冷沉淀制备仪虹吸法与低温水浴箱融化离心法制备冷沉淀的对比研究

扬丽　陈健

[摘要] 目的 探讨冷沉淀制备仪虹吸法制备冷沉淀的优势应用。方法 采集30袋全血，先分离出新鲜冰冻血浆冰冻保存。后解冻将其随机等分成两组，分别采用冷沉淀制备仪虹吸法及低温水浴箱融化离心法制备冷沉淀，并按照国家标准分别对各组冷沉淀产品的纤维蛋白原和FⅧ因子含量进行检测分析。结果 冷沉淀制备仪虹吸法与低温水浴箱融化离心法制备的冷沉淀质量都符合质量管理标准，但制备仪虹吸法生产的冷沉淀中纤维蛋白原和FⅧ因子的含量要比低温水浴箱融化离心法高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 用冷沉淀制备仪虹吸法制备冷沉淀操作简单易行，安全可靠，省时、省力且其产品质量均符合国家标准并优于低温水浴箱融化离心法，有实际应用价值。

[关键词] 冷沉淀制备仪虹吸；水浴离心法；凝血因子；纤维蛋白原；FⅧ因子

[中图分类号] R457 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）06（b）-0173-02

冷沉淀（Cryoprecipitate）是临床上成分输血中的一种重要制品，该制品是新鲜冰冻血浆（FFP）在1～6℃条件下融化后分离出大部分血浆、剩下的冷不溶解活性物质，在1 h内速冻呈固态的成分血。冷沉淀富含纤维蛋白原（Fg）、凝血因子FⅧ、纤维结合蛋白、血管性血友病因子等成分，输注后具有止血、抗感染、促进伤口愈合及组织修复作用[1]。该制品在临床应用越来越广泛。笔者在应用中发现使用冷沉淀制备仪虹吸制备冷沉淀比经典低温水浴箱融化离心法制备时间短、纤维蛋白原和凝血因子FⅧ回收率高，且操作简单简便，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

ZBK-LCD-A1冷沉淀凝血因子制备仪（山东中保康公司）；贺利氏6000i 型大容量低温离心机（德国theymo公司）；CT-4T.6C型低温水浴融化箱（美国血技公司）；SE250高频电子热合机（韩国）；SPN1501F电子天平（美国奥豪斯公司）；Sysmex CA-50型血凝仪（日本希森美康株式会社）；以下试剂均为德国西门子公司生产：标准血浆（Standard Plasma， 批号：503232C）、乏Ⅷ因子血浆（批号：546578A）、纤维蛋白原标准试剂（Fbg， 批号：5308071）、氯化钙（Cacl2， 批号：539716）、缓冲液（批号：547021）、APTT试剂（批号：547189A）。

1.2 冷沉淀凝血因子原料血浆

用山东威高集团生产的白细胞除滤五联袋（抗凝剂为CPDA-1）采集健康献血者全血30人份、每份400 mL，且采集时间>13 min。将其随机分为2组，每组15袋，在采集后8 h内离心分离出新鲜血浆，并于-50℃速冻冰箱速冻，冻结完好后放置于-25℃以下低温冰箱中保存备用。冷冻24 h以上且在保存期内的FFP 用于制备冷沉淀[2]，且FFP质量符合GB18469-2012《全血及成分血质量标准》的要求。

1.3 低温水浴箱融化离心制备法

从-25℃低温冰箱中取出15袋新鲜冰冻血浆，将其置于CT-4T.6C型低温水浴融化箱6℃融化，当血浆大部分融化，余有少许冰渣时将血浆袋取出，配平后离心。在温度4℃、转速4000转/分条件下，离心10 min。离心完毕分离出上层血浆，电子天平称重后余下约20～30 mL血浆和沉淀混合物即为冷沉淀凝血因子，热合离断后立即放置于-50℃深低温冰箱中速冻。此过程需2～3人密切配合，并于2.5 h内完成。

1.4 冷沉淀制备仪虹吸法制备法

按照冷沉淀制备仪说明书操作，待水浴箱中水温降至6℃并恒定，称重挂盒称重清零后，开门将15袋新鲜冰冻血浆分别置于恒温循环水槽中各个上挂盒处，空联袋置于水浴箱外下方的各个下挂盒处，形成落差。点击启动按钮，待管路软化后放入蠕动泵和夹管阀内，关闭夹管阀打开止流夹。关门启动自动制备程序。水浴箱的水循环流动，冰冻血浆开始融化，蠕动泵运转同时打开夹管阀形成虹吸，融化的大部分血浆流入空袋中。当上挂盒余下的血袋重量达到设定值70 g后冷沉淀制备仪会自动称重并关闭夹管阀。每批次完成仪器自动报警。开门关闭止流夹，收取血袋，剩余的40～50 mL血浆和沉淀混合物即冷沉淀凝血因子，热合离断后立即放置于-50℃深低温冰箱中速冻。此过程仅需1人操作，并且1 h即可完成。

1.5 标本检测及质量控制标准

将2种方法制备的冷沉淀袋一并放入37℃水浴箱中融化，完全融化后从每袋中取样2 mL，检测其中的纤维蛋白原和FⅧ因子含量。按照GB18469-2012《全血及成分血质量要求》规定，由200 mL新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀（IU）：FⅧ含量>80 IU/袋，Fg含量>150 mg/袋，容量：（25±5）mL，符合上述质量标准者则为合格。

1.6 统计方法

采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，计量数据用（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两种方法制备的冷沉淀各项质量指标均符合国家标准，但冷沉淀制备仪制备的冷沉淀中纤维蛋白原、FⅧ因子含量明显高于离心法，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。同时使用冷沉淀制备仪制备冷沉淀只需1 h左右，而离心法需2.5 h左右，时间大为缩短。

3 讨论

成分输血如今已广泛应用于临床，冷沉淀就是其中最常见的一种成分血。冷沉淀含有多种凝血成分，对于甲型血友病、先天性或获获得性纤维蛋白原缺乏症、血管性血友病等都有较好治疗效果。此外，它对于外科患者，尤其是血友病患者的手术中出血有显著地预防和治疗作用[3-4]。因此，从冷沉淀原浆料开始采集到临床输注过程中应尽量减少其中活性凝血成分，尤其是纤维蛋白原和凝血因子FⅧ的破坏。

纤维蛋白原为比较稳定的因子，而凝血因子FⅧ为不稳定因子，其半衰期大约为8～12 h，极易失活[5]。根据现行2012年版《全血及成分血质量要求》中规定，冷沉淀的原浆料应为新鲜冰冻血浆，而FFP是由采集后的全血在8h以内制成。但现有研究表明[6]，利用存储24 h以内的全血制成的冰冻血浆（FP）制备的冷沉淀，其含有的凝血因子水平与按标准程序制成的冷沉淀相当，这是值得我们进一步研究的问题。同时，凝血因子FⅧ在1～6℃条件下，会从血浆中以沉淀性质析出，但温度一旦超过8℃，FⅧ因子则会再次溶解于血浆，影响其回收及活性。有文献报道[7]当在6℃恒温时冷沉淀中的FⅧ因子回收率最高。经典低温水浴融化离心法采用6℃低温水浴箱融化新鲜冰冻血浆后经过离心分离出冷沉淀。此法中水浴箱為一种敞开环境，且离心过程中电机运转都会使制备过程温度易受环境温度影响而上升，有时甚至超过8℃，从而影响凝血因子，尤其是因子FⅧ的回收。并且离心法每批次制备时间需2.5 h左右，过程较繁琐，环节多，同时需2～3人操作。而冷沉淀制备仪采用密闭低温水浴融化箱融化新鲜冰冻血浆，有精密电脑控制水浴温度恒定在6℃，保证了良好的融化环境。冷沉淀制备仪虹吸法拥有血袋固定挂盒，血袋可完全垂直浸没在水中，不会相互粘附，且水浴箱拥有自动水循环系统，这都保证各血袋能受温全面、均匀，能以稳定速度融化。并且全过程电脑控制自动称重，当血袋重量达到设定值时会自动关闭阀门并报警，仅需1人操作即可，每批次制备时间约需1 h。同时还可避免人为操作和人工称量误差而影响凝血因子，尤其是纤维蛋白原和FⅧ因子的回收率。本研究中，两种方法制备的冷沉淀质量尽管都符合质量管理标准，但制备仪虹吸法生产的冷沉淀中纤维蛋白原和FⅧ因子的含量要比低温水浴融化离心法高，大大提高了产品质量。同时，每单位体积冷沉淀中纤维蛋白原和FⅧ因子的含量增加可以减少病人使用冷沉淀的容量，从而减少输注血液制品的副作用的发生。这对于确保冷沉淀的临床输血疗效，防止无效输注有着极其重要的意义。

可见，冷沉淀制备仪虹吸法制备冷沉淀不但克服了低温水浴融化离心法操作步骤繁琐、制备时间长、温度不恒定、工作效率低、人为因素影响多等缺点，而且凝血因子回收率高，基本实现了程序化控制的冷沉淀制备规范化操作，省时、省力，极大地提高了工作效率，而且产品质量更可靠，大大提高了临床输血的安全性，值得大力推广。

[参考文献]

[1] 杨孝顺，安梅，阮光萍，等.冷沉淀在临床外科手术中的应用[J].中国输血杂志，2005，18（3）：255-256.

[2] 陈均，李琼芝，杨通汉，等.应用半自动血凝仪检测冷沉淀中FⅧ：C含量[J].临床输血与检验，2003，5（1）：35.

[3] 高志峰，胡丽华.冷沉淀融化后不同放置时间FⅧ和vWF水平的变化及意义[J].国际检验医学杂志，2013，34（16）：2097-2098.

[4] Levy JH， Welsby I， Goodnough LT. Fibrinogen as a therapeutic target for bleeding： a review of critical levels and replacement therapy [J]. Transfusion，2014 ，54（5）：1389-1405.

[5] 高峰.输血与输血技术[M].北京：人民卫生出版社，2003：160-161.

[6] Philip J， Kumarage S， Chatterjee T， et al. The possible advantages of cryoprecipitate prepared from fresh frozen plasma from blood stored for 24 hours[J].Laboratory Medicine，2014， 45（2）：111-115.

[7] 张国清，杨玉发，李庚娣.两种融化方法制备冷沉淀比较[J].广州医药，2007，37（3）：56-57.

（收稿日期：2018-03-12）