回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经功能修复研究

宁夏医科大学，宁夏 银川 750004

创伤性脊髓损伤在临床上是一种比较严重的疾病，现代医学没有特别有效的治疗方法，只停留在对症治疗阶段。回医烙灸疗法是治疗创伤性脊髓损伤的一种新方法，在临床上已经取得一定疗效。本实验采用脊髓损伤运动功能改良Tarlov评分法及皮层体感诱发电位CSEP检测的方法，取大鼠脊髓组织，电镜观察脊髓超微结构进行评分。通过观察脊髓损伤大鼠行为、神经电生理传导及脊髓超微结构进行评分，旨在探讨回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经修复功能的修复研究。

1 材料和方法

1.1 材料 实验在宁夏医科大学实验动物中心完成，选取清洁级SD大鼠110只(宁夏医科大学实验动物中心提供，合格证号SYXK(宁)2015-0001，12周龄，体质量230～305g，雄性)。

1.2 方法

1.2.1 分组 将110只大鼠随机数字表法分为5组：假手术组、 模型组、西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组，每组22只，其中50只于第7、14、28、42和56 天采用脊髓损伤运动功能改良Tarlov评分法及皮层体感诱发电位(CSEP)检测。另外60只于第1、7、14和28 天取损伤脊髓组织，电镜观察脊髓超微结构进行评分。假手术组，只做椎板切除，不做脊髓损伤；模型组，脊髓Allen’s打击损伤后灌胃给予一定量生理盐水，持续56 d；醋酸泼尼松治疗组(西药组)，脊髓Allen’s打击损伤后0.5 h内首次按20 mg/kg，随后按 4.6 mg/kg/h腹腔注射给药，3 h连续给药，之后按7.2 mg/kg/d，连续给药7 d；2 h烙灸组，脊髓Allen’s打击损伤后2 h采用烙灸治疗，烙灸隔日1次，每次5 min，持续28 d；6 h烙灸组，脊髓Allen’s打击损伤后6 h采用烙灸治疗，烙灸隔日1次，持续28 d。各组于术后1 h经皮下注射青霉素，每日1次，连续7 d。各组均给予一定量生理盐水，持续56 d。

1.2.2 模型制备 改良的脊髓损伤Allen’s[1]造模。操作：大鼠麻醉、消毒，以T10为中心，沿脊柱方向切约3 cm的切口，切开皮肤、肌肉，分离并暴露棘突，将T10椎板全部切除，保留硬脊膜。采用自制的 Allen’s 改良式打击装置(将15 g打击棒套入钢管内，卡住打击高度，松开打击棒即可下落) ，高度为5 cm，致伤量为75 g·cm-1，造成T10～T11 节段急性脊髓损伤(此致伤量可造成大鼠的不完全性截瘫，属中等程度损伤)。动物出现摆尾反射，双下肢及躯体回缩扑动后，见双下肢不完全瘫痪，标志造模成功。

1.2.3 治疗方法 固定大鼠，回医特制烙灸器放在损伤大鼠两侧夹脊穴(在距损伤上下端两个椎体的棘突间隙旁开距中线3～4 mm处取穴)。回医特制烙灸器利用自制和脊柱形状相似铁质灸具制成，在灸槽内放有艾绒，点燃艾绒，利用铁质灸具热传导，使局部发红，排出异常体液。部位参照《实验针灸学》(上海科学技术出版社)烙灸组于造模后2 h和6 h分别开始，隔日同一时间重复治疗1次，每次灸5 min，持续28 d，并防止时间过长造成皮肤损伤。

1.2.4 改良Tarlov 评分法[2]评价后肢神经功能 0分：完全瘫痪，针刺时下肢无反应；1分:后肢完全瘫痪，针刺时下肢无反应，但肢体不能活动；2分:后肢肢体可轻微活动，但不能站立；3分: 后肢肢体可水平活动，但后肢无法爬行；4分：后肢肢体可爬行数步，但不稳定；5分：后肢能缓慢爬行走,但不灵活；6分： 后肢能正常行走。所有大鼠术前评分均正常，分别于7、14、28、42、56 d评分，共5次，所有观察均在19:00于开放空间进行，观察时间为10 min。

1.2.5 大鼠皮层体感诱发电位(CSEP)检测 采用诱发电位仪检测皮层体感诱发电位，分别于脊髓损伤后7、14、28、42、56 d对下肢进行观察。大鼠腹腔注射麻醉，刺激电极插入下肢后部，阴阳电极相距1 cm，周围以温盐水湿润。记录电极置于大鼠对侧感觉皮质表面，参考电极插入前额皮下。电位仪给予直流方波电脉冲刺激，强度为60 mA，波宽0.3 ms，频率2.1 Hz，叠加300～400次，分析时间100 ms，观察P1波的反应潜伏期。

1.2.6 电镜观察 每组又按不同时间点分别在1、7、14、28 d各取3只，共计60只，处死大鼠，取脊髓损伤部位上下1 cm的脊髓组织，电镜观察脊髓超微结构进行评分。采用Kaptanoglu等[3-4]创立的脊髓损伤的超微结构评分法。评分标准细胞质、轴突、线粒体根据水肿程度分0～3分；细胞核根据染色质损伤程度分0～3分；轴突髓鞘根据损伤情况分0～3分。 评定各项分值相加 ，计算各组中胞质内水肿、细胞核损伤、轴突变性、髓鞘分解、和线粒体损伤的平均评分及标准误，数值越高，则脊髓损伤程度越严重。数值的大小与脊髓损伤的严重程度成正比。

2 结果

2.1 脊髓损伤大鼠运动功能Tarlov评分 实验开始前5组大鼠评分均正常。除假手术组，其它各组大鼠经改良Allen’s打击后，双后肢不完全瘫痪，第7、14、28、42和56 天 Tarlov评分均小于假手术组 (P<0.05)。损伤7 d评分：除假手术组，其它4组均小于3分，4组间差异无统计学意义(P﹥0.05) ；损伤14 d评分：西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组评分均大于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)；损伤28 d评分：经两两比较Tarlov评分排序为2 h烙灸组和6 h烙灸组>西药组>模型组(P<0.05)，2 h烙灸组和6 h烙灸组之间差异无统计学意义(P>0.05)；损伤42 d评分：西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组Tarlov评分均大于模型组(P<0.05)。西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)；损伤56 d评分：西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组Tarlov评分均大于模型组。西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组之间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后运动功能Tarlov评分的影响 (分，

注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.05；与西药组比较，cP<0.05。

2.2 脊髓损伤大鼠CSEP检测 正常CSEP潜伏期是(16.45±0.61)ms,波形为“W”形。除假手术组，其它各组大鼠经改良Allen’s打击后，双后肢不完全瘫痪，第7、14、28、42、56 天CSEP潜伏期均大于假手术组 (P<0.05)。损伤7 d和14 d时，4组之间CSEP潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。损伤28 d时，经两两比较，CSEP潜伏期排序为2 h烙灸组和6 h烙灸组<西药组<模型组(P<0.05)，2 h烙灸组和6 h烙灸组之间差异无统计学意义(P>0.05)。损伤42 d时，经两两比较各组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。CSEP潜伏期排序为2 h烙灸组<6 h烙灸组<西药组<模型组。损伤56 d时，经两两比较CSEP潜伏期排序为2 h烙灸组<6 h烙灸组<模型组和西药组(P<0.05)，模型组和西药组之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后CSEP潜伏期变化的影响

注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.05；与西药组比较，cP<0.05；与2 h烙灸组比较，dP<0.05。

2.3 电镜观察脊髓损伤的超微结构评分 采用Kaptanoglu等创立的脊髓损伤的超微结构评分法。评分结果显示除假手术组，其它各组各时间点评分均大于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)。损伤1 d评分，除假手术组，其它各组评分明显升高，差异无统计学意义(P﹥0.05) ；7 d评分：西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组均小于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组间差异无统计学意义(P>0.05)；14 d评分：西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组的评分要小于模型组。西药组、2 h烙灸组、6 h烙灸组之间差异无统计学意义(P>0.05)；28 d评分：评分排序为2 h烙灸组<6 h烙灸组<西药组<模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 脊髓损伤后各组各时间点的超微结构评分 (分，

注：与假手术组比较，aP<0.05；与模型组比较，bP<0.05；与西药组比较，cP<0.05；与2 h烙灸组比较，dP<0.05。

3 讨论

脊髓损伤的程度和临床表现是由原发性损伤的部位和性质决定的，中医学病因病机为瘀血停滞导致“腰痛”、“痿证”、“癃闭”等病证范畴。在脊髓中中枢神经结构的独特，造成了脊髓损伤后修复的过程相当困难，因此让损伤的脑和脊髓获得再生，成为许多神经科学家研究的目标[5]。现代医学的研究大多放在神经营养因子及去除神经生长抑制因子方面。实验研究显示，由于神经营养因子的神经系统老化、创伤、神经退行性变等情况下能调节神经元的可塑性和神经再生，它们具有支持运动神经元存活、促进感觉和运动神经元轴突生长的作用[6-7]。现在激素类药物作为脊髓损伤的常用药物，研究显示激素类药物对近期脊髓损伤功能恢复的具有显著疗效，对远期的功能恢复效果并不十分显著，而且长期运用激素类药物副作用比较多[8]。通过前期临床研究发现回医烙灸疗法对脊髓损伤临床效果十分明显，且安全稳定，副作用较小，它是治疗脊髓损伤新的手段[9]。

Tarlov、CSEP是一个相对定量、客观的检测技术，能够对脊髓损伤作出功能性诊断及正确的定量分析。改良Tarlov评分主要对大鼠运动功能进行评价，而CSEP根据潜伏期变化的程度判断脊髓损伤的严重程度，潜伏期越接近正常值疗效越显著。Tarlov、CSEP统计结果显示，回医烙灸疗法疗效明显优于西药组疗效，尤其28 d最显著。在42 d和56 d时，2 h烙灸组、6 h烙灸组和西药组之间没有差异(P>0.05)，由于烙灸疗法只治疗28 d，后续没有采取治疗，后续的康复功能与西药组相比差异无统计学意义(P>0.05)。以上实验发现通过28 d烙灸治疗，脊髓损伤后的神经功能恢复速度明显好于西药组及模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。烙灸治疗28 d后，一旦结束烙灸治疗神经功能恢复的速度明显降低，与其它各组比较无统计学差异(P>0.05)，证实回医烙灸疗法对脊髓损伤后的神经功能恢复确有促进作用。每个组又按1、7、14、28 d不同时间点分别取3只，共计60只，做电镜观察损伤脊髓超微进行评分。评分结果显示2 h烙灸组、6 h烙灸组中细胞质水肿、细胞核染色质损伤、轴突髓鞘、轴突及线粒体水肿程度恢复情况好于西药组。结果又进一步证实了回医烙灸治疗脊髓损伤疗效确切。

回医烙灸疗法是灸法治疗方式的一种，它能够结合腧穴组织特点和经络功能，利用药物、器械加热所产生的火热刺激，通调气血，直接或间接地引导自然中存在“三子”(回医认为构成生命的三种本源)元素来激发人体内的禀性体液活动机能，通过皮肤和血管感受器的反射途径传到中枢神经系统，通过兴奋和抑制的调节作用，使之趋于相对平衡。在温热性刺激效应的作用下，导致局部血管扩张，促进体液循环，加强新陈代谢，改变局部组织营养状态，增强血管壁通透性及白细胞吞噬能力，增强局部耐受性及机体抵抗力[10]。而脊髓损伤后期其元阳不振，气血不调，经络淤阻造成肢体活动不利。治疗正需要回医烙灸强刺激手段，刺激周围神经的敏感度，加强其与大脑中枢神经的联系。这种独具特色的灸法，是祖国医学“化脓灸”的发展与深化，它较“化脓灸”疗法操作更加精准，医者对施灸的火力与程度能够进行较好控制，且对皮肤的损伤程度较轻，对元气的振奋与恢复较为迅速[11]。回医在长期临床使用中证实，烙灸疗法对于经络、筋经的不畅，骨与关节损伤性疾病有不可替代的独特疗效。本疗法在长期的传承和实践中，积累了丰富的临床经验，治疗效果相对可靠，对医疗设备设施的依赖小，技术操作便于掌握，适合在基层推广。

总之，本实验研究表明回医烙灸对脊髓损伤后的神经功能恢复确有促进作用，从而对神经细胞起到保护作用，并减少髓鞘的脱失，其为脊髓损伤后神经的修复提供理论和实践基础，丰富了脊髓损伤的新的治疗手段，更为脊髓损伤的治疗开辟新的途径、新的方法，从而有利于提升脊髓损伤患者的康复治疗水平。

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