H7Re-1疫苗筛选及免疫效果评估*

常海霞 ，崔雪志 ，沈志勇 ，鲁守伟 ，李俨 ，吴蕾 ，徐璇 ，许传田

(1.山东新希望六和集团有限公司，山东 青岛 266101；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100；3.临沂市临港区壮岗镇兽医站，山东 临沂 276615）

禽流感（Avian influenza，AI）是由 A 型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的严重危害养禽业的传染性疾病。禽流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科流感病毒属，其最显著的生物学特性是是亚型众多、变异频繁[1]。根据AIV对禽类致病性的差异，将AIV分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒，高致病性禽流感病毒目前仅见于H5、H7两个亚型[2]。2013年以来，我国部分地区时有人感染H7N9亚型流感病毒的病例出现，并时有从禽群或市场活禽及环境检出对家禽低毒或无毒力H7N9亚型禽流感病毒[3-6]。

为有效防控H7N9亚型禽流感，2017年7月农业部发布关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知，要求从2017年秋季开始对全国家禽全面开展H7N9免疫[7]。本试验通过将60只SPF鸡分别接种四个厂家H7Re-1疫苗，检测免疫后H7抗体，筛选出抗体最高的疫苗厂家，推荐肉种鸡场试用并对试用肉种鸡场跟踪检测H7抗体，为肉种鸡场使用免疫效果好的H7Re-1疫苗提供参考。

1 材料和方法

1.1 主要试剂 禽流感病毒H7亚型血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H7亚型阳性血清购自哈尔滨兽医研究所。

1.2 主要仪器、设备 SPF鸡负压隔离器购自苏州冯氏实验动物设备有限公司（型号GJ-1型）。

1.3 试验动物 SPF鸡和SPF鸡胚均由山东省农业科学院家禽研究所SPF鸡场提供，试验场所为齐鲁动物保健品有限公司动物房，试验在负压隔离器中进行。

1.4 动物试验

1.4.1 SPF鸡免疫 将70只1d SPF鸡随机分5组（每个试验组15/只，对照组/10只），三个隔离器中饲养，每只SPF鸡佩戴不同颜色的脚环区分，免疫日龄、剂量、方式、厂家，见表1。

表1 SPF鸡免疫日龄、剂量、方式、厂家

1.4.2 种鸡场免疫 三个不同肉种鸡场免疫周龄、免疫剂量、免疫方式、疫苗厂家见表2。

表2 肉种鸡场免疫周龄、疫苗厂家及剂量

1.4.3 血清采集和抗体检测 SPF鸡免疫后，分别在 23、30、37、44、51、58d 采血，每份血清不少于0.5ml，样品做好标记，-20℃保存统一检测。肉种鸡场均在免疫前采集血清，并在免后4周采集血清检测（每栋随机采集16个样品）。

HI/HA试验方法按常规进行[8]。结果判定：以完全抑制4单位抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。阳性对照孔血清的HI效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清的HI效价不高于2log2时试验方可成立。被检血清HI效价≥4log2判为阳性，HI效价＜4log2判为阴性[9]。

2 结果

2.1 鸡群免疫后抗体阳性率 SPF鸡一次免疫H7Re-1疫苗后，1～3组 SPF鸡 H7抗体阳性率100%，4组SPF鸡H7抗体阳性率86.7%；二次免疫H7Re-1疫苗后1～4组SPF鸡H7抗体阳性率均达100%。肉种鸡场X场、Y场、Z场首免H7Re-1后抗体阳性率即达100%。免疫H7Re-1后抗体阳性率情况见表3、表4。

表3 SPF鸡免疫H7Re-1后抗体阳性率

表4 肉种鸡场免疫H7Re-1后抗体阳性率

2.2 SPF鸡免疫H7Re-1疫苗后H7抗体结果SPF鸡首免后14d检测H7抗体均在4log2以上；二免后28d免疫H7Re-1后SPF鸡H7抗体均达到高峰，1组（A厂家疫苗）最高为11.13log2，对照组H7抗体为0。

从H7抗体曲线可看出，H7Re-1疫苗免疫后，免疫 A公司SPF鸡群 H7抗体最高，CV值最好(见图 1、图2)，推荐肉种鸡场试免 A厂家 H7Re-1疫苗。

图1 SPF鸡免疫H7Re-1疫苗后H7抗体曲线

图2 SPF鸡免疫各公司疫苗后CV值曲线

2.3 肉种鸡场免疫H7Re-1后抗体结果 肉种鸡场鸡群免疫H7Re-1疫苗前H7抗体平均值低于1log2，免疫A公司 H7Re-1疫苗后，各场 H7抗体均显著上升，首免后四周H7抗体在6log2左右；二免后4周H7抗体在8log2左右；三免后四周H7抗体值在9log2左右；三个场肉种鸡群两次免疫后抗体 CV值在15%以下，见图3、图4。

图3 肉种鸡场免疫H7Re-1后抗体

图4 肉种鸡场免疫H7Re-1后CV值

3 讨论

SPF免疫H7Re-1后，SPF鸡产生H7抗体水平的差异可能与疫苗厂家的生产工艺、佐剂、抗原含量等有关。SPF鸡群和肉种鸡群分别免疫两次A厂家H7Re-1疫苗，二免4周后检测H7抗体相差2.6log2，这可能与免疫日龄、免疫间隔、鸡的品种、饲养管理等有关［10］。

在SPF鸡群和肉种鸡群的检测均表明，鸡群免疫两次H7Re-1疫苗均可达到较好的免疫效果，建议种鸡场至少免疫两次H7Re-1疫苗，才能确保为鸡群提供较好的免疫保护。值得注意的是国家批准的H7Re-1疫苗是H5+H7二价灭活疫苗（H5N1Re-8+H7N9H7Re-1）， 因此评估 H7Re-1疫苗时应同时考虑H5N1Re-8的免疫效果。

本研究为父母代种鸡场防控H7N9禽流感提供数据参考，众所周知，疫苗是防治传染性疾病最后的一道防线，家禽养殖场不能完全依靠疫苗，再好的疫苗也不能提供完全保护。因此养殖场通正确免疫H7N9疫苗后，还要不断的进行抗体检测和评估，及时了解疫苗的抗体产生规律，不断完善免疫程序，才能把疫苗的作用落实到实处。同时要结合有效的生物安全部措施，有效控制H7N9的流行。

参考文献：

[1] Y.M.Saif主编.苏敬良等译.禽病学[M].北京：中国农业出版社，2012，171-193.

[2] 修文琼，郑奎城.新型 H7N9禽流感病毒研究进展[J].中国人兽共患病学报,2014，30（6）∶636-644.

[3] 秦彦珉，梅树江，谢旭，等.深圳市19例人感染H7N9禽流感确诊病例流行病学分析[J].中国公共卫生，2015(01)∶11-13.

[4] 胡锦峰，王双英，金涛，等.杭州市上城区8例人感染H7N9禽流感确诊病例流行病学分析[J].疾病监测，2013(09)∶717-719.

[5] 曾寒飞.四川省鸡场禽流感免疫程序调查及抗体水平监测[D].成都：四川农业大学,2014.

[6] 农业部.2013年下半年动物H7N9禽流感监测方案[J].吉林畜牧兽医,2013(09)∶7-8.

[7] 农业部.关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工 作 的 通知 [EB/OL].(2017-07-10).http∶//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm.

[8] 中华人民共和国国家标准.GB/T18936-2003，高致病性禽流感诊断技术[S].2003.

[9] 农业部.2007年高致病性禽流感和口蹄疫等重大动物疫病免疫方案[EB/OL].(2017-02-07).http∶//www.moa.gov.cn/xw/zwdt/200702/t20070207_770601.htm.

[10]彭英波.山区家禽禽流感免疫抗体监测与分析［J］.中国畜牧兽医文摘，2014，12（5）：129-130.