联合检测血清维生素与抗氧化指标对高胆固醇血症的临床意义

余利，喻瑾，郎和东、汪小兰，周敏，王斌，易龙，糜漫天

高胆固醇血症（hypercholesterolemia）是指血中甘油三酯（TG）处于正常水平，但总胆固醇（TC）水平超出正常范围的一类血脂异常疾病，被认为是冠心病、缺血性心肌梗死、脑梗死等疾病的重要危险因素，同时也与高血压、糖尿病的发生密切相关[1]。研究显示，人体血清TC水平增高，可能使体内活性氧产生增加，加重氧化应激，并进一步加剧血管内皮损伤和功能障碍，促进动脉粥样硬化的发生和发展[2]。因此，对高胆固醇血症患者及心血管疾病高危人群进行氧化应激相关指标、特别是抗氧化指标的检测，能够对疾病早发现和早诊断，以及对高胆固醇血症患者的营养评价及治疗提供相关依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2014年10～12月于西南医院体检中心进行健康体检者共611例参与健康调查，筛选纳入其中的高胆固醇血症患者100例，纳入标准：空腹血清总胆固醇（TC）≥5.18 mmol/L，年龄40～65岁，BMI 18～30 kg/m2。排除标准：患有胃肠道疾病、冠心病、各种严重的慢性疾病或肝肾功能不全、恶性肿瘤患者；妊娠或哺乳期妇女。本研究获本校伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.3 检测指标采集研究对象清晨空腹静脉血5～10 ml，静置1 h，3000 r/min离心10 min后，分离血清待测。VC采用比色法测定、VE采用比色法测定、Hcy采用酶循环法和酶联免疫吸附法测定、MDA采用硫代巴比妥酸法测定、SOD采用邻苯三酚底物法和WST-1法测定。所有检测实验操作按说明书步骤进行，吸光度的测定均采用酶标仪进行检测。

1.4 统计学方法应用SPSS19.0软件进行统计分析，计量资料先进行正态性检验，不符合正态分布者，数据用中位数和四分位数表示，采用非参数检验；符合正态分布者，数据以x±s表示，采用独立样本t检验。一致性分析采用组内相关系数（ICC），相关性分析采用Spearman相关系数。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高胆固醇血症患者血清维生素和抗氧化指标检测结果因研究对象血清采样量有限，同一血清样本不能完成所有指标的检测，故各检测指标实际样本数有所差异。与正常参考值相比，高胆固醇患者血清VE、Hcy和SOD明显降低。高胆固醇患者血清VE缺乏率为44.8%，Hcy缺乏率分别为13.8%（酶循环法）和2.3%（酶联免疫吸附法），SOD缺乏率为17.7%（邻苯三酚底物法）。见表1。

2.2 高胆固醇血症患者血清抗氧化指标间的相关性分析对高胆固醇血症患者多个抗氧化指标进行单因素Spearman相关分析，结果发现，血清Hcy（酶循环法）与SOD（WST-1法）呈正相关（P＜0.01）。见表2。

2.3 不同测定方法测量结果一致性分析采用酶循环法和ELISA两种方法，检测高胆固醇患者血清Hcy含量。结果显示，两组检测值有显著性差异（P＜0.01，表1），且一致性检验结果显示，ICC值为0.298（P＞0.05）,二者之间无相关性，提示两种检测方法不能相互替代。

采用邻苯三酚底物法和WST-1两种方法，检测高胆固醇患者血清SOD含量。结果显示，两组检测值有显著性差异（P＜0.01，表1），且一致性检测结果显示ICC为0.257（P＞0.05），两种方法之间无相关性，提示提示两种检测方法不能相互替代。

与血清Hcy和SOD的正常参考值或文献报道的检测值比较，酶循环法和邻苯三酚底物法分别更能反映血清Hcy和SOD的水平。

表1 高胆固醇血症患者血清维生素和抗氧化指标检测结果

表2 高胆固醇血症血清维生素和抗氧化指标Spearman相关分析(R值)

3 讨论

高胆固醇血症在多种心血管系统疾病的发生、发展过程中发挥着重要的作用[7]。近年来，随着我国人们生活水平提高，饮食结构发生了重大变化，高脂食物的摄入量增加，导致高胆固醇血症的患者人数逐渐增加，给国民的身心健康造成了严重威胁。因此，对高胆固醇血症的早期诊断以及早期营养评价和干预尤为重要。

3.1 高胆固醇血症患者血清维生素与抗氧化指标

维生素E广泛存在于人体细胞膜性结构、脂肪细胞的脂滴和循环的脂蛋白中，作为供氧体在自由基反应过程中，与多价不饱和脂肪酸竞争性地与脂类自由基结合，从而阻滞脂质过氧化的链式反应。本研究中的高胆固醇血症患者维生素E水平较同类研究报道低[8-10]，且缺乏率高达44.8%，表明高胆固醇血症患者血清维生素E水平降低，提示在疾病早期，可以将血清维生素E作为高胆固醇血症的检测指标之一。维生素E参加抗氧化反应，导致其消耗增加，并进一步加重维生素E缺乏，目前尚不清楚维生素E下降是否可导致高胆固醇血症进一步恶化。本研究中的高胆固醇血症患者的MDA水平与同类研究相当[11]，表明高胆固醇血症患者血清MDA水平变化不大。相关研究表明，血脂水平的改变可引起氧化应激反应，产生大量自由基，从而导致多种脂蛋白的化学性修饰，对身体造成严重的损伤[12]。MDA是脂质过氧化的常见产物，其含量与体内脂质发生过氧化速率相关，能反映自由基损伤细胞的严重程度。

3.2 不同检测方法一致性分析本研究采用组内相关系数（评价一致性较为理想的指标，它对系统误差和随机误差均敏感[13]）对不同检测方法的结果进行一致性分析。目前测定Hcy的常用方法有ELISA方法、荧光偏振免疫分析法和高效液相色谱法。ELISA法为手工操作，检测时间较长；高效液相色谱法、荧光偏振免疫分析法成本相对较高。常连刚等[14]采用酶循环法（Y）与荧光偏振免疫法FPLA（X）比对，两者具有良好相关性：Y=1.018X-0.895（r=0.945）。酶循环法可在全自动生化分析仪上分析，能满足大批量标本的分析，可更加简便、灵敏、准确地检测Hcy，操作简便，影响因素少，是一种值得推广的方法。结合本次检测结果，酶循环法也能反映血清Hcy水平。

相关研究显示，采用邻苯三酚底物法测定的SOD参考值范围为129～216 U/ml[6]。本研究结果仅17.7%的高胆固醇血症患者达到该范围，表明高胆固醇血症患者血清SOD降低，与相关研究结果一致[15]。采用WST-1法测定的SOD值低于邻苯三酚底物法测定值，一致性分析也显示，两种方法无相关性。邻苯三酚底物法是目前较广泛用于测定SOD的一种方法,该法对pH、温度、邻苯三酚浓度、SOD待测液存放时间等较敏感,故测定时要严格控制这些因素的影响。而WST-1法具有响应时间快、专一性强、灵敏度高、样品用量少等优点，但这需要高灵敏度的精密发光测量仪器。由于一致性分析不一致，暂且认为是由于两种方法差异导致，且两种方法的正常参考范围也有差别。但邻苯三酚底物法试剂盒是用于自动生化分析仪检测，能更好地避免人工加样产生的误差，更适用于大样本的人群血清SOD检测分析。

综上所述，高胆固醇血症患者血清VE、Hcy和SOD水平明显降低，这些指标可能对高胆固醇血症营养筛查和疾病治疗有重要意义

[1]陈玉,陈豪东.高脂血症与膳食及生活习惯的关系[J].扬州大学烹饪学报,2003,20(3):16-18.

[2]曹爱华,孙丽珍,贡瑞霞.辛伐他汀对高脂血症患者早期氧化应激及循环中维生素E的影响[J].新医学,2010,41(1):18-20.

[3]郭俊生,葛可佑.2004,维生素C//[M].中国营养科学全书.北京:人民卫生出版社:234-237.

[4]Krinsky NI,Beecher GR,Burk RF,et al.Dietary reference intakes for vitamin C,vitamin E,selenium,and carotenoids[J].Institute of Medicine,2000.

[5]杨悦林,胡大春,钱净,等.昆明地区血清同型半胱氨酸临床参考范围调查[J].临床医学工程,2012,19(3):466-467.

[6]严海燕,劳伟思,钟日辉,等.邻苯三酚法检测血清超氧化物歧化酶参考值范围的验证和建立[J].实用医技杂志,2010,17(12):1144-1145.

[7]Stoekenbroek RM,Kastelein JJ,Huijgen R.PCSK9 inhibition:the way forward in the treatment of dyslipidemia[J].BMC Med,2015,13(1):258-263.

[8]Spencer AP,Carson DS,Crouch MA.Vitamin E and coronary artery disease[J].Arch Intern Med,1999,159(12):1313-1320.

[9]高建东,高震.血清维生素E在冠心病心衰患者中的临床观察[J].临床荟萃,2000,15(2):68-69.

[10]徐根云,吴建平,余建华.冠心病患者血清维生素E测定及临床意义[J].浙江预防医学,2004,16(1):78-79.

[11]杜平,曹邓晗.高胆固醇血症患者氧化指标、炎症因子及血管内皮功能的变化及意义[J].海南医学院学报,2016,22(23):2818-2821.

[12]Chtourou Y,Slima AB,Makni M,et al.Naringenin protects cardiachypercholesterolemia-inducedoxidativestressand subsequent necroptosis in rats[J].Pharmacol Rep,2015,67(6):1090-1097.

[13]李镒冲,李晓松.两种测量方法定量测量结果的一致性评价[J].现代预防医学,2007,34(17):3263-3266.

[14]常连刚,赵静,任峰,等.循环酶法测定血浆同型半胱氨酸[J].检验医学,2007,22(1):16-19.

[15]王惠颖.高胆固醇血症血气及相关指标的变化与葛根素的作用[D].福州:福建中医学院福建中医药大学,2006.