利用室间质评数据评估血站ALT测量不确定度

郭咚 张钢 蒋义 陈静 彭文雯

[摘要] 目的 通过对测量不确定度分析，更好地保证速率法测定无偿献血者血清中ALT的检测结果准确性。方法  利用实验室开展的室内质控数据，以及2016年能力验证检测的室间质评数据，来计算评估实验室无偿献血标本ALT项目的测量合成不确定度及扩展不确定。结果 包含因子k=2时，包含概率P=95.45%，ALT=36 U/L时，扩展不确定度为16.38%，ALT=123 U/L时，扩展不确定度为13.46%。结论 该实验室利用ALT室间质评数据得出的扩展不确定度在可控范围内。ALT室间质评回报数据结果，适用于血站实验室评价ALT检测测量不确定度分析。

[关键词] ALT检测;血站;室间质评;测量不确定度

[中图分类号] R446.11 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）08（b）-0003-03

测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数， 可用来表示检测结果是否可靠[1]。血站实验室ALT检测的主要任务就是对无偿献血标本的特性进行赋值。所赋的值，其准确性、可靠性以及其分散性都会直接影响到对献血者的筛查[2]。ISO15189《医学实验室质量与能力的专用要求》指出“与实际测量过程相关联的不确定度分量从接收样本品启动测量程序开始，至输出测量结果终止”[3]。而室间质评回报结果综合了检测方法和程序、设备因素等，对测量不确定度的影响。因此，可以利用室间质评的回报数据，评估血站实验室ALT检测项目的测量不确定度。

1  材料与方法

1.1  仪器

OLYMPUS  AU640全自动生化分析仪。

1.2  试剂

深圳迈瑞生物医疗丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测试剂、校准品，英国朗道实验诊断有限公司常规生化质控血清。

1.3  样本

湖南省血液中心无偿献血血筛标本。

1.4  方法

采用连续监测法检测ALT。

1.5  测量不确定度的引入

该中心实验室确认构成测量不确定度的主要分量为：与偏倚相关的标准不确定度分量，实验室内复现条件下引入的不确定度分量。

①通过室间质评数据评定由偏移引入的测量不确定度ucrel（bias）偏移引入的测量不确定度包括方法和实验室相对偏移RMSrel（bias），及多次测量复现性引入的相对测量不确定度urel（Cref）。根据2016年卫生部临检中心实验室室间质评ALT回报数据，计算方法和实验室相对偏移。公式：

式中birel为该实验室室间质评ALT样本检测结果与靶值的相对偏移，n为室间质评次数。而多次测量复现性引入的相对测量不确定度，可将此值看成标准物质（CRM）方法评定偏移引入的测量不确定中的重复测量标准物质的测量不确定度[4]。该次将室间质评每个样本检测数据进行分组，±3SD剔除以外的实验室检测数据，计算每个室间质评样本的测量复现性引入的相对测量不确定度urel（cons，i）。依据公式：

得出所有组相对测量不确定度，其中m为参加测量的实验室数。此时，可以计算多次测量复现性引入的相对测量不确定度urel（Cref）。公式：

式中，n为室间质评样本的个数。合成计算由偏移引入的测量不确定度

②通过室内质控引入的不确定度分量uprec 实验室内复现性不确定度主要是由精密度引入的。本实验室用高、低浓度2种质控品（批号为944 UE，浓度为123 U/L、697 UE，浓度为36 U/L），每天随献血者标本一同检测，其检测的结果作为当天室内质控结果。该实验室采取对2016年4—12月共计10个月的室内质控数据进行统计分析，分别计算两个浓度质控品的变异系数CV。由于质控品随献血者标本同时检测，并有着完整的检测过程，故从室内质控数据计算出来的变异系数就是实验室复现性不确定度分量uprec。

③计算合成不确定度（uc）的计算公式：

④加上扩展不确定度（U）的计算公式：取95%的置信区间k=2，U=kuc。

2  结果

2.1  计算RMSrel（bias）

2016年该实验室参加卫生部临检中心ALT室间质评3次，每次檢测样本5个，共计检测样本15个。取相对偏移绝对值的平方代入公式计算，

2.2  计算urel（Cref）

查询2016年国家卫生计生委室间质评原始数据，剔除离群值，计算每个样本的所属组变异系数的平方根代入公式计算，urel（Cref）=46.25/15=3.08%，见表2。

2.3  计算扩展不确定度

通过室间质评数据、室内质控数据计算出RMSrel（bias）、urel（Cref）各值（表3），最终合成相对测量不确定度、合成不确定度和扩展不确定度（表4）。

3  讨论

测量不确定度可以使用自上而下的Nordtest准则和自下而上的GUM模型两种方法评定检测结果的测量不确定度[5]。GUM模型是基于在全面而系统的测量分析之后，去识别并估计每种可能来源的不确定度。Nordtest准则是基于不确定度来源的控制程序下，对测量不确定度的评价，并直接利用统计原理评估一个特定的测量系统受控结果的测量不确定度[5-6]。依据特定的正确度评估的试验数据、实验室室间质评数据进行评定，正确度和精密度是两个主要的分量。医学检测实验室常将这两者与误差相联系。

血站ALT检测针对的是无偿献血者的血液样本，影响其测量不确定度的因素包括献血者样本的采集与运输、处理与保存，检测环境与人员，检测方法与设备，检测试剂与校准品等。但是，在评估测量不确定度时考虑所有因素比较复杂且不切实际[7]。该文通过室间质评结果数据及实验室室内质控数据，以Nordtest准则计算测量不确定度。室间质评结果数据反映了实验室检测系统的总体分析性能，而室内质控反映的是实验室日间检测的变异情况，其包括了测量程序过程中尽可能多但又合理的常规变化，例如：仪器设备运行状况和定期维护、检测环境条件、不同批次试剂、不同操作者等。

该次ALT测量不确定度评估结果显示，浓度2（36 U/L）扩展不确定U=16.38%，与《WS/T 403-2012临床生物化学检验常规项目分析质量指标》中ALT总误差TE<16%相比，超出《指標》要求，即测量结果=36 U/L，扩增不确定度=16.38%×36=6 U/L，即测量结果=（36±6）U/L。通过对各测量不确定度分量的占比分析，其RMSrel（bias）占比最大。回顾该实验室2016年室间质评检测结果相对偏移，发现靶值在70 I/U以下的该实验室检测结果相对偏移较大，而靶值在70 I/U以上的检测结果相对偏移较小。同时，通过对高、低两种浓度ALT质控品进行扩展不确定度（uprec：1.39%、4.87%，U：13.46%、16.38%）的评估。结果表明，高、低2种浓度下的样品测量不确定度是有差异的，即测量的不确定度与质控品浓度检测值是有关联的。值得注意的是，何成涛等[8]指出校准品不确定度在ALT检测合成不确定度中占的比重较大，在评估过程中应充分考虑该因素的影响。而复溶校准品所引入的不确定度很小，而实验室检测环境引入的不确定度和精密度较高移液枪引入的不确定度可忽略不计[9]。该实验室使用的校准品靶值为98.9 U/L（迈瑞常规生化符合校验品，批号150115010），较2015版《血站技术操作规程》4.12.1血液检测合格判定标准中ALT≤50 U/L的临界值浓度高，也是导致低浓度扩增不确定度不符合《标准》原因之一。因此，选择校准品同时应考虑更接近临界值的浓度。在血站实验室ALT结果判定过程中，应充分考虑临界值范围的不确定度，可以保证血液ALT检测的准确性，避免造成检测结果变化过大，避免血液的浪费。

近几年越来越多的血站检测实验室开始开展或准备开展实验室15189能力认可，ALT作为血站检测项目中唯一的定量检测项目，实验室对ALT检测不确定度的评估是必不可少的，利用实验室室内质控数据和室间质评数据对其进行评估，既减轻实验室工作量，也节约了试验所需资源，而且可操作性强。

[参考文献]

[1]  BIPM，IEC，IFCC，ISO，IUPAC，IUPAP，OIML.Guide to the expres-sion of uncertainty in measurement[S].ISO，1995.

[2]  郑伟.测量不确定度在血站ALT检测中的应用[J].中国输血杂志，2010，23（S1）：183.

[3]  中国合格评定国家认可委员会. CNAS-CL02医学实验室质量与能力认可准则（ISO15189：2012，IDT）[S].北京：中国合格评定国家认可委员会，2013.

[4]  肖倩，张轩，李有强，等.化学发光分析仪检测激素类项目的测量不确定度评估[J].实用医学杂志，2015，31（9）：1532-1535.

[5]  庄健海，卓雪芽，谢小梅，等.实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA测量不确定度评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（12）：1575-1577.

[6]  王前明，宋秀宇，洪强.“自上而下”方法在评定生化检测指标测量不确定度中的应用[J].国际检验医学杂志，2014，35（9）：1169-1171.

[7]  王治国，王薇，李小鹏.测量不确定度及其在临床检验中应用[J].中国卫生统计，2005（2）：85-86.

[8]  何成涛，傅强，马贵明，等.血站丙氨酸氨基转移酶分析中测量不确定度的评估[J].中国输血杂志，2015，28（4）：390-393.

[9]  邬旭群，程曦，李雪梅，等.速率法检测献血者丙氨酸转氨酶的测量不确定度评定[J].国际检验医学杂志，2014，35（4）：470-471，474.

（收稿日期：2018-05-12）