金银花中绿原酸成份的提取方法分析研究

陈 茜

金银花为常用中药，具有清热解毒，保肝利胆、凉风散热，抗病毒等功能[1]。近年来研究表明，金银花还具有抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤的功效，具有广阔的临床应用前景。金银花的主要成分包括绿原酸、肌醇、木犀草素、异绿原酸以及三萜皂苷等，其中，绿原酸是金银花的抗菌有效成分，一般常用绿原酸的含量高低来评价金银花质量的好坏[2]。绿原酸是一种有机酸，同时含有羧基和邻二酚羟基，易溶于醇溶液、丙酮和水等溶剂。当前，从金银花当中提取出绿原酸的常用提取方法包括传统的水提法、乙醇提取法、酶提取法等。本文将对绿原酸的常用提取方法进行实验和分析总结，并根据绿原酸的性质，设计出了水提取、纯乙醇提取、50%乙醇提取、超声波提取方法与醇提法对比实验、水提法与超声波提取方法对比实验，对每种提取方法的优缺点进行了分析。

1 材料与方法

1.1 仪器和试药 电子天平、烧杯若干、量筒、锥形瓶、漏斗、超声波发生器（郑州予华仪器制造有限公司）、离心机（江苏天瑞仪器股份有限公司）、高效液相色谱仪（上海仪电分析仪器有限公司）。材料和试剂：纯乙醇、50%乙醇、蒸馏水、金银花粉末。

2 实验方法

2.1 蒸馏水加热回流提取绿原酸 将62.5 g金银花粉末加入到1000 mL蒸馏水中，设置沙浴温度为70℃，进行回流1.5 h。然后用纱布过滤沙浴回流后的溶液，将滤渣滤出，再量取350 mL溶液，然后用滤纸过滤，溶液显示红色，将其放置于棕色瓶中。本次实验样品标记为样品A。

2.2 99%乙醇加热回流提取绿原酸 称取100 g金银花粉末，分为4份，每次将1份金银花粉末加入到400 mL 99%乙醇溶液中，设置沙浴温度为70℃，在回流装置中进行搅拌回流，每次回流2 h。每次回流后用纱布过滤，将滤渣除去，再用99%乙醇溶液补充溶液到400 mL，然后进行下一次的回流提取。当100 g金银花粉末分4次反复回流后，用纱布过滤回流液，再用滤纸过滤，直至溶液为澄清的绿色，将其收集于棕色瓶中。本次实验样品标记为样品B。

2.3 50%的乙醇浸泡提取绿原酸 称取25 g金银花粉末，加入400 mL 50%的乙醇溶液中，搅拌充分后，静置3天，直至溶液成为棕色，用纱布过滤，再用滤纸过滤，除去滤渣后，收集于棕色瓶中。本次实验样品标记为样品C。

2.4 不同浓度醇提取法与超声波提取法对比实验

2.4.1 乙醇提取法 称取干燥并且粉碎的金银花粉末6.0 g，分装成5份在5个锥形瓶中，分别用标签标记，然后依次加入40%、50%、60%、70%、80%乙醇各100 mL，密封保存，将恒温水浴温度控制在60℃，加热30 min，提取完毕后，分别依次进行过滤，再向滤渣中依次加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇各100 mL，然后重复一次前面所述操作，接着将滤液浓缩至20 mL，再分别进行抽滤，最后，将离心速度设置为4000 rpm，于离心机上离心10 min，将澄清的溶液放入冰箱待用。

2.4.2 超声波加乙醇提取法 称取干燥并且粉碎的金银花粉末6.0 g，分成5份，分装在5个锥形瓶中，分别用标签标记，然后依次加入40%、50%、60%、70%，80%乙醇各100 mL，密封保存，放置于60℃超声波中，进行超声波提取30 min，提取完后，分别依次进行过滤，再向滤渣中依次加入40%、50%、60%、70%，80%的乙醇各100 mL，重复上述操作，然后也将滤液浓缩至20 mL，再分别进行抽滤，最后，于离心机上以4000 rpm的速度离心10 min，将澄清的溶液放入冰箱中待用。

2.5 水提取法与超声波提取法对比实验

2.5.1 水提取法实验 称取干燥、粉碎的金银花粉末6.0 g，分成3份，分装在3个烧杯中，再分别用标签标记，将100 mL蒸馏水分别依次加入到3个被标记的烧杯中，放置于60℃恒温水浴，进行加热，第1份30 min，第2份50 min，第3份70 min，加热完毕后，分别依次过滤，再分别向滤渣中加入100 mL蒸馏水，分别加热提取，提取完毕后再进行过滤，除去滤渣，用旋转蒸发仪对滤液进行浓缩，再把浓缩液定容至20 mL。再分别进行抽滤，最后，于离心机上以4 000 rpm的速度离心10 min，将澄清的溶液放入冰箱中待用。

2.5.2 超声波加蒸馏水提取法 称取干燥、粉碎的金银花6.0 g，分装成3份于3个锥形瓶中，贴上标签进行标记，分别加入蒸馏水100 mL，放置于超声波发生器中，于60℃下进行加热，设置超声波效率为100%，第1份金银花加热30 min，第2份加热50 min，第3份加热70 min，加热提取完毕后过滤，再向滤渣当中加入蒸馏水100 mL，依次重复上述操作，也将滤液浓缩至20 mL，再分别进行抽滤，最后，于离心机上以4 000 rpm的速度离心10 min，将澄清的溶液放入冰箱待用。

2.6 实验结果检测及数据 将A、B、C、三个样品均放置半个月后进行检测，其检测方法参照《中华人民共和国药典》2010年版1部205页，对金银花中绿原酸含量的测定方法：高效液相色谱法。

表1 绿原酸含量测定

备注：样品B是用400 mL的99%乙醇分4次回流100 g金银花，金银花与99%乙醇的重量/体积1∶4比例，所得的绿原酸的含量为1.09 mg/mL，若换算成其他几组样品制作时金银花与溶剂的重量/体积1∶16比例，则绿原酸含量应为：0.2725 mg/mL。

表2 水提法与超声波法对比实验结果

表3 醇提法与超声波法对比试验结果

3 讨论

提取绿原酸可通过浸渍，不需要加热，50%的乙醇水溶液能够通过细胞壁、细胞膜并且渗透进入细胞组织内，无机溶剂和有机溶剂的相互配合，使其在细胞间、细胞内部有较强的穿透力，水更有可能渗透进细胞内将细胞撑破，使细胞内的绿原酸不断被溶出，然而如果没有水溶剂细胞浸入，仅仅是单纯的乙醇环境，即使加热再久，也可能没有破坏细胞，最终导致含量偏低。因此从提取效益和效果来看，50%的乙醇水溶液比纯乙醇提取效果好。与传统的水提法相比较，超声波法提取的效果要更好。同时还可以得出，提取时间为30 min时，提取效果最佳，随着提取时间的延长，可能导致提取出的绿原酸结构被破坏，使其含量减少。

通过对金银花不同得提取工艺进行分析，我们可以得知，醇提取法要比水提法的效果更理想，绿原酸的提取率较高。随着乙醇浓度的增加，提取绿原酸的浓度增加，到达最高后浓度随着乙醇浓度增加，绿原酸的浓度呈逐渐降低的趋势[6]。加入超声波提取以后，提取效率变得更高，提取物绿原酸的含量也在增加。因此，选择60%的乙醇溶液，并且用超声波加热提取30 min的提取工艺最好[3]。超声波提取方法能够将细胞壁击碎，同时使细胞内的组分渗透到溶液当中，从而达到分离的目的。该方法的优点是综合成本比较低，污染比较小，易过滤，而且没有醇提法中因溶剂的使用带来的不利，且产品产出率高。但考虑到金银花的理化性质，用超声波处理过后，金银花易成粘稠糊状，不利于接下来操作的进行。因此该方法仅限于实验室中操作，不适合于工业化的生产[4]。

绿原酸作为金银花的主要功能成分，其提取方法仍将倍受关注。水提法、醇提法简单易行，特别是醇提取法，提取率较高，一段时间内仍将是最常用的基本提取方法[5]。相对于水提法，醇提取法提取效果更好，绿原酸的提取效率较高，加入超声波后提取效率变得更高，提取物绿原酸的含量增加[6]。

[1]梁玉敏，王进美，李怀斌.金银花中绿原酸提取工艺比较与优化探讨[J].辽宁中医杂志，2008，35(2)：262-264.

[2]范远景，徐晓伟，余芳芳，等.分离纯化金银花绿原酸工艺研究[J].安徽农业科学，2010，38(24)：13052-13053.

[3]叶燕萍，万雪芹，颜涛，等.GA3对岩溶石山金银花的效应研究[J].中药材，2010，33(8):1210-1212.

[4]聂凌鸿，岳森.金银花中绿原酸提取工艺的优化[J].食品研究与开发，2008，29(1):51-55.

[5]王利，冉旭.金银花中绿原酸醇提工艺的研究[J].饮料工业，2009，12(1):18-20.

[6]刘佳佳，赵国玲，王晖，等.Extractionprocess of chlorogenicacidinfloslonicerae byenzymatictreatment[J].中南大学学报(英文版)，2002，9(4):246-249.