MP1干式分析仪和全自动生化分析仪检测同型半胱氨酸的方法比对

张桂春

[摘要] 目的 对MP1干式分析仪与日立7100全自动生化分析仪检测同型半胱氨酸（HCY）结果进行比对分析及偏倚进行评估。方法 参考美国国家临床实验室标准委员会（CLSI）EP9-A2文件规定，以大型生化分析仪的检测结果为比较方法（X），MP1干式分析仪及配套的试剂盘的检测结果为实验方法（Y），计算X和Y之间预期偏差的可信区间，以行业标准规定的15%的偏差要求为标准，并对其进行偏倚评估。结果 HCY在医学决定水平处的预期偏倚低于行业标准的允许误差范围，线性回归方程级相关性良好（r2>0.95）。结论 MP1干式分析仪检测HCY临床可接受，可以保证检验结果的可靠性。

[关键词] MP1;比对研究;偏倚评估

[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）08（b）-0176-04

即时检验（point-of-care testing，POCT）是检验医学发展的新领域，它具有操作简便、高效快捷、试剂稳定，容易使用和小型化，顺应了现代临床医学快节奏的工作方式，使患者得到及时的诊断和治疗。当诊断技术与其他技术全面发展之后，人们治疗与认识疾病的水平也有序提升，POCT使用范围不断拓展，技术应用得到突飞猛进的发展，关注度不断提升[1]。

微流控芯片技术是新世纪主要的现代化技术，其将化学与生物领域中涉及的细胞裂解、分选、培养，样品检测、分离、反应、制备等过程汇集到便捷化的小芯片中[2]。微流控检测芯片一般具有样品消耗少、检测速度快、操作简便、多功能集成、体小和便于携带等优点，因此特别适合发展POCT诊断，具有简化诊断流程、提高医疗结果的巨大潜力。宁波美康保生生物医学工程有限公司研究发明的MP1干式分析仪属于以微流控芯片技术为基础的现代化POCT设备，其主要优点是成本低、检测不需要使用很多试剂、需血量少、精准度高，在我国这种使用试剂量大、医疗系统庞大的国家中适合广泛应用。

该研究依据美国临床和实验室标准协会（CLSI）文件NCCLS EP9-A2提出的各项基本要求，针对MP1干式分析仪和相应试剂盘中HCY项目的分析结果，实施有效评价，明确其能够在临床中广泛应用。

1  材料与方法

1.1  样本

参照文件[3]，收集宁波美康盛德医学检验所血清，选择HCY项目中浓度不同的、没有溶血血清的、新鲜的样本，一共40例，在4℃的冰箱中保存，供之后使用。

1.2  仪器与试剂

MP1干式分析仪和相应的试剂：宁波美康保生生物医学工程有限公司研究并生产的MP1干式分析仪和相应的试剂盘片，其中，所以试剂盘片都只能单次、单人使用。

规模较大的生化分析仪和试剂：日立7100全自动生化分析仪，美康生物科技股份有限公司提供了相应的HCY检测试剂盒（批号为：17031505）。

1.3  方法

1.3.1 测定样本  结合EP9-A2文件的基本要求，每天将不同浓度的、满足要求的血清样本收集起来，数量为8份，连续收集5 d。用两种方法每天测定8个样本，每个样本重复测定2次，共测定5 d。每个样本重复测定2次，确定第1次测定顺序，第2次反序测定。

1.3.2 检验离群值  结合文件要求[3]，检验方法间与方法内的离群值。双份测定的相对差值比1/4大的平均值数据应该作为离群数据，将其删除。

1.3.3 数据作图  图1散点图：实验方法重复两次测定所有样本均值（Yi）对比较方法所有样本2次重复测定均值（Xi），绘制散点图;图2散点图：实验方法重复两次测定所有样本的值（Yij）对比较方法所有样本两次重复测定均值（Xi），绘制散点图;图3偏倚图：所有测定样本的均值差（Yi-Xi）和（Yi+Xi）/2比较之后，绘制偏倚图，其中心线水平是零;图4偏倚图：单次测定值和平均差值（Yij-Xi）和（Yi+Xi）/2比较之后，绘制偏倚图，其中心线水平是零。

1.3.4 比较方法  （X）检验适合的范畴，分析回归情况，计算各个系数，若结合数据资料，计算出r≥0.975（或r2≥0.95），则表示X的范圍比较合适，认为数据范畴能够抵消X变量的存在的误差，而且能够通过回归直线分析，来对截距与斜率进行预估。反之，需要增加样本量再重新分析数据[4]。

1.3.5 线性回归分析  两方法之间的线性回归方程具体计算公式是：Y=a+bX。

1.3.6 可信区间与预期偏倚  结合临床研究的相关要求，明确医学研究情况，通过回归方程，得到95%可信区间与预期偏倚。因CLIA88未规定HCY的允许误差范围，故以行业标准（YY/T 1258-2015）要求的≤15%为偏差要求，比较预期偏差的可信区间，并进行判断比较。

1.4  统计方法

使用 Excel 软件处理数据，并进行统计学研究。

2  结果

2.1  散点图和偏倚图分析

以MP1干式分析仪为实验方法（X），日立7100全自动生化分析仪为比较方法（Y），经组间与组内检验离群值之后，绘制偏倚图与散点图。从散点图中，能够了解到，两种仪器具有良好的线性关系，图1、2为HCY在MP1干式分析仪和日立7100全自动生化分析仪研究结果的散点图，能够了解到，两种仪器具有良好的关联性，之间的关系是直线关系。图3、4是检查两种仪器重复测定2次的均值间的差异和两种仪器测定值间的差异，主要研究系统中是否会存在误差，从图片中表现的情况来分析，MP1干式分析仪和日立7100全自动生化分析仪测定的HCY的结果分布具有合理性，差值并不大。

2.2  方法内和方法间离群值检验

方法内离群值检验，分别计算MP1干式分析仪和日立7100全自动生化分析仪重复测定的差值绝对值的均值，以4倍的平均绝对差值作为2种检测系统重复测定绝对差值的可接受限。经计算结果显示：2种检测系统均没有超出控制限，故方法内没有离群值。见表1。

方法间离群值检验，计算MP1干式分析仪和日立7100全自动生化分析仪测定结果的绝对差值及平均值，相对差值及平均值，以4倍的差值作为可接受限。经计算结果无双份测定差值超過控制限的测定结果，故方法间没有离群值。见表2。

2.3  X值合适范围的检验及线性回归分析

MP1干式分析仪测试到的各种数据，相对于日立7100全自动生化分析仪测试得到的各种数据，予以线性回归方程分析，截距和斜率计算分别为b=1.006 7，a=0.187 9，结果见表3。两台仪器所测的HCY项目的相关系数r2为0.995 1。

2.4  计算HCY在给定浓度处的偏差

HCY的医学决定水平分别为25 μmol/L、100 μmol/L，行业标准中HCY的允许误差是15%，依据两种基本的检测方法，临床上能够接受的误差水平是相对偏倚比“1/2允许误差”小。通过回归方程计算的预期偏差可以参考表4，两台仪器检测HCY这一项目偏倚时使用的方法都能够接受，也就是说，两台仪器检测的结果之间能够进行比较。

注*允许误差在预期偏差可信区的上下限之间，那么实验方法与比对方法是相当的;允许误差比预期偏差可信区上限大，能够接受;允许误差比预期偏差可信区下限小，不能够接受。

3  讨论

随着现代医学检验技术的不断发展，POCT 技术的水平也全面提升，其在辅助诊断疾病的过程中，发挥着关键作用。与此同时，控制检验质量也显得尤为关键，临床实验室的质量目标主要是保障检验结果的可靠性、精准性[5-7]，结合医学实验室CLSI文件中 POCT 09-A提出的各项基本要求[8]，必须全面评估宁波美康保生生物医学有限公司研究生产的MP1干式分析仪应用在临床过程中的可靠性与精准性。

HCY是蛋氨酸代谢重要中间产物，属含硫氨基酸。在临床上，高HCY常作为动脉粥样硬化和心脑血管疾病独立危险因子使用[9]。急性脑梗死患者HCY水平明显高于健康体检者，并且随着神经损伤程度的加重而升高，这表明HCY可能与急性脑梗死发病密切相关[10]。使用不同系统检测同一个标本，结果必然是不同的，对检测结果进行全面评估是实验室研究中主要的问题。

该研究根据CLSI EP9-A2文件的要求，分析了MP1干式分析仪与日立7100全自动生化分析仪的研究结果，为实验室研究提供了数据资料。研究表明，两种方法具有很好的重复性，方法之间和方法内部的差异都在能够接受的范围内，所以，二者没有离群值。对日立7100测定结果（X）和MP1分析仪测定结果（Y）进行线性回归分析，两者线性关系良好，r2=0.995 1，说明选择的样本浓度满足要求，能够对两种检测方法存在的偏倚进行全面评估。进一步通过偏差估计发现，MP1干式分析仪的偏倚评估结果表明，在医学决定水平处，HCY检测项目的偏差比行业规定的偏差标准都小，说明两种检测系统的结果一致性较强，临床能够接受系统的误差，结果能够进行比较，保证了测定结果的准确可靠。

与传统的全自动生化分析仪相比，POCT分析仪操作非常便利，检测效率高，成本低，大概10 min就能够得到很多检测结果;而且因为测定使用的试剂盘片是利用微流控芯片技术与真空冷冻干燥技术研发的，检测试剂以冻干小球的形式在盘片中存放，能够便捷地携带;与此同时，这个仪器广泛应用，在野战外科、手术室、医院各个科室、重症监护室、急诊室以及家庭诊疗、小型诊所等都能够应用，测试结果的可靠性不会受到影响，检测之后，不需要清洗，保养与维修仪器都很便利。

[参考文献]

[1]  Peter BL， Carolin M， Alice S，Harald S.Point-of-care testing （POCT）：Current techniques and future perspectives[J].Trends in Analytical Chemistry，2011，30（6）：887-898.

[2]  林炳承，秦建华.微流控芯片实验室[M].北京：科学出版社， 2006：2-10.

[3]  EP9-A2.Method comparison and bias estimation using patient samples：approved guideline-2nd edition[S].CLSI，2002.

[4]  叶应妩，王毓三申子瑜.全国临床检验操作规范[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：59.

[5]  丛玉隆，冯仁丰，陈晓东.临床实验室管理学[M].北京：中国医药科技出版社，2004：111-114.

[6]  魏吴，丛玉隆.医学实验室质量管理与认可指南[M].北京：中国计量出版社，2004：72-75.

[7]  焦连亭.我国生化分析仪临床应用中应注意的若干问题[J].中华检验医学杂志，2005，28（5）：472-474.

[8]  Document POCT 09-A.Selection Criteria for Point-of Care Testing Devices; Approved Guideline[S].CLSI，2010.

[9]  张捷，蒙桂文，刘浩军，等.HCY水平与糖尿病发展之间的关系[J].检验与诊断，2017，11（9）：57.

[10]  钟锦开，张七二，杨泽，等.HCY、hs-CRP、MPV联合检测对急性脑梗死患者的临床意义[J].医学检验与临床，2017，28（1）：17-49.

（收稿日期：2018-05-16）