c-met、VEGF-C及LMVD在食管鳞癌中的表达及意义

赵 杨，刘莎莎，徐树雷，赵 醒，申兴斌△

（1.承德医学院附属医院病理科，河北承德 067000；2.承德医学院附属肛肠医院）

侵袭和转移是恶性肿瘤的两个基本生物学特性，也是导致肿瘤复发和患者死亡的重要原因之一。肝细胞生长因子受体（c-met）是由原癌基因编码的蛋白产物，是肝细胞生长因子（HGF）的受体，当c-met过表达时，可通过与HGF结合后激活信号传导通路促进肿瘤的发生，也可直接调控肿瘤的发生和浸润[1-2]。另外，在肿瘤的侵袭和转移过程中，微淋巴管系统充当着重要角色，肿瘤组织在有淋巴管长入后，才能迅速生长，并进一步向周围浸润和向远处转移。血管内皮细胞生长因子C（VEGF-C）是一种能促进淋巴管生成和成熟的因子，并能通过促进肿瘤周围淋巴管的增生促进肿瘤的淋巴结转移[3]。微淋巴管密度（LMVD）作为反映新生淋巴管水平的指标，能提示肿瘤微淋巴管生成的活性或强度，其在肿瘤形成及转移中的作用近年来备受关注。为进一步探讨食管癌发生和侵袭转移的机制，本研究对比分析了食管鳞癌及食管正常黏膜组织中c-met、VEGF-C、LMVD的表达情况及与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 我院胸外科手术后经病理检查证实的食管鳞癌组织标本60例，全部患者术前均未接受放化疗。60例患者年龄39～80岁，平均58岁；浸润未穿透肌层21例，浸润超过肌层39例；无淋巴结转移27例，有淋巴结转移33例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期27例。收集上述食管鳞癌术后标本距癌组织＞5cm处的黏膜组织，并经病理检查证实为正常黏膜标本25例，作为正常对照组。所取组织标本常规石蜡包埋，用于免疫组化染色。

1.2 检测c-met、VEGF-C及D2-40的表达 采用MaxVision免疫组化法检测c-met、VEGF-C及D2-40的表达情况。c-met兔抗人多克隆抗体、VEGF-C兔抗人多克隆抗体、D2-40鼠抗人单克隆抗体，购自北京中杉金桥生物技术有限公司；MaxVision试剂盒，购自福建迈新生物技术公司。

1.3 结果判定

1.3.1 c-met、VEGF-C免疫组化染色结果判定：c-met、VEGF-C免疫阳性产物主要表达在细胞浆，以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。在染色均匀的肿瘤区选取5个高倍镜视野(×400)：①按阳性细胞百分率评分，＜25%为1分、25%～50%为2分、＞50%为3分；②按染色强度评分，不着色为0分、浅棕黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。以①+②评分相加判定最终结果：阴性(-)，0分；弱阳性(+)，1～2分；中度阳性(++)，3～4分；强阳性(+++)，5～6分。

1.3.2 LMVD的判定：用D2-40标记微淋巴管，以阳性着色的单个内皮细胞或内皮细胞簇为一个微淋巴管，不一定有完整的管腔结构。在低倍镜下（×40）选取阳性染色微淋巴管最丰富的区域，即“热点”，然后在高倍镜下（×200）观察每个热点中的5个视野，计算视野中的微淋巴管数，最后计算2个热点的平均淋巴管数目。

1.4 统计分析 通过SPSS 19.0统计软件完成统计处理，LMVD的比较采用两独立样本的t检验，c-met、VEGF-C表达的比较采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 c-met、VEGF-C的表达情况 食管鳞癌组织c-met、VEGF-C的表达均明显高于正常食管黏膜，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1：

表1 c-met、VEGF-C在食管鳞癌和正常食管黏膜中的表达情况

2.2 c-met、VEGF-C表达与食管鳞癌临床病理特征的关系食管鳞癌c-met、VEGF-C表达与年龄和浸润深度无关（P＞0.05）；与淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0.05）：有淋巴结转移的食管鳞癌组织c-met、VEGF-C的表达明显高于无淋巴结转移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期食管鳞癌组织c-met、VEGF-C的表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期。见表2：

表2 c-met、VEGF-C表达与食管鳞癌临床病理特征的关系

2.3 食管鳞癌、正常食管黏膜的LMVD值及LMVD值与食管鳞癌临床病理特征的关系 食管鳞癌组织的LMVD值为（9.37±2.08），明显高于正常食管黏膜的LMVD值（5.52±1.76，P＜0.05）。食管鳞癌的LMVD值与年龄无关（P＞0.05）；与浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0.05）：浸润深度超过肌层的食管鳞癌组织LMVD值明显高于未超过肌层，有淋巴结转移的食管鳞癌组织LMVD值明显高于无淋巴结转移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的食管鳞癌组织LMVD值明显高于Ⅰ+Ⅱ期。见表3：

表3 LMVD值与食管鳞癌临床病理特征的关系（± s ）

表3 LMVD值与食管鳞癌临床病理特征的关系（± s ）

项目 例数 LMVD值 P年龄（岁） ≤56 33 9.43±2.17 ＞0.05＞ 56 27 9.18±1.88浸润深度 未超过肌层 21 7.55±2.09 ＜0.05超过肌层 39 9.76±1.92淋巴结转移 无 27 7.67±1.98 ＜0.05有33 10.89±2.11 TNM分期 Ⅰ+Ⅱ 33 7.82±1.73 ＜0.05Ⅲ+Ⅳ 27 10.75±2.19

3 讨论

c-met是原癌基因编码的蛋白产物，与HGF结合后可激活一系列信号传导通路，导致肿瘤的发生和侵袭。研究发现[4]，HGF/c-met通路能刺激上皮细胞的分化、增殖，最终导致肿瘤的的形成、侵袭和转移；并且c-met在多种恶性肿瘤的发生和侵袭中起重要作用[5-7]。本研究显示，c-met在食管鳞癌组织中的表达明显高于正常食管黏膜，且有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期，提示c-met在食管鳞癌的发生和转移中可能具有重要作用。

VEGF-C是VEGF家族的成员，与受体结合后能促使血管及淋巴管上皮细胞的增生和迁移，并能改变淋巴管内皮细胞的功能，使之对肿瘤细胞产生趋化性，肿瘤细胞更容易从淋巴管侵入和播散[8]。因此，VEGF-C的表达升高可能会促进肿瘤的淋巴转移。本研究亦发现，VEGF-C在食管鳞癌组织中的表达明显高于正常食管黏膜，且有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期，提示VEGF-C可能在食管鳞癌的侵袭和转移中发挥重要作用。

肿瘤组织含有较丰富的淋巴管，主要分布在肿瘤的周边区，肿瘤周边区微淋巴管数量不断增多，且淋巴管管壁缺乏紧密连接，缺少阻碍肿瘤细胞进入新生淋巴管的有效屏障，因此给肿瘤的淋巴结转移创造了有利条件。本研究发现，食管鳞癌组织的LMVD值明显高于正常食管黏膜，且与食管鳞癌浸润深度、有无淋巴结转移、TNM分期有关，提示LMVD值的增高可能与食管鳞癌的侵袭和淋巴结转移有关。

综上所述，c-met、VEGF-C和微淋巴管形成可能在食管鳞癌的发生、侵袭和转移过程中发挥重要作用，通过对三者的深入研究，可能对食管鳞癌的治疗和预防转移提供新的方向。

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