口腔扁平苔藓患者外周血中Th1和Th17升高在发病机制中的意义

蒋永元 朱璇

上海复旦大学附属中山医院青浦分院口腔科，上海 201700

口腔扁平苔藓（OLP）是慢性炎性自身免疫性疾病，常累及颊部、舌及牙龈并伴发充血、糜烂、溃疡，若病损经久不愈，局部癌变风险可大幅上升[1]。目前临床对于OLP的发病机制尚无明确结论，多数学者认为，OLP是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，其中辅助性T细胞亚群（Th1/Th2）漂移学说备受关注[2]。研究发现，OLP患者病损组织中可见Th17细胞大量浸润，表明Th17可能参与了OLP的炎症免疫反应进展[3]。为验证这一假设，此次研究比较71例OLP患者及30名健康体检者上述指标水平，探讨Th1、Th17在OLP发病机制中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

入选标准：参照第四版《口腔粘膜病学》[4]并经病理组织学检查确诊OLP，签署书面同意协议。排除标准：合并其它口腔粘膜或系统性疾病；合并严重感染性疾病；合并其他部位癌前病损或肿瘤；入组前1个月内有抗生素或免疫制剂使用史。2015年2月至2016年12月71例患者符合条件，纳入患者组；选取同期性别、年龄与患者相近的30名健康体检者作为NC组。

1.2 检测方法

抽取两组受试者入组次日清晨空腹静脉血5 mL，使用FACSC CantoTMⅡ Flow Cytometer流式细胞仪（美国BD公司）以及配套Th1、Th17试剂盒，运用双重免疫荧光染色技术检测[5]。借助配套CBA Instrument Setup template及Cytometer Setup Beads，使用Cellquest软件建立获取模式，读取细胞因子检测数据。其中，Th1型细胞因子包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）以及白细胞介素-2（IL-2）；Th17型细胞因子包括IL-17及IL-23。

1.3 分析方法

比较患者组、NC组外周血Th1型细胞因子及Th17型细胞因子水平，按照OLP患者临床类型[6]分非糜烂型（口腔粘膜可见白色条纹但无充血糜烂）；轻度糜烂型（口腔粘膜有白色条纹并伴单灶或多灶小面积糜烂，总面积≤1 cm2）；重度糜烂型（口腔粘膜有白色条纹并伴单灶或多灶小面积糜烂，总面积＞1 cm2），比较各组患者外周血中Th1、Th17水平差异。临床体征及临床症状再次分组，运用Pearson相关性分析，明确Th1、Th17与患者临床特征的关联。临床体征评分方法按照文献[7]、临床症状评分标准按照文献[8]。

1.4 统计学分析

对本临床研究的所有数据采用SPSS 18.0进行分析，Th1和Th17型细胞因子水平组间比较采用t检验，Pearson法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者组与NC组外周血Th1和Th17检测结果

患者组外周血Th1型细胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL2）及Th17型细胞因子（IL-17、IL-23）水平均高于NC组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 患者组与NC组外周血Th1和Th17检测结果比较（pg/mL，x±s）

2.2 不同临床类型患者外周血Th1和Th17检测结果

随着患者临床类型由非糜烂型向轻度糜烂、重度糜烂进展，其外周血Th1型细胞因子、Th17型细胞因子均逐渐升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同临床类型OLP患者外周血Th1和Th17检测结果比较（pg/mL，x±s）

2.3 相关性分析

Pearson相关性分析示，OLP患者外周血Th1型细胞因子、Th17型细胞因子与其临床类型、临床体征评分及临床症状评分呈弱正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 OLP患者外周血Th1和Th17与临床特征的相关性分析（r值）

3 讨论

多数研究认为，免疫因素在OLP的发生发展中扮演了重要角色，其中，T细胞介导的细胞免疫反应被认为与OLP的发生密切相关，且已有大量研究证实Th1/Th2失衡所致体液免疫及细胞免疫紊乱与OLP的相关性，但目前该病的确切发病机制尚无全面阐释[9-10]。

既往研究显示，OLP病损组织固有层内可见大量散在分布的Th1和Th17细胞，且患者外周血Th1和Th17细胞比例均显著升高并与OLP临床表型具有密切关联[11]。基于既往研究，此次分析OLP患者外周血Th1、Th17水平变化，结果显示，与健康者相比，OLP患者外周血Th1、Th17型细胞因子水平均大幅升高，同时，随着患者病损组织糜烂程度的加剧，其Th1、Th17型细胞因子水平逐渐升高，且Pearson相关性分析亦印证了Th1、Th17型细胞因子与OLP临床类型、临床体征评分、临床症状评分的相关性。

Th1型细胞因子中，TNF-α是一种促炎性细胞因子，主要由活化的单核-巨噬细胞分泌，不仅能够刺激单核细胞分泌IL-1、IL-6及趋化因子，还可促使Th细胞向Th1细胞分化[12]。有学者发现，OLP病损处T细胞分泌的趋化因子可激发肥大细胞脱颗粒作用，促使TNF-α大量释放，而TNF-α可进一步上调趋化因子分泌，形成瀑布样效应，加剧OLP慢性发展过程[13]。一项体外研究结果显示，OLP局部病损取约有1%的基底膜细胞内IFN-γ mRNA呈阳性表达[14]，其引发局部病损的机制可能与增强粘附分子及主要组织相容性复合体-Ⅱ表达有关，这一连锁反应的形成可能是促使局部炎症反应增强的重要原因。作为一种重要调节因子，IL-2可参与损伤、炎症、宿主免疫反应等多个过程，扮演着中性粒细胞活化剂、T细胞趋化剂等多种角色，OLP患者外周血IL-2显著升高的原因可能与TNF-α-TNFR-1信号通路介导的免疫炎症反应有关，此外，亦有研究发现，IL-2、TNF-α在病损部位的大量聚集，也可协同促进Th1细胞介导的炎症反应进展[15]。

Th17细胞是一种与Th1、Th2细胞不同分化途径的独立辅助性T细胞亚群，其产生的特征性促炎症细胞因子IL-17，被认为是自身免疫性疾病必须的效应性、辅助性T细胞亚群[16]。在自身免疫性疾病中，IL-17主要诱导早期分化与晚期成活增殖两个阶段，且可刺激角化细胞、成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞等，诱导TNF-α、IL-2大量分泌，促进局部炎症反应的增强[17]。此次研究OLP患者外周血内亦检出大量IL-17，说明IL-17也在OLP的免疫病理过程中发挥了重要作用。OLP患者外周血IL-23水平大幅上升，意味着Th17细胞稳定性破坏、Th17细胞大量增殖以及区域聚集，也是加剧局部组织损伤、激活局部微环境炎症级联反应的重要因子[18]。

综上所述，OLP患者外周血中Th1和Th17均显著升高，二者均可诱导炎症反应增强、加剧局部组织损伤，共同促进OLP病理生理改变的发生与发展。重视外周血Th1和Th17检测以评估病情，并寻求控制Th1和Th17的靶向治疗药物，有望为OLP的诊疗提供新的思路。

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