草鱼出血病综合防控技术

陈万清,时云朵,权可艳,胡 波，梁先进,叶小斌(.四川省水产学校，成都 郫都 670；.四川省绵竹市水精灵渔业服务中心，四川 绵竹 6800；.四川省自贡市大安区农业局，四川 自贡 6400)

1 草鱼出血病的症状

草鱼出血病症状复杂，可在体内外出现一系列症状群，但最基本的症状为有关器官或组织的充血和出血。实际上，上述症状群大多不同时出现，按其症状和病理变化的差异，可分为3个类型，可同时或交替出现。

1.1 红肌肉型

主要表现为肌肉明显出血，呈鲜红色，鳃因失血而苍白。多见于5～10cm的小草鱼种。

1.2 红鳍红鳃盖型

主要表现为鳍基、鳃盖严重充血，头顶、眼眶、口腔等处有明显出血点，多见于10cm以上的大草鱼种。

1.3 肠炎型

主要表现为肠道严重充血，全部或局部呈鲜红色，有别于细菌性肠炎的紫红色，内脏点状出血，体表亦可见出血点。各种规格的草鱼种均可见到。

2 流行情况

草鱼出血病流行于每年6～9月，水温升高至25℃以上即开始流行。主要为害当年5～20cm的草鱼种，死亡率一般为30%～50%，高的可达60%～80%，危害极为严重，青鱼种与麦穗鱼亦可感染。

3 草鱼出血病的诊断

草鱼出血病的诊断可以采取为常规诊断和实验室诊断2种方法。

3.1 常规诊断

常规诊断一是对发病鱼塘进行现场调查(包括调查发病鱼塘的环境、了解池塘水质状况、调查饲养管理情况、观察发病鱼在鱼池状态等)；二是对病鱼体内外进行肉眼观察；三是对发病鱼进行镜检(主要目的是检查鱼体内外寄生虫)；四是根据危害鱼的种类及规格、发病时的水温、发病率和死亡率等流行情况来进行综合判定。

3.2 实验室诊断

草鱼出血病实验室诊断主要采用三重PCR技术(即针对草鱼呼肠孤病毒各类型毒株的保守区域设计的3对引物，同时对样品抽提的病毒RNA反转录为cDNA，并对该cDNA进行体外聚合酶链式反应，产物经琼脂糖凝胶电泳检测)，此技术仅需普通PCR仪和电泳仪即可检测，方便、准确、快速，且具有良好的敏感性、特异性和稳定性。德阳站送检样品经三重PCR检验结果呈阳性，结果如图1所示；将琼脂糖凝胶电泳上的目的片段进行胶回收、测序获得DNA序列，在GeneBank数据库中进行Blast比对，比对结果显示德阳站送检样品的基因序列与草鱼呼肠孤病毒-HZ08片段6(Grass carp reovirus strain GCRV‐HZ08 segment 6)的基因序列相似度为100%，结果如图2所示，表明德阳站送检样品是基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒感染。

图1 德阳综合试验站送检样品琼脂糖凝胶电泳

图2 测序比对结果

4 草鱼出血病的综合防治技术

4.1 预防

4.1.1 鱼种放养前，采用生石灰彻底清塘 池塘水深1m时，生石灰用量为125～150kg/667m2；排干池水(塘底留水10cm)时，生石灰用量为60～80kg/667m2。清塘后，水温15～20℃时，7～10d放养鱼种。

4.1.2 免疫预防 鱼种放养前，对规格50～100g草鱼种人工注射草鱼出血病灭活疫苗。考虑到草鱼出血病常常与草鱼“三病”(赤皮、肠炎、烂鳃病)一起迸发的特点，可与草鱼出血病疫苗同时注射草鱼三病三联疫苗。为防止注射导致的细菌性感染，可在注射液中添加抗生素。近年，国家大宗淡水鱼类产业技术体系德阳综合试验站将该体系病防岗位科学家团队研发疫苗在生产中进行示范，疫苗注射剂量及配合使用情况主要有以下2种方式：一是出血病疫苗单用，每瓶(1000尾使用量)，用200mL注射用水稀释，加0.5g头孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL；二是出血病疫苗和三联苗和用，每瓶(1000尾)出血病疫苗用三联苗(200mL，1000尾)稀释，加0.5g头孢噻呋，每尾肌肉注射0.2mL。

4.1.3 适时开动增氧机 晴天的中午开动增氧机，减少底层氧债，改善池水溶氧状况。

4.1.4 使用微生态制剂 定期向池塘施用微生态制剂，改良池塘底质和水质。水产上常用的微生态制剂主要有光合细菌、芽孢杆菌、硝化细菌、反硝化细菌、EM菌等。主要作用为降低水体氨氮、亚硝酸盐，抑制病原菌繁殖等。

4.1.5 定期补充碳源 利用“生物絮团”生态养殖技术原理，定期向池塘添加糖蜜、葡萄糖等含碳物质。“生物絮团”生态养殖技术是在养殖水体零换水的基础上，当水体氨氮含量高时，通为人为添加碳源，调节水体碳氮比，促进水体异养菌大量繁殖，利用细菌同化无机氮，将水体的的氨氮等有害氮源转化为菌体蛋白，并通过细菌将水体中的藻类、原生动物、轮虫及有机质絮凝成颗粒物质，形成“生物絮团”，最终被滤食性和杂食性鱼类利用，起到调控水质、促进营养物质循环再利用的目的。在池塘零换水的基础上，可每7～10d向池塘施入葡萄糖5kg。

4.1.6 搭建生物浮床，控制池塘总氮总磷 可以在精养池塘按不超过池塘总面积10%的比例搭建生物浮床。为防止草鱼对浮床生物根部的摄食，可在浮床底部加一层拦网。浮床植物目前采用较多的是水雍菜，在5月中旬即可将育好的水雍菜苗移植到浮床上。

4.1.7 药物预防 “血停”是国家大宗淡水鱼类产业技术体系渔药研发与临床项目支持研发的应用试验与示范产品，主要成分为天然绿茶粗提物，能渗透进鱼体细胞，有效阻断草鱼出血病病毒入侵鱼体，具有抑制病毒复制繁殖的能力。草鱼出血病发病高峰期，按每kg饲料添加“血停”500mg，拌料投喂5～6d。

4.2 治疗

当养殖草鱼发生病毒性出血病后，要及时采取措施治疗。主要措施有：

4.2.1 水体消毒 一是发病草鱼池，用聚维酮碘(含聚维酮碘10%)全池泼洒，用量为45～75mg/m3，隔日1次，连用2次。用水稀释300～500倍后，全池遍洒；二是发病草鱼池，用浓度20%的戊二醛，按水体浓度40mg/m3，隔日1次，连用2次，用水稀释300～500倍后，全池遍洒。

4.2.2 内服药饵 发病草鱼，饲料用“血停”1～1.5g/kg拌饵投喂，连用5～6d。

5 草鱼出血病防、治实例

5.1 免疫预防

自2010年开始，国家大宗淡水鱼类产业技术体系先后在广元市白龙湖库区、中江县继光水库、绵竹市西南镇、罗江县新盛镇等地为网箱和池塘养殖的草鱼种进行草鱼出血病免疫示范应用。部分免疫应用情况及效果见表1、表2。

表1 2012年中江继光水库草鱼出血病免疫示范效果统计表

表2 2017年草鱼出血病免疫示范效果统计表

5.2 “血停”应用示范

绵竹养殖户张仕军池塘发生草鱼病毒性出血病，发病池塘面积6*667m2，养殖草鱼4000尾、鲤2500尾、鲫6000尾、鲢700尾、鳙400尾。从8月10日开始使用“血停”，按每袋“血停”(500g一袋拌100kg饲料)，每天喂2次药饵，经过5d的药饵治疗，草鱼死亡情况由开始的每天35尾降到0尾。死亡率得到有效控制。

绵竹遵道镇联合水库文本武发病池塘面积37*667m2，养殖草鱼20000尾、鲤5000尾、鲫30000尾、鲢4000尾、鳙2000尾。该池于8月2日发生草鱼病毒性出血病，于8月15日开始使用“血停”，按每袋“血停”(500g1袋拌100kg饲料)，每天喂2次药饵。经过5d的药饵治疗，草鱼死亡情况由开始的每天320尾降到0尾。死亡率得到有效控制。