TP-ELISA与TPPA两种方法在孕妇梅毒螺旋体筛查中的对比

聂映 由志钰 黄亚梅

【摘要】目的：对TP-ELISA（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验）与TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集实验）两种方法在孕妇梅毒螺旋体筛查中的应用比较，以优化梅毒血清学筛查方案。方法：分别选取86例TP-ELISA结果阳性或弱阳性（S/co值≥1）以及8例TP-ELISA结果阴性（S/CO值<1）的孕妇血标本，采用TPPA进行检测，对两种方法所得的检测结果进行比较分析。结果：对于TP-ELISA结果阴性（S/CO值<1）的8例标本，TPPA检测结果为阴性;TP-ELISA结果弱阳性（1≤S/CO值<4）的6例标本，TPPA检测结果全为阴性;而TP-ELISA结果阳性（S/CO值≥4）的80例标本，TPPA检测结果阳性率为98.75%。结论：利用TP-ELISA可实现大批量样本的自动化处理，但TP-ELISA阳性结果尤其是弱阳性结果需要联合TPPA确认，并进行追踪复查以获得更为准确的判断。

【关键词】TP-ELISA; TPPA;梅毒螺旋体筛查

梅毒是一种由梅毒螺旋体感染而引起的慢性性传播性疾病，具有高度传染性，属于医院检验科传染病检测的常规项目。梅毒感染机体临床表现复杂，可引起全身各组织和器官产生慢性系统性病变，严重危害机体健康。孕妇感染梅毒，可经由胎盘传染给胎儿，引发宫内感染进而导致胎儿流产、早产或导致成活胎儿患有先天梅毒。因此，出于优生优育及传染病防控的目的，对孕妇进行梅毒筛查是至关重要的[1]。目前，针对孕妇梅毒筛查，常采用TP-ELISA（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验）及TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集实验）两种梅毒抗原血清学方法进行检测。但由于两种方法在灵敏性及特异性等多个方面存在差异，可导致梅毒检出率不一致，也容易导致临床医生难于做出正确判断[2]。为此，本研究拟对TP-ELISA与TPPA两种方法进行比较分析，以探讨孕妇梅毒血清学筛查方案。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择近来于我院做梅毒筛查的孕妇94例，其中86例TP-ELISA结果阳性或弱阳性（S/CO值>1），8例TP-ELISA结果阴性（S/CO值<1）。对以上标本进行TPPA检测。

1.2 材料和方法

1.2.1 材料

材料及试剂TP-ELISA操作采用烟台烟台艾德康生物科技有限公司全自动酶免仪;TP-ELISA及TPPA检测试剂盒分别购自北京万泰生物药业股份有限公司和珠海丽珠试剂公司。

1.2.2 检测方法

（1） TP-ELISA：按照烟台烟台艾德康生物科技有限公司全自动酶免仪使用说明书，设置好各项参数并准备好血清标本及相应试剂，仪器自动完成测试操作及读数。（2） TPPA：首先，将100μ1生理盐水加入U型板第1个孔，后面7孔每孔加入25μl生理盐水;然后，第1孔加入25μl待测血清，混匀后取出25μl加入第2孔，稀释至第8个孔，弃掉25μl稀释血清;最后，在第3个孔加入25μl未致敏粒子，第4至8孔均加入25μl致敏粒子，混匀后室温静置2h，结果判读参照文献[3]，以血清稀释度1：80作为阳性最低稀释度报告标准。

2 结果

2.1 TP-ELISA和TPPA两种检测结果比较

在所检的94例孕妇血标本中，8例TP-ELISA结果阴性的标本，TPPA检测结果同样为阴性，符合率为100%;而86例TP-ELISA结果阳性（80例）或弱阳性标本（6例），TPPA检测结果为阳性的标本数为79例，符合率为91.86%（见表1）。进一步的分析发现，在TP-ELISA結果为弱阳性值（1≤S/CO值<4）的6例血标本检测中，TPPA结果均为阴性;而TP-ELISA结果阳性（S/CO值>4）的80例标本，TPPA检测结果阳性标本数为79例，未检出的一例标本为TP-ELISA结果S/CO值介于4～5之间，阳性检测结果符合率为98.75%。

2.2 TP-ELISA S/CO值与TPPA抗体效价关系分析

为了进一步探讨TP-ELISA与TPPA检测结果的关系，我们对TP-ELISA S/CO值与其相对应的TPPA抗体效价进行深入分析。如图l所示，在TP-ELISA S/CO值大于4，TPPA抗体效价总体趋势上是随着S/CO值上升而上升的，比如TPPA检测效价为1280对应的TP-ELISA检测值绝大多数分布在S/CO≥20。但我们也同时注意到，这两种检测方法的检测结果并不是成线性关系的，这值得广大临床检验工作者注意。

3 讨论

研究表明，近年来，随着社会经济快速发展，我国梅毒发病率逐年上升，而先天性梅毒感染上升趋势明显，防控形势严峻H。机体在感染梅毒螺旋体约两周后即可产生特异性抗体，主要包括IgG和IgM两种特异性抗体，前者为治愈后也终生存在，而后者在机体存在时间较短[5]。通过检测受检者血清中的梅毒特异性抗体，即可对梅毒进行实验室筛查。实验室梅毒血清学特异性抗体检测方法主要是TP-ELISA和TPPA两种方法，具有很高的特异性和敏感性。

TP-ELISA是采用酶联免疫吸附法原理，在微孔板上包被梅毒螺旋体抗原，以双抗原夹心法同时检测IgM和IgG两种特异性抗体，阳性结果S/CO值与血清中特异性抗体浓度成正相关。TP-ELISA检测法操作简单、测试费低廉且易于自动化，适用于医院大规模梅毒抗体筛查，是当前最广泛使用的梅毒特异性抗体检测方法，也被作为实验室梅毒特异性抗体检测的首选方法[6]。但研究发现，利用TP-ELISA检测法进行梅毒筛查，由于受检者患有自身免疫疾病等原因可导致假阳性结果的产生，也可由于钩状效应的原因导致假阴性结果的产生[7-8]。TPPA作为国际公认的梅毒确诊的首选检测方法，是利用明胶颗粒包裹纯化后的梅毒螺旋体毒株制成抗原，检测受检者血清中梅毒特异性抗体及效价，特异性及灵敏度均较好。然而，TPPA检测法所需试剂的成本高，检测费相对于TP-ELISA也较高。与此同时，TPPA法需要检验人员对血清标本梯度稀释，不能自动化操作，结果判读也依赖于肉眼，结果准确性也依赖于检验人员的工作经验，因而不适合于实验室大批量的梅毒筛查工作。

在本项研究中，TP-ELISA检测结果阴性的8例标本，TPPA检测结果也均为阴性。而对于TP-ELISA检测结果弱阳性（1 ≤S/CO值<4）的6例标本，TPPA结果为阴性，说明TPPA特异性较TP-ELISA更好。值得注意的是，在TP-ELISA检测结果阳性的80例标本中，仅有一例S/CO值介于4～5的标本，TPPA检测结果为阴性，这说明随着S/CO值得增大，TPPA与TP-ELISA的阳性检测符合率就越高，所以TP-ELISA结果阳性的标本，需要利用TPPA法进一步确认。

综上所述，TP-ELISA适用于孕妇梅毒的大批量自动化筛查，但阳性结果需要通过TPPA法进一步确认，既能节约时间和医疗费用成本，也能减少误诊。

（通讯作者：黄亚梅）

参考文献

[1]丁静，王泉，王庆国.RPR，TP-ELISA，TPPA试验在梅毒诊断中的应用评价[J].国际检验医学杂志，2016， 37 （07）： 997-998.

[2]廖远泉，梅毒的实验室诊断技术进展[J].热带病与寄生虫学，2016，14 （04）： 245-250.

[3]赵娜，刘瑞霞，李鲁平等，捕获法ELISA检测TP-IgM抗体在各期梅毒诊断及疗效评估中的应用[J].中国病原生物学杂志，2015，10 （12）：1104-1107.

[4]程娟，段红岩，李安信，梅毒流行病学和诊疗现状分析[J].传染病信息，2012 （01）：58-60.

[5]叶霞，徐清芳，魏靖等.TP-ELISA，TPPA，RPR联合检测在梅毒诊断中的应用价值[J].热带医学杂志，2017 （05）： 639-642.

[6]吴立春，代黄梅，谷仕艳.3种梅毒抗体检测方法在梅毒诊断中的应用分析[J].国际检验医学杂志，2017， 38 （08）：1053-1055.

[7]胡利清，周玉球，梅毒螺旋体抗体两种检测方法的对比分析[J].中国实用医药，2017，12 （13）：50一51.

[8]袁晓华，胡惠萍，关于梅毒检测程序的探讨[J].国际检验医学杂志，2012， 33 （24）： 3065-3067.