UPLC法测定血栓通注射液中人参皂苷类成分的含量

　　

1.红河州食品药品检验所，云南　蒙自　661100；2.昆明市食品药品检验所，云南　昆明　650032

UPLC法，是在HPLC法上进一步开发得来的，较之传统的HPLC法，UPLC法的主要突破表现在色谱分离上，色谱的解析度更高。高速度、高分离度和高灵敏度，是UPLC法的突出优势[1]。UPLC法目前还处于新兴阶段，实践应用主要集中于生化领域，而在天然产物的成分和精度分析上的应用，也在逐渐兴起。而对中成药进行成分分析，是确定药品安全性，指导临床科学用药的重要环节，所以，应用UPLC法进行中成药中有关成分含量的测定，应用也逐渐广泛[2]。本研究分析两种方法在中成药的人参皂苷类成分含量测定中的应用效果。

1　资料与方法

1.1一般资料

1.1.1样品血栓通注射液(广西梧州制药(集团)股份有限公司，批准文号：国药准字Z45021769)为分析样品，样品来自本药检所留样，为同一批次药物；对照品来自中国食品药品检定研究院。

1.1.2仪器岛津LC-20AT型号的高效液相色谱仪(SHIMADZU)；ACQuty Arc(2998PDA)型号的超高效液相色谱仪(Waters)；DV215CD型十万分之一电子天平(OHAUS)；BS110S型万分之一电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。

1.2方法

1.2.1样品溶液制备 准确称取样品(0.50±001)g，加入50 mL浓度为70%的甲醇溶液，严密称重后，超声提取30 min(频率设置为33 kHz，功率设定为250 W)，再次严密称重，用等浓度甲醇溶液补足减失的质量，摇匀、滤过，经0.22 μm的有机滤膜滤过后，取续滤液即得，进行液相分析。

1.2.2对照品溶液制备用70%的甲醇溶液，将人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd以及三七皂苷R1对照品配制成各含1 mg·mL-1的混合标准贮备液，在4 ℃条件下保存待用，进行液相分析。

1.2.3参数和色谱条件两种检测方法的流动相条件相同，柱温、检测波长以及进样量相同，操作差异主要表现在流速和梯度洗脱程序上，具体为：①UPLC法：以乙腈(A)与浓度为0.05%的磷酸(B)为流动相，进行梯度洗脱；将柱温控制在30 ℃，流速为1.0 mL/min，检测波长设定为203 nm，每次进样的样品体积为2 μL ；②HPLC法：流动相条件与UPLC法相同。进行梯度洗脱。将柱温控制在30 ℃，流速为0.4 mL/min，检测波长设定为203 nm，每次进样的样品体积为2 μL。两种方法下的梯度洗脱程序见表1。两种方法下，均重复测量3次，取平均值。

表1　两种方法的梯度洗脱程序

1.3观察指标观察并对比两种方法下，血栓通注射液样品中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd以及三七皂苷R1等五种皂苷类成分的平均含量测定值，比较两种测定方法所需时间。

2　结果

2.1两种检测方法下人参总皂苷类成分含量测定结果本组研究针对同一批血栓通注射液样本进行人参皂苷类成分含量的测定，结果显示，在UPLC法和HPLC法检测下，受检样品的人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd以及三七皂苷R1这5种人参皂苷成分的含量和RSD值的测定结果无偏差，全部一致。详见表2。

表2　人参皂苷类成分含量测定结果

2.2两种检测方法所用时间比较结果两种检测方法在一起流速参数设置以及色谱条件上有所差异，UPLC法检测下，其梯度洗脱程序得到优化，因此，检测的色谱分离度更高，其检测的速率也得以显著提升，UPLC法下，平均用时(15.12±0.75)min，显著短于HPLC法下的(47.15±0.73)min，差异具有统计学意义(P<0.05)。

3　讨论

3.1UPLC法的优势HPLC法是最早出现于20世纪60年代末的分离分析技术，在多年间，不断发展，受益于科学技术的进步，色谱得到不断完善，其分离速率、分离效率以及检验的灵敏度均逐年提升，已广泛被应用于多个学科领域。而在突破了色谱这一瓶颈限制后，在此基础上开发成功的UPLC法呈现出更多优势，尤其在检测速率上，得到显著提升，且能够保证检测结果的精确，在医学领域的药品分析和质量测定中的应用，尤其受到重视，其中比较重要的应用方向即对药物成分的含量测定[3]。

3.2UPLC法进行成分测定的现实意义应用UPLC法对合成类药物及相关制剂进行成分含量的测定，能够不受药物本身带有的杂质、相关添加剂或者共存药物的影响，测定结果更为精确，能够为临床用药提供更为准确的指导，保证用药剂量的科学性，提升用药安全。吴立蓉等[4]曾经应用UPLC法对复方丹参片中皂苷类的含量进行测定，并与HPLC法测定结果进行对比，证实UPLC法测定的速率更快。

3.3HPLC法与UPLC法测定价值对比本研究中，以常用中成药血栓通注射液为研究样品，就传统的HPLC法与UPLC法在对其中的人参皂苷进行成分含量测定中的应用价值进行对比分析。研究中，样品的选择，色谱条件的建立均严格按照《中国药典》中的相关规定设定，检测波长以及流动相选择，均为统一标准规格，最大限度杜绝了其他成分对测定结果的影响；此次研究中，为最大限度缩小误差，使用了精密度为万分之一和十万分之一的超高精度电子天平对样品进行称取，且测定结果取3次测定的平均值，相比于以往学者[5]的研究，测定数据具有更高的可信度。

测定结果显示两种方法下，研究所选批次的药物的人参皂苷成分含量测定值以及RSD值均一致，提示两种方法在中成药人参皂苷成分含量的测定中，均具有良好的测定效果，具有很高的实践应用价值，可以作为药品分析的首选手段。研究中，UPLC法与HPLC法相比，在分离速率、分离效率以及检测的灵敏度上，同样十分突出。而两种方法主要的区别在于，UPLC法的更具高效性和快速性，可使测定时间显著缩短[6]。本研究中，与HPLC法相比，UPLC法的测定耗时更短，二者相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。

综上所述，运用UPLC法对中成药的人参皂苷成分含量进行测定，准确、高效，是更为科学的测定方法，在实践应用中，应用效果更突出，值得推广。

[1]安军永,王世华,李云鹏,等.参芪益气固本片中皂苷类成分的UPLC-MS测定[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(2):99-102.

[2]蔡艳,宋剑,王贵金,等.UPLC法测定人参总皂苷提取物中7种人参皂苷的含量[J].西北药学杂志,2016,31(5):441-444.

[3]袁媛,徐荣培.超高液相色谱法分析人参新炮制品-黑参制作过程中人参皂苷成分变化[J].云南中医中药杂志,2016,37(1):62-63.

[4]吴立蓉,王秀凤,高卫东,等.超高效液相色谱法快速测定复方丹参片中皂苷类成分的含量[J].广东药学院学报,2016,32(1):32-35.

[5]张晓旭,马雪涛,胡蒙,等.超高效液相色谱法检测6种人参皂苷含量[J].中国食品学报,2015,15(5):241-246.

[6]赵琳琳,赵云平,魏静娜,等.UPLC法测定整参须根和芦头中人参皂苷的含量[J].安徽农业科学,2017,45(28):138-140.