不同种大黄中土大黄苷检查方法的研究

江苏省江阴市人民医院药学部，江苏 江阴 214400

大黄为蓼科大黄属生植物药用大黄、掌叶大黄及唐古特大黄的合称，作为中药材具有较好的泻下、凉血解毒功效。近年来，大黄的药材资源无法满足日益增长的市场需求，使得市场商品中出现使用同属不同种其他植物的根部冒充大黄的现象，这类伪品大黄来源广、价格低廉，但药物副作用大，甚至会引发不良反应。一般情况下，伪品大黄中均含土大黄苷，其结构为二苯乙烯苷类成分，但无泻下作用或泻下作用极其微弱。1990年版中国药典将土大黄苷收录在大黄检查项，检测方法为纸层析色谱法，但其不足在于未进行薄层色谱斑点的分离；2000年版药典将三黄片收录在土大黄苷检查项，但缺少土大黄苷对照品进行薄层随行对照；实验中发现，现有检测方法弊端较大、专属性不够强，使得结果判定极为不准确；建立高质量的不同种大黄中土大黄苷含量的检测方法，为相关成药提供质量监控依据十分重要。随着药物的监管力度也逐渐加大，陆续颁发了多种土大黄苷检查项的中成药检验方法。目前常用的方法为薄层色谱法，并且必要时还可采用高效液相色谱法及液质联合法进行进一步验证[1-2]。本实验研究不同种大黄中土大黄苷含量的检测，以期提供专属性更强、简单易行、准确的薄层色谱方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Aglient1100液相色谱仪(美国安捷伦有限公司)，SartoriusBS21S电子式天平(德国赛多利斯公司)，UV-2550高灵敏分光光度计(日本Shimadzu公司)、DAD检测器(美国安捷伦有限公司)。

1.2 材料 正品大黄药材(产自四川，购自北京白塔寺药店)、河套大黄、华北大黄均由中国药品生物制品检定所标本馆鉴定，土大黄苷对照品购于中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱C18柱(AglientTC-C18,4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相乙腈-水(25∶75)，柱温30.0 ℃，检测波长323 nm，流速0.80 mL/min。紫外检测在190～400 nm波长处检测。

2.2 试液制备 在100 mL瓶内加4.30 mg土大黄苷对照品，加适量甲醇溶液溶解、稀释，摇匀，以此作为对照品溶液。各取0.5 mg华北大黄粉及河套大黄粉于不同量瓶中，摇匀，以此为供试液。将5.0 g药用大黄置于超声处理后滤过，取5 mL续滤液与瓶内，加适量甲醇溶液溶解、稀释，摇匀，以此为药用大黄供试液。

取两份药用大黄细粉各0.5 g，第1份加10 mL甲醇溶液，静置常温后离心，取上层清液，得大黄供试液；第2份药用大黄细粉中加入土大黄苷对照品溶液，同第1份操作，得药用大黄+土大黄苷对照品的供试液。取上述两溶液各10.0 μL，用液相色谱仪进行检测，记录相关色谱图。

2.3 特征性色谱图 土大黄苷色谱、药用大黄色谱及药用大黄+土大黄苷色谱分别如图1所示。对比图1和图2，发现土大黄苷色谱中出现特征性色谱峰，并且在同一时间段药用大黄色谱中没有检出相对应的色谱峰，说明药用大黄中不含土大黄苷。

2.4 液相色谱测定 药用大黄中未出现土大黄苷特征性色谱峰，而在河套大黄和华北大黄的检测中发现了土大黄苷色谱峰，这显示出河套大黄和华北大黄并非正品大黄。如图2所示。用DAD检测器对相应色谱进行光谱扫描，得到色谱峰相同的扫描图。如图3所示。

3 讨论

大黄在我国古代文献中就有记载，主要做药用，在秋季最后或次年春季初挖出，去细根，脱皮，绳穿干燥，其清热、解毒、凉血、化痰等功效显著。我国上等大黄常产于四川西部和甘肃地区。通常情况下，正品大黄不含土大黄苷。近年来，随着中医药事业蓬勃发展，药类品种也逐渐增多，而且由于许多人为因素，野生大黄越来越少，无法满足逐渐增长的市场需求，导致河套大黄或华北大黄等伪品大黄的出现，土大黄苷是伪品大黄中的特征性成分，泻下作用极其微弱。本次试验主要对同属不同种大黄中土大黄苷的检测方法进行研究，以确保药品的疗效，保证用药安全。

高效液相色谱法(HPLC)作为色谱法的重要分支，在近几年得到迅速发展，由于其有高灵敏度、高效率、简单、快捷、准确等优势，被广泛应用于医学临床研究中。高效液相色谱法以高压输液为系统，将液体作为流动相，将不同的比例的缓冲液等流动相装入特定的色谱柱柱内分离各成分后进入检测器，从而实现式样分析。本次研究中就采取HPLC法，得到土大黄苷色谱图(图1)、药用大黄色谱图(图2)及药用大黄+土大黄苷色谱图(图3)。由图1可见在10.0～11.0 min间出现了很明显的色谱峰；图2正品大黄色谱图，发现在2.5 min左右开始至5 min左右结束出现了两组明显的色谱峰，而5 min以后色谱波动较为平缓，并且在10.0～11.0 min时没有发现图1中明显的色谱峰；且图3的色谱变化包含图1和图2中所有明显的色谱峰，说明药用大黄中不含土大黄苷成分。为了得到更为精确的实验结果，通过DAD检测器对二色谱峰进行光谱扫描，结果得到一致的光谱扫描图，这显示出二色谱峰的保留时间一致。通过观察对比三张色谱图，可以直观地发现药用大黄中不含有土大黄苷，也证明这种方法在检测同属不同种大黄及含大黄制剂中土大黄苷方便、准确、直观的优势[6-9]。

综上所述，本次研究采取HPLC法和TLC法鉴别同属不同种大黄及含大黄制剂中土大黄苷的含量，得到较为客观的实验结果；该方法有操作简单、高准确度、高灵敏度等优势，值得临床推广。

[1]葛建华,刘训红,许虎，等.基于化学分析的不同品种大黄区分研究[J].中国中药杂志,2015,40(12):2309-2313.

[2]严华,魏锋,肖新月,等. 同属不同种大黄及含大黄制剂中土大黄苷检查方法的研究[J]. 药物分析杂志，2010(9) ：201-203.

[3]蒋永海,朱辉. 乙肝解毒胶囊中非法成分土大黄苷的检测[J]. 华西药学杂志，2011(4):397.

[4]马珍琼,龚云麒,屈云莲，等.脱氧土大黄苷溶解度及油水分配系数测定[J].中国民族民间医药,2016,25(23):39-42.

[5]尚磊.薄层色谱法鉴别大黄饮片真伪[J].食品与药品,2014,16(3):201-203.

[6]孙爱萍,张西如,谷菲菲. LC-MS/MS方法测定中成药麻仁丸中添加伪品大黄的研究[J]. 中成药，2011，33(2):357-359.

[7]刘红梅. 同属不同种大黄土大黄苷含量测定[J]. 实用中医内科杂志,2017,31(1):65-67.

[8]朱奇,叶水利,程建彤,等. 中药制剂中土大黄苷的检识[J]. 湖北中医杂志，2011，33(1):73-75.

[9]李霞. 四黄泻火片、麻仁丸中非法添加土大黄苷检测方法的建立[J]. 中国当代医药，2010,17(34):52-53.

[10]顾婷. 探讨制剂大黄和山大黄的鉴别分析[J]. 大家健康(学术版)，2016,10(20):127-128.

[11] 邬博,刘彦晶,连丽. 大黄的药理作用研究进展[J]. 中国中医药现代远程教育，2015,13(20):152-154.

[12] 李新. 大黄的性能和临床应用[J]. 临床合理用药杂志，2015(13):67-68.