热提取法和离心柱吸附法提取DNA病原的比较

梁柱良，王瑞深

（深圳市光明新区动植物检验检测中心，深圳518107）

1　实验器材和耗材

ABI7500实时荧光PCR仪，雅马拓DKM610C送风定温恒温器，ESCOAC2-4S1生物安全柜，Eppendorf5424微量离心机，移液枪，无核酸EP管，热提取法试剂、离心柱吸附法试剂盒和荧光PCR试剂盒均选择在有效期内广州某生物科技有限公司的产品等。

2　实验方法

2.1　分组

?

2.2　提取

2.2.1热提取法：50μl已研磨处理后样品加入50μl核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新1.5mlEP管，-20℃保存待用。

2.2.2离心柱吸附法：100μl已研磨处理后样品按广州某生物科技有限公司的离心柱吸附法试剂盒的产品说明书提取后-20℃保存待用。

2.3　上机

按广州某生物科技有限公司荧光PCR试剂盒的产品说明书操作，荧光通道为FAM，反应体系为25μl。

3　实验结果

图1猪丹毒杆菌荧光PCR图

图2猪圆环2型病毒荧光PCR图

阴性和阳性质控品符合猪丹毒杆菌和猪圆环2型荧光PCR试剂盒的质控标准，实验有效。现整理实验结果如下：

4　分析讨论

表1　猪丹毒杆菌荧光PCR结果分析

表2　猪圆环2型病毒荧光PCR结果分析

根据此次实验结果可以分析得出，热提取法和离心柱吸附法提取猪丹毒杆菌和猪圆环2型病毒阳性组织样品和10*阳性对照样品DNA后进行荧光PCR实验定性检测结果的准确率均为100%，二者在准确性上无差异；热提取法上机CT值RSD%范围在0.25～3.31内，离心柱吸附法上机CT值RSD%范围在0.55～1.91内，两者均在可接受范围内，无明显区别。热提取法操作简单，耗时少，实验仪器需要能达到100℃的恒温箱，仪器条件要求较高，较适合任务急和批量大的检测任务；离心柱吸附法操作要求较严格，实验过程中需要多次转移液体，容易产生交叉污染，但去杂质提纯能力强，适合需要开展下游实验的核酸提取实验。