苗产生血竭，且诱导血竭与6-BA浓度无关。该试验中每种培养基均含有6-BA，但并不是所有培养基均能产生红色分泌物，可能是由于除了6-BA外，培养基中还含有NAA;也可能是取材不同造成的。该研究中的香龙血树形成“血竭”对生长调节剂和濃度要求与海南龙血树不一样。在组培过程中生产出血竭是非常有意义的，能有效地推动药用植物在组培过程中的实践与发展，但该试验中红色分泌物是否为血竭结果还有待证实。

继代培养过程中2.0 mg/L 6-BA和0.10 mg/L NAA组合培养基上长出了根，对组培苗驯化，将其移栽到自然环境中，有1株和其他香龙血树明显不一样，在叶片上出现了金边（图5a），而野生型植株叶色表现全绿（图5b），可能是体细胞变异，使香龙血树表现型出现了差异，虽然市场上已经有金边香龙血树，但该研究中的金色叶缘变异和现有的金边性状还存在很大差异，可能是一种新的变异类型。这种变异产生的原因是否属于可遗传的变异，以及后代能否100%保持这种变异还有待进一步研究。

参考文献

[1]刘志政，张广楠.香龙血树的扦插与栽培技术[J].青海农林科技，2004（2）：59-60.

[2]刘颂颂，朱剑云，何业华，等.也门铁工厂化育苗技术[J].经济林研究，2006，24（4）：71-73.

[3]刘和平，何业华，林剑波，等.也门铁及其嵌合体叶绿素合成特性研究[J].北方园艺，2011（14）：120-122.

[4]杜文成.香龙血树[J].花木盆景（花卉园艺），2004（11）：30-31.

[5]李锦，李彦明.北方室内盆栽香龙血树[J].中国花卉园艺，2007（18）：40-41.

[6]胡一民.时尚观叶新宠——也门铁[J].中国花卉盆景，2007（1）：8-9.

[7]卢思聪.香龙血树及其常见同属植物[J].中国花卉盆景，1998（1）：4-6.

[8]钟志权.关于也门铁爆发式开花[J].花木盆景（花卉园艺），2007（8）：28.

[9]陈兴华，何旭君，张华通，等.也门铁组培工厂化育苗技术路线[J].仲恺农业工程学院学报，2010，23（2）：21-24.

[10]陈丽文，杨利平，荣薏，等.金心也门铁工厂化育苗技术研究[J].北方园艺，2013（13）：138-141.

[11]何业华，刘和平，刘颂颂，等.也门铁嵌合体品种在离体培养中的变异规律及调控[J].华南农业大学学报，2008，29（2）：70-73.