布鲁氏菌病PCR检测试剂盒的筛选

谢建华　周莉　汪子淳

摘要：为了及时、准确地诊断布鲁氏菌病，避免误诊和从业人员感染而造成重大经济损失，对3个不同厂家（分别以A、B、C代替）生产的布鲁氏菌荧光PCR检测试剂盒和1个布鲁氏菌PCR检测试剂盒进行了试验对比。从试剂盒的简便性、反应时间、灵敏性、价格等方面进行评价，结果B公司的试剂盒相对优于其他几个公司的试剂盒。

关键词：布鲁氏菌病；PCR检测；试剂盒；筛选

中图分类号：S855.9+9 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2018）04-0007-02

布鲁氏菌是一种胞内寄生的病原菌，对人和哺乳动物具有高度感染性和致病性，我国将该病列为二类动物疫病。据统计，全世界每年因布鲁氏菌病（简称布病）造成的经济损失近30亿美元，对人类健康和畜牧业发展构成重大威胁[1，2]。目前，布鲁氏菌的检测标准方法是布鲁氏菌的分离鉴定，对条件要求较高，容易造成人员感染和环境污染等影响，使得难以推广。而布鲁氏菌PCR检测法，可以事先对样品进行灭活处理，从而降低布鲁氏菌感染和扩散的风险。笔者通过对3个厂家布鲁氏菌荧光PCR检测试剂盒和1个布鲁氏菌普通PCR试剂盒进行试验，旨在为布病诊断筛选出最佳的检测试剂盒。

1 材料与方法

1.1 材料

布鲁氏菌疫苗株：S2株金宇保灵、M5株新疆天康、A19株中牧实业，布鲁氏菌荧光PCR试剂盒（A、B和C厂家），布鲁氏菌PCR试剂盒（D厂家），核酸提取试剂盒（武汉科前）。

1.2 方法

参照核酸提取试剂盒说明书提取疫苗株S2、M5、A19的核酸DNA并做10-3到10-7稀释，按照布鲁氏菌荧光PCR试剂盒和普通PCR试剂盒说明书内容进行检测判定。

2 结果与分析

2.1 荧光PCR检测结果

布鲁氏菌荧光PCR检测结果见表1。由表1可知，B试剂盒在3个疫苗株的10-6倍稀释时出现阴性。

2.2 普通PCR检测结果

如图1、图2所示，株S2和M5株经10倍稀释后到10-6梯度均扩增出223 bp目的条带； A19株到10-5梯度扩增出目的条带（图3）。

2.3 评分和灵敏性检测

2.3.1 简便性 简便性总共4分，阴阳性对照不用提取核酸的得2分，不需要配制反应体系的得2分，若配制时，每个体系有2种共用试剂得1分，有2种以上共用试剂得0分。

2.3.2 反应时间 反应时间总共3分，不要电泳的得2分，PCR反应时间在1.5～2.0 h得1分，反应时间在2 h以上不得分。

2.3.3 灵敏性 灵敏性总分3分，荧光PCR根据CT值、指数增长趋势和曲线高低进行评比；普通PCR根据模板稀释倍数来评比。

2.3.4 价格 价格总分2分，试剂盒价格在1 500～2 000元得2分，2 000～2 500元得1分，2 500元以上不得分。

经过对4家公司试剂盒的比较，表明B公司试剂盒相对优于其他几个公司的试剂盒，因此，B公司的试剂盒是首选，详见表2。

3 小结与讨论

布鲁氏菌可感染多种家畜和野生动物，主要通过动物的消化道、皮肤、黏膜、结膜等途径传播[3，4]。动物感染布鲁氏菌后不仅影响动物繁殖能力和生产性能，而且还会影响畜产品的质量安全。魏巍等[5]报道，全国奶牛布病阳性率由2000年的0.09%上升到2010年的0.84%。有关资料表明，绵羊患布鲁氏菌病后流产率为57.7%，牛患布鲁氏菌病后流产率为31.2%，畜间布鲁氏菌病严重流行时期，我国每年因流产损失牛犊达5万～6万头，因空怀等原因少生幼畜105万～140万头[4]。疫情范围逐年扩大，人间布病与动物布病呈正相关性[5]。尤其是从业人员，若防护措施不当极易导致布病感染[6，7]。筛选出最佳试剂盒是做好实验室监测工作的前提，大家可以结合购买渠道、售后服务、实验室条件、试剂成本、操作简便等方面来选择考虑所购买的试剂种类。

参考文献：

[1] 邱宇鹤，王 锦，何淑云.布病的流行、检测与防治研究进展[J].实用检验医师杂志，2015，7（3）：187-188.

[2] 吐尔洪·努尔，谷文喜.布鲁菌病研究进展[J].动物医学进展，2007，28（7）：82-87.

[3] 蔡宝祥.家畜传染病学[M].第4版.北京：中国农业出版社，2001.

76-81.

[4] 李长友，李 明.動物布病防治指导手册[M].北京：中国农业出版社，2012.134-137.

[5] 魏 巍，马世春.人兽共患病防控系列报道（三）我国布病流行情况及防控建议[J].中国畜牧业，2013（12）：38-41.

[6] 周 莉，侯权书，黄 诚，等.布鲁氏菌病的危害与个人防护[J].中国动物检疫，2016，33（6）：52-54.

[7] 谢建华，周 莉，汪子淳，等.羊肉产品中的布鲁氏菌污染及其风险传递调查[J].中国动物检疫，2017，34（5）：31-34.