饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼生长及抗氧化能力的影响

曲木　张宝龙　孙榕　翟胜利

摘 要：本试验用规格一致、健康活泼的红草金鱼作为试验对象，着色剂选用的是万寿菊粉、虾青素、加丽素红及辣椒红素，采用四因素三水平L9（34）的正交设计方案设计9种饲料配方，以不添加任何着色剂的饲料作为对照组，红草金鱼初始体重为（54.60±1.58）g，每个处理三个重复，每个重复30尾鱼，养殖56 d后测定其生长及抗氧化能力等相关指标。结果表明：Diet 7处理组增重率及特定生长率最高且饵料系数最低，虾青素对红草金鱼生长的影响要高于其他三种着色剂；测定并比较了红草金鱼血清及组织中GSH、GST、GOT、GPT活性及GOT/GPT比值的变化情况，结果表明Dirt 3及Diet 7处理组可显著促进红草金鱼抗氧化能力。

关键词：红草金鱼；着色剂；生长；抗氧化能力

金鱼作为常见观赏鱼的一种，近几年养殖规模日趋扩大，逐渐走入千家万户，深受广大观赏鱼爱好者的喜爱。近年来，金鱼着色方面的研究很多，然而对其机体健康的关注较少，金鱼体色好坏与鱼体健康程度息息相关，金鱼由于“娇生惯养”，机体抵抗力较锦鲤来说相对较弱。因此，在关注金鱼增色的同时，也应注重其机体健康。本研究的开展，可为金鱼增色饲料的优化提供参考。

一、试验材料与方法

1.试验鱼与养殖管理

本试验所用红草金鱼购自天津市金水族水产养殖有限公司，随后运往天津现代晨辉科技集团有限公司循环水养殖实验室。金鱼运输到实验室后，用消毒剂对鱼体进行消毒，在周转箱中暂养7 d后，从中挑选900尾红草金鱼，随机分为9个处理组和1个对照组，每个处理三个重复，每个重复30尾鱼。养殖周期为56 d，每天投喂两次，日投喂量为体重的3-4%，投喂时间为每天的09：00，15：00。养殖过程中水体溶氧>5 mg/L，PH为7-8，氨氮<0.02 mg/L，亚硝酸盐<0.005 mg/L。每天记录养殖水温、试验鱼死亡条数及投饵量。

2.试验饲料

本试验以万寿菊粉（叶黄素有效含量2%）、虾青素（有效含量10%）、加丽素红（有效含量10%）、辣椒红素（色价150）为着色剂，每种着色剂设置3个梯度，采用四因素三水平L9（34）的正交设计方案，设计试验饲料配方，正交设计结果见表1。以鱼粉6%、豆粕34%、花生粕14%、菜粕6%为主要蛋白源，配置成饲料蛋白含量为32%的配合饲料。

3.指标测定

（1）生长指标测定

在养殖开始及养殖试验结束后，测定红草金鱼体重、体长、全长及体高。生长指标按下列公式计算：

增重率（WGR，%）=100×（终末体重-初始体重）/初始体重；

特定生长率（SGR，%/d）=100×（ln終末体重-ln初始体重）/养殖天数；

饵料系数（FCR）=饲料摄入量干重/（终末体重-初始体重）；

蛋白质效率（PER）=（终末体重-初始体重）/（饲料摄入量干重×饲料粗蛋白质含量）；

肥满度（CF，%）=100×终末体重/终末体长3；

肝体指数（HSI，%）=100×肝胰脏重/终末体重；

存活率（SR，%）=100×终末存活尾数/初始放养尾数。

（2）抗氧化指标测定

养殖56 d后，每个重复取9条鱼，用1 mL注射器从尾静脉抽血，每3条鱼的血液混为一个样本，4℃静置4 h后用离心机以4000转/min离心15 min，取上层澄清液制成血清，保存于-20℃，等待进行血液指标的测定。抽血之后在冰袋上进行解剖，取红草金鱼的肝胰脏和肾脏组织，按组织：0.85%的生理盐水=1：9的比例制成10%匀浆液，用于抗氧化指标的测定。

试验共测定了谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽巯基转移酶（GST）、谷草转氨酶（GOT）、谷丙转氨酶（GPT）4个抗氧化指标，指标测定均按照南京建成生物科技研究所的试剂盒说明书进行测定。

4.数据分析

所有数据用EXCEL 2003软件计算平均值和标准差（Mean±SD）。采用SPSS 18.0进行相关性检验，单因素极差与方差分析来进行试验组间显著性检验，若组间差异显著（P<0.05），则作Duncan氏多重比较分析。

二、试验结果

1.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼生长的影响

结果如表2所示，不同的着色剂对红草金鱼生长性能有显著影响（P<0.05）。在Diet 7饲料组，红草金鱼的增重率、特定生长率及蛋白质效率最高，且显著高于其他饲料组（P<0.05）；饵料系数方面，Diet 7饲料组最低，与Diet 1、Diet 3、Diet 9饲料组差异不显著（P>0.05），但显著高于其他饲料组（P<0.05）。

结果如表3所示，四种着色剂中对红草金鱼增重率及特定生长率影响最大的为虾青素，P值主次顺序为虾青素>加丽素红>辣椒红素>万寿菊粉，其最大值分别为K3、K2、K3及K3，万寿菊粉三个水平之间差异不显著（P>0.05），其他三种着色剂各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼饵料系数影响最大的为虾青素，P值主次顺序为虾青素>加丽素红>万寿菊粉>辣椒红素，其最大值分别为K3、K1、K3及K3，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼蛋白质效率影响最大的为虾青素，P值主次顺序为虾青素>加丽素红>辣椒红素>万寿菊粉，其最大值分别为K2、K1、K3及K3，且各水平间差异显著（P<0.05）。

（2）同一行肩标不同表示差异显著（P<0.05）。同表3、表5、表9。

2.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼抗氧化能力的影响

（1）饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼组织中GSH含量的影响

结果如表4所示，不同的着色剂对红草金鱼GSH含量有显著影响（P<0.05）。血清中，Diet 7、Diet 8处理组与Diet 3差异不显著（P<0.05），而这三组均显著高于其他各组（P>0.05）。肝胰脏中，Diet 3处理组与Diet 2、Diet 7处理组差异不显著（P>0.05），但显著高于其他各组（P<0.05）。肾脏中以Diet 3处理组最高，与Diet 7处理组差异不显著（P>0.05），但显著高于其他各组（P<0.05）。

结果如表5所示，四种着色剂中对红草金鱼血清中GSH含量影响最大的为虾青素，P值主次顺序为辣椒红素>万寿菊粉>加丽素红>虾青素，其最大值分别为K3、K1、K3及K1，四种着色剂各水平间均差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肝胰脏中GSH含量影响最大的为虾青素，P值主次顺序为万寿菊粉>加丽素红>辣椒红素>虾青素，其最大值均为K3，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肾脏中GSH含量影响最大的為万寿菊粉，P值主次顺序为虾青素>辣椒红素>加丽素红>万寿菊粉，其最大值分别为K1、K3、K3及K1，且各水平间差异显著（P<0.05）。

（2）饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼组织中GST含量的影响

结果如表6所示，不同的着色剂对红草金鱼GST活性有显著影响（P<0.05）。血清和肝胰脏中，均以Diet 3处理组最高，且显著高于其他各组（P<0.05）；肾脏中以Diet 3处理组最高，Diet 7和Diet 8处理组与之差异不显著（P>0.05），但均显著高于其他各组（P<0.05）。

结果如表7所示，四种着色剂中对红草金鱼血清中GST活性影响最大的为万寿菊粉，P值主次顺序为加丽素红>辣椒红素>虾青素>万寿菊粉，其最大值分别为K3、K3、K1及K1，万寿菊粉各水平之间差异不显著（P>0.05），其他三种着色剂各水平间均差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肝胰脏中GST活性影响最大的为辣椒红素，P值主次顺序为辣椒红素>虾青素>万寿菊粉>加丽素红，其最大值分别为K3、K1、K3及K3，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肾脏中GST活性影响最大的为虾青素，P值主次顺序为万寿菊粉=虾青素=加丽素红>辣椒红素，其最大值分别为K1、K1、K3及K3，加丽素红各水平之间差异不显著（P>0.05），其他三种着色剂各水平之间差异显著（P<0.05）。

（3）饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼组织中GOT、GPT活性及其比值的影响

结果如表8所示，不同的着色剂对红草金鱼GOT、GPT及其比值活性有显著影响（P<0.05）。血清中，GOT活性在Diet 3处理组最高，与Diet 2处理组差异不显著（P>0.05），但显著高于其他各组（P<0.05）；肝胰脏中GOT活性在Diet 3处理组达到最大，且显著高于其他各组（P<0.05）。血清和肝胰脏中GPT活性均在Diet 3处理组最高，且显著高于其他各组（P<0.05）。就GOT和GPT的比值来说，血清中其比值在Diet 3处理组最低，显著低于Diet 8及对照组（P<0.05），肝胰脏中Diet 7处理组显著降低（P<0.05），其他各组差异不显著（P>0.05）。

结果如表9所示，四种着色剂中对红草金鱼血清中GOT活性影响最大的为万寿菊粉，P值主次顺序为万寿菊粉>虾青素=辣椒红素>加丽素红，其最大值分别为K3、K2、K3及K2，四种着色剂各水平间均差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肝胰脏中GOT活性影响最大的为加丽素红，P值主次顺序为虾青素=加丽素红=辣椒红素>万寿菊粉，其最大值分别为K1、K3、K3及K3，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼血清中GPT活性影响最大的为加丽素红，P值主次顺序为加丽素红>万寿菊粉=辣椒红素>虾青素，其最大值分别为K3、K3、K3及K1，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼肝胰脏中GPT活性影响最大的为加丽素红，P值主次顺序为加丽素红>辣椒红素>万寿菊粉>虾青素，其最大值分别为K3、K3、K3及K1，且各水平间差异显著（P<0.05）；对红草金鱼血清中GOT/GPT活性影响最大的为虾青素，P值主次顺序为虾青素>加丽素红>辣椒红素>万寿菊粉，其最大值分别为K2、K1、K1及K2，虾青素各水平间差异显著（P<0.05），其他三种着色剂各水平之间差异不显著（P>0.05）；对红草金鱼肝胰脏中GOT/GPT活性影响最大的为虾青素，P值主次顺序为虾青素>加丽素红>辣椒红素>万寿菊粉，其最大值分别为K1、K3、K1及K2，虾青素、加丽素红各水平间差异显著（P<0.05），其他两种着色剂各水平之间差异不显著（P>0.05）；

三、讨论

1.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼生长的影响

着色剂所含类胡萝卜素等营养成分丰富，在水产养殖中应用广泛，着色剂的使用不仅能提高水产动物的体色也可显著提高养殖动物的生长率。刘春东等研究发现，在鲤鱼饲料中添加部分菊花粉麸皮，可以显著促进鲤鱼的生长。王鲁波等研究发现，黄颡鱼饲料的最适叶黄素添加量为700 mg/kg。邺城远、黄辨非等认为红辣椒粉有提高养殖对象食欲、助消化、促生长等作用[3-4]。孙刘娟等用不同虾青素含量的饲料饲喂血鹦鹉，得到了饲料中虾青素含量为2%-3%时，血鹦鹉增重有所提高，但是持续效果不强的结论，同样的研究结果也出现在牟文燕等的试验中。本试验用添加不同水平的万寿菊粉、虾青素、加丽素红及辣椒红素饲喂红草金鱼，对生长指标进行分析后发现，当万寿菊粉：虾青素：加丽素红：辣椒红素为0.25%：0.06%：0.05%：0.03%时，红草金鱼生长性能显著提高。其中，虾青素为红草金鱼生长性能的主要影响因素。

2.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼抗氧化能力的影响

GSH在生物体内发挥着重要的生理功能，诸如：是胞内最丰富的抗氧化剂，保护DNA、蛋白质和其他生物分子抵抗氧化损伤，通过GST完成解毒功能等。GOT是医学临床上检查肝功能的重要指标，GPT能够产生重要的代谢中间产物，在禁食和剧烈运动时，可作用于丙氨酸，促进葡萄糖的生成[10]。本试验测定了GSH、GST、GOT、GPT活力，并且计算了GOT和GPT的比值，比较发现Diet 3处理组（万寿菊粉1.00%、虾青素0.01%、加丽素红0.12%、辣椒红素0.03%）对提高GSH含量、提升GST活力作用显著，且显著降低了GOT/GPT比值，对红草金鱼的肝脏来说起到了一定的保护作用，Diet 7处理组（万寿菊粉0.25%、虾青素0.06%、加丽素红0.05%、辣椒红素0.03%）效果次之。孙学亮等研究了饲料中添加叶黄素对血鹦鹉鱼GOT、GPT活性的影响，发现，0.3%叶黄素与0.1%维生素E搭配可起到保护鹦鹉鱼肝胰脏不受损的目的[11]。Nakano[12]用添加红法夫酵母的饲料饲喂虹鳟，结果表明，当饲料中法夫酵母添加水平为10.87 g/kg时，虹鳟血清中GOT、GPT含量得到显著降低。本试验结果与以上实验结果相似，但是虾青素添加水平不同，这跟养殖对象不同、着色剂搭配添加物不同有很大的关系。着色剂对GSH、GST的影响现未见报道，但毋庸置疑，着色剂对红草金鱼的抗氧化能力是有一定的提升作用的。不同组织中影响最大的着色剂种类有所差别，不同着色剂在鱼体中的吸收部位不同，作用效果也产有所差距。

四、结语

本试验对红草金鱼生长及抗氧化相关指标进行了测定，综合结果看，在本试验条件下，红草金鱼最适的着色剂搭配比例有两种，分别是万寿菊粉：虾青素：加丽素红：辣椒红素为1.00%：0.01%：0.12%：0.03%或萬寿菊粉：虾青素：加丽素红：辣椒红素为0.25%：0.06%：0.05%：0.03%。

参考文献：

[1] 刘春东.菊花粉在水产养殖中应用的效果[J].动物科学与动物医学.2002，02：62.

[2] 王鲁波.天然叶黄素对黄颡鱼生长性能、皮肤着色及抗氧化功能的影响及其在鱼体组织中代谢规律的研究[D]. 广州，饲料研究所研究生院，2012.

[3] 叶成远，张惠云.增色剂的应用和研究进展[J].饲料博览，1999，11（2）：29-30.

[4] 黄辨非，冯端林，罗静波，等.饲料中添加红辣椒粉对红草金鱼体色及生长的影响[J].水利渔业， 2008， 28（4）：52-54.

[5] 孙刘娟，吴李芸，白东清.虾青素对血鹦鹉体色、生长和非特异性免疫指标的影响[J].北方农业学报，2016，44（1）：91-95.

[6] 牟文燕，韦敏霞，高妍，等.虾青素对血鹦鹉生长、体形、体色及抗氧化能力的影响[J].饲料工业， 2014（3）： 73-84.

[7] 张宝龙，曲木，窦艳君，等.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼生长、体色及免疫力的影响[J].饲料研究，2017（13）：36-44.

[8] 张宝龙，曲木，张赛赛，等.饲料中不同着色剂搭配对红草金鱼生长及血液指标的影响[J].科技资讯，2017，15（09）：130-132+134.

[9] 王玮玮，唐亮 周文龙，等，谷胱甘肽生物合成及代谢相关酶的研究进展[J].中国生物工程杂志， 2014，34（7）：89-95.

[10] Cuvier-Peres A，Kestemont P. Development of some digesitve enzymes in Eurasian perch larvae Perca fluviatilis[J]. Fish Physiology and Biochemistry， 2002， 24（3）： 279-285.

[11] 孙学亮，季延滨，白东清，等，叶黄素混合物对血鹦鹉鱼生长、体色和生理机能的影响[J].吉林农业大学学报，2016，38（6）：743-749.

[12] Toshiki N， Tomoaki K， Minoru S， et al.Effect of astaxanth in rich red yeast （Phaffia rhodozyma） on oxidative stress in rainbow trout[J]. Biochimica et Biophysica Acta， 1999（1426）：119-125.

作者简介：曲木（1990—），女，山东海阳人，初级工程师，硕士研究生，天津现代晨辉科技集团有限公司研发中心研发员，主要从事水产动物营养与饲料的研究。

通讯作者：张宝龙，男，天津人，硕士研究生，初级工程师，天津现代晨辉科技集团有限公司研发中心副主任，主要从事水产动物营养与饲料方面的研究。

基金项目：2016年宝坻区农业科技重大项目“金鱼新型增色环保饲料的研发与应用”；2017年宝坻区农业科技重大项目“中国彩鲤、精品金鱼养殖技术的研究与应用”；第二批天津市人才发展特殊支持计划——高层次创新创业团队项目资助。