口腔癌患者手术前后细胞免疫功能的变化及临床意义

李天客 包 阳 陈 中 张素欣 尹 克

(河北医科大学第四医院口腔科，河北 石家庄 050071)

既往研究显示〔1〕，在肿瘤患者发病初期、中期或晚期，机体免疫功能均出现不同程度的下降。口腔癌患者病情的进展与机体的免疫系统存在密切关系，机体免疫系统能够识别癌细胞表面抗原，激活免疫效应细胞，释放相关效应分子发挥免疫应答作用，攻击并杀伤癌细胞〔2〕。Mehta等〔3〕研究发现，T细胞中CD4+CD25+调节性T细胞是具有降低肿瘤免疫抑制反应的亚群，CD4+CD25+调节性T细胞功能异常与人类某些疾病的发生、发展存在紧密关系。随着分子生物学技术及免疫学的不断发展，多项研究证实〔4，5〕，在乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、肺癌及消化道肿瘤患者外周血T淋巴细胞表型及相关辅助性T淋巴细胞因子均发生相应变化，且能够反映肿瘤复发或转移的危险。本研究旨在探讨口腔癌患者手术前后细胞免疫功能变化及临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2013年9月至2016年1月收治的口腔癌患者为研究对象，纳入标准：①被确诊为口腔癌；②在纳入研究前未进行其他任何抗肿瘤治疗。排除标准：①合并免疫系统疾病、严重心肝肾疾病及其他恶性肿瘤；②合并意识障碍、精神疾病及中途退出者。共收集口腔癌患者30例作为观察组，男18例，女12例；年龄27～58〔平均(42.38±5.38)〕岁；发病部位：颊8例，舌6例，牙龈12例，口底4例；临床分期：Ⅲ期21例，Ⅳ期9例。同期健康体检者30例作为对照组，男15例，女15例，年龄24～56〔平均(41.47±6.74)〕岁。两组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2方法

1.2.1仪器 采用Epics-XL型流式细胞仪，购于美国Beckman Coulter公司；红细胞裂解液及单克隆抗体均购于美国Beckman Coulter公司。

1.2.2检查指标 两组研究对象在纳入研究24 h内抽取空腹肘静脉血3 ml，观察组在手术结束1 w后再次抽取空腹肘静脉血3 ml。将所有收集样本加入肝素进行抗凝处理，然后置于-80℃保存待检。

1.2.2.1T细胞表型测定 取收集样本做成4份100 μl样本，每份均加入10 μl异硫氰酸荧光素标记血液CD3单克隆抗体与CD4单克隆抗体；10 μl藻红蛋白标记血液CD8单克隆抗体与CD56单克隆抗体；置于25℃避光孵育1 h后，加入红细胞裂解液10 min后，离心，取上清液加入1 ml磷酸盐缓冲液(PBS)，采用流式细胞仪检测血清T细胞各亚型百分比及CD4+/CD8+比值。

1.2.2.2T细胞内γ干扰素(INF-γ)、白介素(IL)-2水平测定 取收集样本做成4份100 μl样本，每份中分别加入藻红蛋白标记的IL-2单克隆抗体，异硫氰酸荧光素标记的血液CD4单克隆抗体，藻红蛋白标记的INF-γ单克隆抗体，藻红蛋白标记的INF-γ与异硫氰酸荧光素标记的CD4单克隆抗体，置于25℃避光孵育1 h，加入红细胞裂解液10 min后，离心，取上清液加入1 ml PBS后，采用流式细胞仪检测IL-2阳性，INF-γ阳性，INF-γ、CD4双阳性，IL-2、CD4双阳性T细胞占总细胞的比例。

1.3统计学方法 应用SPSS20.0软件，多组计量资料间比较采用方差分析，组间两两比较采用t检验。

2 结 果

2.1手术前后两组T细胞亚群比较 观察组在手术前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于对照组，CD8+、CD56+水平均高于对照组(P<0.05)；手术后，观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均显著上升，CD8+、CD56+水平显著降低(P<0.05)，但观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于对照组，且CD8+、CD56+水平显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

2.2两组手术前后T细胞内细胞因子水平比较 手术前观察组IL-2阳性、IL-2、CD4双阳性及INF-γ、CD4双阳性水平均显著低于对照组，INF-γ阳性水平显著高于对照组(P<0.05)；手术后，观察组IL-2阳性、IL-2、CD4双阳性及INF-γ、CD4双阳性水平显著升高，INF-γ阳性水平显著降低(P<0.05)，且手术后观察组各项指标与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 手术前后两组T细胞亚群比较

与对照组比较：1)P<0.05；与手术前比较：2)P<0.05；下表同

表2 两组手术前后T细胞内细胞因子水平比较

3 讨 论

口腔癌是严重影响人们健康的恶性肿瘤之一，发病率居癌症发病顺位第六位，口腔癌以鳞状细胞癌为主，约占80%以上〔6〕。由于口腔癌发病部位特殊，一方面影响患者的饮食，另一方面影响患者美观，患者常常出现营养不良或心理障碍。既往报道〔7〕，肿瘤常常导致机体免疫功能下降，对疾病的进展、转归均具有重要的影响。目前，口腔癌主要以手术治疗为主，但在手术治疗的基础上给予免疫治疗对患者的康复具有促进作用，而掌握口腔癌患者手术治疗对机体免疫系统的影响，对开展免疫治疗具有重要的指导意义。

T细胞是机体抗肿瘤过程中重要的免疫细胞，依据表面分子标志物的差异可分为不同的亚群，在抗肿瘤过程中分别扮演着抑制肿瘤发生、进展的作用，如CD3+细胞数量可以反映细胞免疫功能，CD4+细胞能够辅助机体抵御肿癌细胞，CD8+细胞反映机体免疫抑制的强度，而CD4+/CD8+比值降低可以反映疾病出现进展，且预后不良〔8〕；而CD56+表达标志着癌症的进展。此外，T淋巴细胞在抗肿瘤过程中除可以直接杀伤癌细胞外，还可以分泌细胞因子发挥免疫调节作用，如IL-2、INF-γ等〔9，10〕。本研究显示，肿瘤患者免疫功能出现严重下降；手术治疗能够提升患者免疫功能，但仍未恢复到健康水平，其原因：一方面，手术清除肿瘤负荷，改善患者机体免疫功能；另一方面，手术能够诱发机体创伤修复的免疫应答反应，对免疫系统具有正向的促进作用。机体内细胞因子水平可以反映机体抗肿瘤反应状态，有研究显示〔11〕，肿瘤患者外周血中细胞因子水平发生变化，如IL-2、INF-γ等细胞因子水平降低。本研究显示，肿瘤可导致机体内细胞因子下降，与既往研究一致〔12〕。手术患者细胞免疫调节功能得到改善，其原因一方面由于IL-2、INF-γ抑制自身免疫反应，诱导对肿瘤细胞的免疫耐受，阻止抗肿瘤免疫反应的发生；另一方面，IL-2、INF-γ能够抑制CD8+、CD56+等细胞的增殖，促进CD4+等细胞增殖，提高机体免疫力。

综上所述，口腔癌患者机体抗免疫抑制功能下降，手术治疗能够改善患者免疫水平及免疫调节功能，改善患者病情。

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8司家文，胡启凡，黄圣运，等.结内液化区域对口腔鳞状细胞癌转移淋巴结表观弥散系数测量的影响〔J〕.上海口腔医学，2015；24(1)：98-101.

9聂娜娜，林 毅，毛成刚，等.川崎病患儿外周血细胞因子转导抑制因子1、3 mRNA 表达及辅助性T淋巴细胞、CD4+ CD25+调节性T淋巴细胞的变化〔J〕.中华实用儿科临床杂志，2015；30(21)：1652-5.

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