羊流产衣原体灭活疫苗对绵羊流产的治疗效果观察

王文勇, 刘宝汉, 马元莲, 解安敏, 周继章, 蔡金山

(1. 青海省互助县畜牧兽医工作站, 青海 互助810599 ;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原学国家重点实验室, 甘肃 兰州730046 ;3. 青海省动物疫病预防控制中心, 青海 西宁810000)

衣原体(Chlamydia) 是严格胞内寄生的革兰阴性细菌,直径0.2 ～0.5 μm,介于立克次体和病毒之间,能够通过0.45 μm 滤膜,只能在宿主细胞内生长,不能像大部分细菌一样生长在琼脂平板上。 衣原体病由不同种的衣原体感染引起,广泛地流行于动物界和人类,是一种高度接触性传染病。 其中,流产衣原体主要寄生于猪、牛、羊等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞内,能够引发生殖道黏膜受损,导致母畜流产、产死胎、弱胎等,还可能引发公畜睾丸炎、尿道炎、龟头和包皮炎等,并且偶尔也会对妊娠妇女产生巨大的威胁,引起流产或急性感染[1]。 流产衣原体是羊地方性流产(OOEA)的病原,也能引起猪、牛等多种脊椎动物在妊娠晚期发生流产,造成严重经济损失。 作为一种严重的人兽共患病病原,其防控研究具有非常重要的公共卫生及经济意义。

我国对羊衣原体病的研究开始于1978 年,科研人员对青海、西藏、内蒙以及甘肃等地的羊流产病料进行了分离、鉴定和免疫学研究[2-3],调查报道这些地区山羊的流产率高达20% ～25%。 何存利等对宁夏各地区的16 个规模化羊场进行了衣原体病调查,发现羊场的阳性率为100%,羊群的平均阳性率为19. 3%[4]。 何成基等采用衣原体间接血凝试验对青海省海北州门源县、祁连县、刚察县和海晏县的1 223 份羊血清进行了检测,结果显示,公羊血清阳性率为6.18%,生产母羊血清阳性率为8.07%[5]。 成伟伟等对采自全国8 个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742),显示羊衣原体在我国流行严重[6]。

青海省互助县是畜牧业养殖大县,目前全县共存栏羊44.8 万只,其中,规模养殖场存栏量占总存栏量的51.38%,散养户存栏量占总存栏量的48.62%,规模养殖场存栏占全县存栏量的比重越来越大,规模养殖业呈现“半放牧+半舍饲”和“全舍饲”的新型养殖方式。 由于规模养殖饲养密度大,衣原体病感染呈逐年上升趋势,在预防免疫中发现衣原体疫苗对已感染衣原体病的母羊似乎有一定的治疗作用,为了证实治疗效果,用衣原体疫苗对流产母羊进行了免疫治疗研究。

1 材料与方法

1.1 主要材料 布鲁菌病用虎红平板凝集试验试剂盒(批号为201602),购自哈药集团生物疫苗有限公司;接种用羊衣原体卵黄囊甲醛灭活疫苗(为试验苗,批号为201603)、衣原体间接血凝试验试剂盒(批号为151120)与弓形虫用间接血凝试验试剂盒(批号为150520),购自中国农业科学院兰州兽医研究所;试验动物试验羊为互助县塘川镇某专业合作社饲圈养小尾寒羊母羊,全部为产一胎以上经产母羊。

1.2 试验方法 本研究在青海省互助县塘川镇某专业合作社进行,从2016 年3 月2 日至2016 年10月10 日,共218 d。 对试验母羊在衣原体疫苗免疫前进行内外寄生虫驱虫,并注射羊四联苗(羊快疫,羊猝阻,羊肠毒血症,羔羊痢疾)、小反刍兽疫疫苗。

1.2.1 分组 采集流产母羊的血清进行衣原体间接血凝试验,将检测出的衣原体阳性母羊分为A、B 二个组,其中A 组为试验组,进行衣原体疫苗注射免疫,B组为对照组,注射生理盐水,每组50 只,共100 只。

1.2.2 疫苗接种前血清学检测 (1)样本采集：采集试验羊血样共计100 份,采集后置室温下,待凝固后用离心机分离血清,待检;(2)布鲁菌病用虎红平板凝集试剂盒进行检测,布鲁菌病虎红平板凝集试验判定标准：+ + + + 凝集块呈菌丛状,凝块间液体明显清亮;+ + + 凝集反应较强,液体比较清亮;+ +形成较明显卷边,凝集块间液体稍清亮; + 稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色; -无凝集,呈均匀和粉红色。 阳性血清用试管凝集试验进行复检。 衣原体病用衣原体间接血凝试剂盒进行检测,判定标准为对照各孔成立,则被捡血清1∶24 孔出现“ + +”以上者为阳性;1∶22 孔出现“ +”以下者为阴性;1∶22 孔“ + +”至1∶24 孔“ +”以下者为可疑。 弓形虫用间接血凝试剂盒进行检测,判定标准为被捡血清效价达到或超过1 ∶26 为阳性,“ + +”为阳性终点。

1.2.3 疫苗免疫 从4 月至5 月份对配种25 ～30 d内的A 组50 只试验母羊全部进行免疫,每只羊肌肉接种羊衣原体卵黄囊甲醛灭活疫苗2 mL,B 组50只对照母羊全部接种2 mL 生理盐水,免疫后按照本养殖场正常养殖程序进行分组饲养。 自分组饲养开始,记录各组母羊的妊娠数、流产数、流产率、产羔数、产死羔数、产死胎率,并统计分析。

2 结果

2.1 疫苗接种前血清学检测 共检测100 份血清,经检测,布鲁菌病和弓形虫阳性率均为零,衣原体阳性率为100%,见表1。

表1 疫苗接种前血清学检测结果

2.2 疫苗接种后结果统计 A 组免疫注射后,母羊的流产、产死胎现象明显减少,从2016 年6 月至7月份对免疫后母羊调查统计,A 组50 只母羊中,妊娠母羊48 只,妊娠率为96%,48 只妊娠母羊中没有出现流产现象,流产率为0;B 组50 只母羊中,妊娠母羊49 只,妊娠率为98%,在49 只妊娠母羊流产9只,流产率为18.4%,A 组比B 组流产率降低了18.4%;A 组产羔95 只,死胎2 只,死胎率为2.1%,B 组产羔79 只,死胎24 只,死胎率为30.4%,A 组比B 组死胎率降低了28.3%,见表2。

3 讨论

流产衣原体引起的羊地方性流产作为一种重要的人兽共患传染病,不仅给养羊业造成了相当大的经济损失,也危及人员健康。 怀孕期的妇女被流产衣原体感染可能会导致严重的败血症进而发生流产或产下死胎。 作为一种世界性的流行性疫病,羊地方性流产危害严重,羊衣原体病的防治工作受到人们的广泛关注。 因此,探究羊衣原体病的诊断和防治措施对提高羊养殖的经济效益具有十分重要的意义。

表2 疫苗接种后结果统计

目前对于已经发病的羊只采取措施,主要为添加抗生素进行治疗。 根据患病羊体出现症状的不同,需要采用不同的治疗手段。 针对呼吸道、败血症、生殖道感染等症状,需要采用复方苄星青霉素3号进行注射,每次注射200 万IU ～300 万IU,每天2次,连续注射3 d。 针对衣原体结膜炎症状,则需要在饮水和饲料中加入磺胺二甲嘧啶钠,饮水的混入剂量为1 g/15 ～20 kg·bw,而饲料中是按照1 g/8 ～12 kg·bw 量,进行混饲。 对于呼吸道感染、骨髓炎、关节炎和软组织感染等症状,要按照0.03 mL/kg·bw剂量,注射盐酸林可霉素,每天2 次,连续3 d[7]。 但是由于抗生素与化学合成药物在畜牧生产中滥用,饲料中抗菌药物的添加等,导致病原体出现耐药性、甚至变异,同时药物残留问题也逐渐浮现出来,因此,寻找绿色、高效、有利于生物体健康、有利于环境保护以及提高养殖效益的能够代替抗生素的新型生物治疗制剂迫在眉睫。 作为众多疫苗的一种,治疗性疫苗是指在已感染病原生物或患某些疾病的机体中,可诱导机体产生特异性或非特异性免疫应答,从而达到治疗疾病的制品,具有广泛的应用前景[8]。

从本试验结果可以看出,衣原体感染母羊引起怀孕后期流产中,除在头胎中流产外,有少数母羊流产一胎后还会继续流产数胎,而且在初产羔羊中死胎多,死胎率达到了30.4%,是导致养殖效益低的主要原因。 用羊衣原体卵黄囊甲醛灭活疫苗按每只2 mL 免疫注射后,该疫苗对配种后1 个月内的衣原体阳性母羊有良好的治疗效果,母羊流产、死胎现象明显减少,但是,仍然有流产现象发生,这是否与免疫时间有关(如怀孕前1 个月),因为,感染母羊一旦怀孕,从理论上来说,怀孕胎儿立刻受到衣原体的侵袭,从而导致一定的损伤。 这时候免疫,也许生命力弱的胎儿无法得到很好的免疫治疗,最后死亡,导致流产。 另外,众所周知,兽用疫苗基本用来预防动物疾病的,就当前而言,未见到预防疫苗具有治疗效果的相关报道。 因此,羊流产衣原体灭活疫苗是否确有一定的治疗效果,还应展开进一步研究,从分子的水平对衣原体灭活疫苗的治疗效果进行阐释。