金昌市金川区2016年－2017年鸡新城疫的检测与分析

张登基 李晓霞 贾宁

摘  要：为掌握金川区新城疫（Newcastle Disease，ND）的流行情况、实际的免疫效果以及带毒情况，2016年-2017年笔者分4次在金川区宁远堡镇和双湾镇的规模养鸡场、散养户鸡和农贸市场中随机采集鸡血清648份、鸡棉拭子样品379份。应用血凝抑制试验测定鸡ND免疫抗体，同时采用逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）方法测定鸡ND病原。结果显示，ND免疫抗体平均合格率为97.07%，其中2016年春季抗体检测合格率为96.82%，2017年抗体检测合格率为97.30%;ND病原学阳性率为1.85%，表明金川区ND免疫效果良好，但有鸡零星带毒的情况，应继续做好鸡ND的免疫防控。

关键词：新城疫;血凝抑制试验;逆转录聚合酶链式反应;抗体检测

中图分类号：S855 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2018）12-0053-03

新城疫（Newcastle Disease，ND）又叫亚洲鸡瘟，是一种热性、急性、败血性、高度接触性禽类传染病，主要由ND病毒引起，是目前家禽的主要傳染病之一[1-2]。ND具有呼吸困难、神经紊乱、高热、浆膜出血、下痢等特征，病死率高。世界动物卫生组织将ND列为法定报告的动物疫病，我国农业部将其列为一类动物疫病，并对其进行重点防范[3-4]。

通过对ND抗体检测和病原检测，可以了解鸡群的免疫状况、验证现行的免疫程序、检验疫苗的免疫效果、了解疫病的流行和发展情况。为进一步全面掌握金川区ND免疫效果和鸡带毒情况，笔者分别于2016年和2017年春秋季，在金昌市金川区宁远堡镇和双湾镇随机采集样品进行了ND免疫抗体及病原学的测定，以科学研判金昌市金川区ND防控形势，为防控决策提供一定的科学依据。

1  材料与方法

1.1 试验器材

试验所用器材包括96孔V型血凝反应板（100 μL，上海鼎杰生物科技有限公司）、离心机（H1650-W，湖南湘仪实验仪器开发有限公司）、单道移液器（0.5 μL～10 μL，德国艾本德股份公司）、多道移液器（15 μL～300 μL，德国艾本德股份公司）、微量振荡器（ZW-A，苏州威尔实验用品有限公司）、聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）仪（T960型，杭州晶格科学仪器有限公司）、水浴锅（DK-S26，上海森信实验仪器公司）、电泳仪（JY600，北京君意东方电泳设备有限公司）、凝胶成像仪（JY04S-3C，北京君意东方电泳设备有限公司）等。

1.2 试验试剂

ND阳性血清和血凝抑制抗原由中国哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司提供;RNA提取试剂盒、一步法反转录试剂盒和DNA分子量标准由TaKaRa公司提供;无水乙醇、三氯甲烷和异丙醇为国产分析纯。

1.3 被检样品

在2016年4月和10月以及2017年4月和10月，笔者分别在金昌市金川区宁远堡镇和双湾镇的3个规模养鸡场、220个散养户鸡群和3个活禽交易市场进行样品采集。样品包括泄殖腔和咽喉双份棉拭子379份以及血清样本648份。样品采集方法如下：鸡翅静脉采血2 mL，凝固析出血清，离心分离，备用;泄殖腔和咽喉双份棉拭子样品保存于磷酸盐缓冲溶液中。

1.4 检测方法

1.4.1 抗体检测

依据GB/T16550-2008 ND诊断技术中血凝试验操作程序[5]，制备1%的鸡红细胞悬液，对标准抗原进行血凝效价测定，制备4 IU抗原，按照血凝抑制试验程序进行血清抗体效价的测定。

1.4.2 病原学检测

依据GB/T16550-2008诊断技术中逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）操作程序，设计一对引物P1和P2，按照RNA提取试剂盒方法，提取采集样品棉拭子中的RNA，以提取的RNA为模板，以设计的引物P1和P2为模板，按照反转录试剂盒的方法进行RT-PCR扩增。

P1：ATGGGCACCAGATCTTCTAC

P2：CTGCCACTGCTAGTTGTGATAATCC

1.5 判定标准

抗体检测：存栏禽群免疫抗体合格率≥70%判定为合格，抗体效价≥5 log2判定为合格。

RT-PCR：结果为阳性，则判定为鸡ND病原学阳性。

2  结果与分析

2016年和2017年，笔者在金川区宁远堡镇和双湾镇分4次共采集血液样本648份、咽喉和泄殖腔双份棉拭子379份。对血液样品分离血清，进行血凝抑制试验，检测ND抗体水平;将咽喉和泄殖腔棉拭子样本混合后，提取RNA，进行病原学检测。检测结果见表1和表2。

由表1和表2可以看出，2016年金川区两个镇共检测血清315份，合格305份，合格率为96.82%;2017年共检测血清333份，合格324份，合格率为97.30%。金川区ND抗体合格率普遍较高，连续两年鸡ND抗体合格率均达97%以上，高于农业部规定的70%合格标准。病原学检测结果表明，2016年对184份样品进行病原学检测，在4份样品中检出ND病毒，阳性率为2.17%;2017年对195份样品进行病原学检测，在3份样品中检出ND病毒，阳性率为1.54%;ND病毒阳性检出率呈下降趋势。

由表3可知，金川区2016年和2017年在不同监测点对ND免疫抗体水平和病原学进行了检测。养鸡场的抗体合格率达98.96%，散养户抗体合格率达97.29%，交易市场的抗体合格率为93.06%。养鸡场没有检测出ND病毒;在185份散养户样品中检出3份阳性病毒，阳性率为1.62%;在105份交易市场样品中检出4份阳性病毒，阳性率为3.81%。

3  讨论

近年来，金昌市金川区进一步落实动物防疫责任制，建立了有力的组织保障体系，建立健全了法制保障、体制保障、科技保障、经费保障、体系保障等各项保障措施，各部门按职责分工，监督实施免疫接种、检验检疫、疫病监测，指导实施隔离、扑杀、消毒、封锁、无害化处理等，加强冷链体系建设，严格落实免疫责任，进一步提升了动物疫病强制免疫能力。金川区依托县乡两级动物疫病预防部门和村级防疫员，强化疫苗物流冷链和使用管理，进一步构建和完善基层动物疫病强制免疫工作网络，使得全区动物疫病的免疫和监测工作取得了实效。

2016年和2017年全区ND抗体和病原学的检测结果表明：全区ND免疫抗體平均合格率达到97.07%，远远超过国家标准;其中2016年春季抗体检测合格率为96.82%，2017年抗体检测合格率为97.30%，免疫抗体的合格率呈上升趋势;养鸡场和散养户的合格率分别达到98.96%和97.29%;农贸市场的ND抗体合格率稍低，主要原因是由于农贸市场鸡的来源复杂。这提示我们，以后需进一步加强对鸡流通市场的监管，防止疫病扩散。ND病原学的检测结果表明：金川区农户散养鸡和农贸市场ND带毒阳性率为1.85%，虽然没有临床表现，但隐性带毒仍然存在ND感染风险。这提示我们，今后需进一步做好免疫和免疫监测工作，对检出的ND阳性鸡（带ND病毒鸡），要及时采取消毒、隔离甚至扑杀等综合措施，并进行紧急预防接种。对养鸡场应定期进行免疫效果监测和分析，根据抗体的均匀度以及平均滴度确定是否需要强化免疫，为ND的防控提供科学依据[6-7]。

此外，从检测结果可以看出，抗体免疫水平与养殖规模成正比，规模养殖场免疫效果普遍好于散养户。这主要是因为规模养殖场防疫意识更强，思想上更积极主动，且能够严格执行免疫程序。农村散养户则对鸡ND防疫意识比较淡薄，认为养殖鸡数量少，免疫无关紧要[8]。

总之，ND具有很高的发病率和死亡率，是危害养禽业的一种主要传染病，与高致病性禽流感并列为世界公认的最重要的两类禽类疫病。及时进行免疫接种，并对ND进行抗体检测，评价其免疫水平和免疫效果，是预防ND的关键，也有利于指导生产实践，减少ND对养禽业造成的损失[9]。

参考文献：

[1] 王志亮，刘华雷.新城疫[M].北京：中国农业出版社，2012.

[2] 刘华雷，王志亮.新城疫的流行历史与现状[J].中国动物检疫，2015，32（6）：1-4.

[3] 杨涛，韦欣捷，陈琼，等.厦门市规模禽场新城疫群流行率横断面研究估计[J].中国动物检疫，2014，31（11）：26-29.

[4] 黄文聪.鸡新城疫的流行特点及其治疗[J].兽医导刊，2015（18）：135.

[5] 农业部.GB/T 16550-2008 新城疫诊断技术[S].北京：中国标准出版社，2009

[6] 温清萍，李玉娥，张险朋.影响鸡新城疫抗体水平监测的因素及分析[J].畜牧兽医科技信息，2005，（1）：39-40.

[7] 刘秀清，董永森.散养户和规模养殖场鸡新城疫免疫抗体监测与分析[J].上海畜牧兽医通讯，2015（4）：60-61.

[8] 邓文平.做好农村畜禽散养户防疫工作的措施[J].中国畜牧兽医文摘，2014，30（11：18-19）.

[9] 胡率领，郜国涛，夏晓惠，等.免疫鸡群发生新城疫的原因分析及防制措施[J].河南农业科学，2006，（12）：95-97.