VM与E-cad在人卵巢上皮癌组织中的表达及意义

张永生

（河南省漯河市郾城区人民医院病理科 漯河462000）

卵巢恶性肿瘤为常见的女性生殖器官肿瘤，卵巢上皮癌为其中的常见类型，因其内分泌机制较为复杂，早期患者症状多不明显，发现时多已发生转移，恶性程度相对较高，且目前发病机制尚不明确，同时缺乏诊断该疾病敏感性和特异性的方法[1]。相关研究认为[2]，明确卵巢上皮癌发生发展过程中的生物标志物及分子机制，在提高卵巢上皮诊断率及病情进展监测上，具有重要的临床意义。血管生成拟态（Vasculogenic Mimicry，VM）为内皮细胞未参与下细胞表型出现自身变形和基质重塑，继而形成特有的微循环管道，可促进癌细胞侵袭和转移。E-钙黏蛋白为重要的黏附因子，是血管生成拟态结构中，癌细胞与癌细胞之间、癌细胞与基质间黏附的关键要素，与癌细胞的生物学行为关系密切[3]。故选取我院收治卵巢病变患者的卵巢上皮组织切片为研究对象，旨在分析VM与E-cad在人卵巢上皮癌组织中的表达及意义，为卵巢上皮癌的病情监测及预后判断提供一定的临床依据。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2016年8月～2018年2月收治的110例卵巢病变患者卵巢上皮组织切片为研究对象，其中卵巢上皮癌86例，卵巢上皮良性肿瘤24例。卵巢上皮癌患者年龄37～78岁，平均（52.10±7.83）岁；卵巢上皮良性肿瘤患者年龄36～73岁，平均（51.93±7.52）岁。比较两组临床资料，无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会审核批准。

1.2 入组标准 纳入标准：均经病理组织确诊卵巢病变，且接受手术治疗者；患者及其家属均知晓参与本研究，并自愿签署知情同意书。排除标准：非上皮卵巢肿瘤者；入院前已行手术治疗或入院后手术接受其它治疗者。

1.3 检测方法 （1）分别选取5张切片，1张进行HE染色，1张进行E-钙黏蛋白（E-cad）免疫组化染色，1张进行CD34-PAS染色，1张使用PBS液进行阴性对照组，1张备用。（2）HE染色：将切片放于载玻片上于60℃烤箱中过夜烘干，随后放入二甲苯溶液1、2中浸泡10 min，再放入酒精溶液中进行梯度水化，于流动水下冲洗干净，进行苏木素染色2 min、1%盐水酒精中进行分化数秒、1%氨水返蓝数秒、伊红染色，酒精脱水，二甲苯溶液透明，随后封片，晾干，于显微镜下进行观察。（3）免疫组化染色：同HE染色水化后，使用pH值7.4～7.6的PBS液浸泡3次，每次持续5 min，过蒸馏水，放入沸腾的柠檬酸抗原修复液中继续加热（210℃加热至冒气后调至130℃中加热2.5 min），加热锅外冷水降温20 min，过蒸馏水，室温下进行去离子阻断，PBS冲洗，滴加养血清进行封闭，随后进行一抗、二抗、DAB显色、苏木素染色、盐酸分化、氨水返蓝、酒精脱水、二甲苯溶液透明，封片，晾干，于显微镜下进行观察。（4）CD34-PAS染色：在DAB显色后于镜下观察内皮细胞CD34着色后，立即给予流动水冲洗，蒸馏水水洗，滴加PAS，再次冲洗、过蒸馏水后滴加Schiff试剂恒温反应15 min，随后冲洗、苏木素染色、盐酸分化、氨水返蓝、酒精脱水、二甲苯溶液透明，封片，晾干，于显微镜下进行观察并进行结果判定。

1.4 观察指标及判定标准 观察两组VM、E-cad表达情况，分析VM、E-cad表达与卵巢上皮癌患者临床病理资料的关系。判定标准：CD34阳性颗粒分布于血管内皮细胞膜中，PAS阳性呈紫红色，表达于血管壁基膜，镜下观察CD34阴性癌细胞围成PAS阳性基膜样不规则血管样结构，且周围无炎性细胞、无出血坏死，即可判定为VM；E-cad阳性颗粒表达与细胞膜/浆中，采用半定量积分法进行判定，其中棕褐色3分、棕黄色2分、淡黄色1分、不显色0分，高倍镜下10个视野阳性细胞比例为0计0分，为 1%～10%计1分，11%～50%计 2分，51%～80%计3分，80%以上计4分，前后积分相加，总分0～3分为阴性表达，3分以上为阳性表达[4]。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0软件进行数据分析，计数资料以%表示，行χ2检验，计量资料行t检验，用（±s）表示，相关性分析采用Spearman相关系数，同时采用Logistic回归进行多因素分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 VM、E-cad表达情况 卵巢上皮癌组织中，VM阳性表达率为58.14%（50/86），阴性表达率为41.86%（36/86），E-cad 阳 性 表 达 率 为 47.67%（41/86），阴性表达率为 52.33%（45/86）；卵巢上皮良性肿瘤组织中，VM阳性表达率为0.00（0/24），阴性表达率为 100.00%（24/24），E-cad阳性表达率为79.17%（19/24），阴性表达率为 20.83%（5/24）。两组VM、E-cad阳性表达率比较，有显著性差异，P＜0.05。

2.2 卵巢上皮癌组织中VM、E-cad阳性表达与病理参数的关系 VM、E-cad阳性表达与肿瘤直径、病理类型等参数无明显关系，差异不显著，P＞0.05；在肿瘤分期、分化程度、淋巴及腹腔转移等参数方面，在肿瘤分期越高，分化程度越低，有淋巴及腹腔转移的情况下，VM阳性表达越高，E-cad阳性表达越低，差异显著，P＜0.05。且经Spearman相关分析，VM阳性表达与E-cad阳性表达呈明显负相关，r=-0.674，P＜0.05。见表 1。

表1 卵巢上皮癌组织中VM、E-cad表达与病理参数的关系

2.3 Logistic多因素分析 将单因素分析存在显著差异的因子导入Logistic回归模型中进行多因素分析，发现 VM 阳性表达（or=3.976，95%CI1.326～9.820，P＜0.05）、E-cad阳性表达（or=0.571，95%CI0.237～0.918，P＜0.05）、肿瘤分期（or=7.604，95%CI2.286～19.335，P＜0.05）、淋巴及腹腔转移（or=4.625，95%CI1.389～12.517，P＜0.05）为卵巢上皮癌疾病进展的独立危险因素。

3 讨论

卵巢癌的肿瘤血管生成包括血管生成、血管形成、血管生成拟态三种方式，肿瘤新生血管与其恶性生物学行为密切相关。VM由侵袭性癌细胞围成，癌细胞与血流之间仅隔有一层PAS阳性基底膜样物，由于缺少血管内皮细胞屏障，癌细胞很容易在自身释放的蛋白水解酶和血流冲击下，穿透PAS阳性基底膜样物进入血液中，成为癌组织的功能性微循环，在肿瘤侵袭和转移中发挥关键作用。相关研究显示[5]，VM阳性表达卵巢上皮癌患者更容易发生血行转移，且生存周期较VM阴性表达患者低。E-cad为钙离子依赖性跨膜蛋白，基因定位于16q221，为上皮细胞标志物及重要的黏附因子，在胚胎发育、细胞分化、形态学及维持上皮极性与完整性方面具有重要作用，其异常表达为分子离散的基础，E-cad表达降低，细胞间黏附松散，细胞内骨架的固定作用降低，有自身变形能力，促进VM形成，是VM发生的重要机制之一[6]。本研究结果显示，卵巢上皮癌组织中，VM具有较高的阳性表达率，E-cad具有较低的阳性表达率；在肿瘤分期越高，分化程度越低，有淋巴及腹腔转移的情况下，VM阳性表达越高，E-cad阳性表达越低，且二者呈显著负相关，有显著性差异，P＜0.05；VM、E-cad阳性表达、肿瘤分期、淋巴及腹腔转移为卵巢上皮癌疾病进展的独立危险因素。综上所述，VM与E-cad在人卵巢上皮癌组织中存在明显的异常表达，且与肿瘤分期、淋巴及腹腔转移共为卵巢上皮癌疾病进展的独立危险因素，可作为预后判断的客观指标。