参景固本方体外抗氧化能力的研究

李 欣，周丽雅，柴晶美，杨阿龙

( 长春中医药大学，长春 130117 )

自由基是具有一个以上的不成对电子的分子或原子的总称，在机体内的自由基主要来自生物体的代谢产物，也可来自环境的物理辐射和化学物质，自由基很活泼，在机体内有很强的氧化作用，自由基过多或者清除过慢，会加速机体衰老进程并诱发多种疾病[1-3]。因此，选择有效的抗氧化剂和自由基清除剂来预防及治疗疾病具有重要意义。参景固本方由人参、红景天、山楂等中药组成[4]。研究[5-7]发现，以上药材中的成分均具有一定的抗氧化能力，但其组方共同抗氧化方面的研究尚未见报道。本文用多种方法研究参景固本方的体外抗氧化作用和清除自由基的活性,为探索参景固本方药理作用的机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 参景固本方组成：人参、红景天、山楂（安徽易元堂中药饮片有限公司）。DPPH、VC、无水乙醇、FeSO4、H2O2、水杨酸、吩嗪硫酸甲酯（PMS）、还原型辅酶I二钠盐（NADH）、氯化硝基四唑氮蓝（NBT）等，均为分析纯。紫外可见分光光度计，自动酶标仪（美国BIO-RAD），电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司），恒温水浴锅。

1.2 方法

1.2.1 参景固本方的提取 将人参、红景天及山楂等中药材，用鼓风机常温风干，用高速粉碎机将干燥药材粉碎，过40目筛，取20 g以1:8的料液比加浓度为70%乙醇溶液提取3次，2 h/次，融合3次所得溶液，过滤，浓缩至1 mg/mL溶液，4 ℃冷藏备用。

1.2.2 清除DPPH自由基实验 于酶标板中加入不同浓度的药物溶液（0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/mL）100 mL和0.5 mmol/L DPPH无水乙醇溶液100 mL，震荡30 s，室温反应30 min，在波长517 nm处测定A[8]。VC为阳性对照。清除率（%）= [1-（A1-A2）]/（A3-A4）×100%A1：不同浓度药液100 mL＋DPPH溶液100 mL，A2：无水乙醇100 mL＋DPPH溶液100 mL，A3：不同浓度药液100 mL＋无水乙醇100 mL，A4：无水乙醇200 mL。

1.2.3 清除羟自由基实验[9]在50 mL比色管中依次加入2 mmol/L FeSO43 mL，1 mmol/L H2O23 mL，摇匀，再加入6 mmol/L 水杨酸 3 mL，摇匀，在37 ℃水浴中加热15 min后测其吸光度D1，然后分别加入一定浓度的药液（0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，1 mg/mL），再分别加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，在37 ℃水浴锅中加热15 min后测其吸光度D2。VC为阳性对照。清除率（%）=（D1-D2）/D1×100%。

1.2.4 清除超氧阴离子实验[10]于酶标板中加入不同浓度溶液（0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/mL）50 mL，再依次加入150 mL PMS溶液50 mL，1.2 mmol/L NADH溶液50 mL，360 mmol/L NBT溶液50 mL，震荡30 s，室温反应5 min，在波长540处测定。VC为阳性对照。

1.3 统计学方法 数据采用统计学软件SPSS 19.0进行分析，结果以均数±标准差（）表示，组间比较进行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 参景固本方清除DPPH自由基能力 由图1可见，参景固本方对DPPH自由基有明显的清除作用，清除能力随浓度增加而增加，在浓度为1 mg/mL时，清除率可达71.18%；加入量相同时，清除能力随时间的延伸先快速上升后趋于平缓，在反应30 min时，各药液的清除率均趋于最大数值。结果提示，参景固本方对DPPH自由基有明显的清除能力，但其作用低于VC的清除能力。

图1 参景固本方清除DPPH自由基能力随浓度变化情况

2.2 参景固本方清除羟自由基能力 由图2可见，参景固本方对羟自由基的清除作用在浓度为0.2～0.6 mg/mL时线性增加趋于平缓，随后增加趋势强烈，整个过程清除率呈上升状态，在浓度为1 mg/mL时，清除率达66.58%。结果提示，参景固本方对羟自由基有一定的清除作用，但其清除作用略低于VC。

图2 参景固本方清除羟自由基能力

2.3 参景固本方 清除超氧阴离子能力 参景固本方对超氧阴离子的清除率随浓度的增加，线性增加迟缓，但整体呈上升状态，药液浓度在1 mg/mL时，清除率达36.59%，浓度在0.6～1 mg/mL之间时其清除率明显低于VC。结果提示，参景固本方有清除超氧阴离子作用，但与VC相比略有劣势。

3 小结

在生物体内超氧阴离子自由基作为所有氧自由基中的基础，可通过复杂反应生成其他种类自由基，从而引起脂质过氧化，导致细胞膜的结构和功能改变[11]。这种损害最易见于多种代谢较活跃的器官的细胞线粒体中，导致这些器官老化，从而发生记忆力减退、心血管疾病、尿毒症等老年性疾病。这些自由基性质很活泼，在机体内由很强的氧化能力，并且极易产生连锁反应，对核酸、脂质、蛋白质等造成伤害后，在机体内结成色素斑，加速了衰老进程。因此，寻求自然成分的抗氧化剂成为时下研究的热点。

研究表明，红景天、人参、山楂均有明显的自由基清除能力及抗氧化作用。本实验研究结果表明，参景固本方对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基均有不同程度的清除作用，说明具有一定的抗氧化作用，在浓度为1 mg/mL时对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率达到了71.18%、66.58%、36.59%，虽没有对照组效果显著，但参景固本方还有更多的生物学活性，如抗衰老、降脂、消食等作用，仍具有很好的应用价值，为今后的研究开发指明了更好的研究方向。

参考文献：

[1]张晓璐,徐凯宏. 山楂叶总黄酮清除DPPH和超氧阴离子自由基的活性研究[J]. 林业科技, 2008, 33(5):51-54.

[2]徐建国,胡青平.决明子水提物体外清除自由基活性的研究[J].食品科学, 2006, 27(6):73-76.

[3]高学敏.中药学[M].北京:中国中医药出版社, 2007:270,424, 436.

[4] 宋志斌,朱成琳,师方园,等. 人参皂苷Re体外抗氧化能力及其对血清剥夺神经细胞作用的研究[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18(7):225-228.

[5] 李晓梅. 大枣山楂组方体外抗氧化与体内调血脂活性研究[D].郑州:河南大学, 2009.

[6] 范桂强,齐善厚,庞红霞,等. 红景天提取物与红景天苷体外抗氧化作用研究[J]. 中国药房, 2016, 27(13):1797-1800.

[7] 马天翔,史宁,陈乾,等. 红景天中8种成分体外抗氧化作用的比较[J]. 中国药理学通报, 2012, 28(9):1224-1228.

[8]周桃英. 鱼腥草黄酮的提取及对羟自由基的清除能力[J].江苏农业科学, 2011, 39(6):529-531.

[9]丁利君,周圳辉,林燕如. 黄芪中黄酮物质的提取及其抗氧化研究[J]. 食品科学, 2005, 26(8):77-82.

[10]杨少辉,宋英今,王洁华,等. 雪莲果体外抗氧化和自由基清除能力[J]. 食品科学, 2010, 31(17):166-169.

[11]林晓月,齐珈娆,王丹丹,等. 红景天多糖的提取及体外抗氧化活性研究[J]. 北华大学学报(自然科学版), 2016,17(3):330-334.