阑尾黏液性肿瘤患者肿瘤抑制蛋白质p53、Ki-67抗原表达及相关生物学行为评价

郑鹤 曹亮 范学亮 王中山

（河南省郑州金域临床检验中心病理科 郑州450000）

阑尾黏液性肿瘤属阑尾原发性肿瘤主要病理类型之一，以良性病变为主，早期缺乏特异性临床症状及体征，多于合并感染时出现类似慢、急性阑尾炎的临床症状及体征[1]。阑尾黏液性肿瘤在临床较为少见，约占全部阑尾疾病的0.3%，但若未及时治疗易诱发腹膜假黏液瘤（Pseudomyxoma Peritonei，PMP），有恶变趋势[2]。目前临床对该疾病的实验研究较少，缺乏对其分子病理基础及生物学行为等方面的认识。基于此，本研究选取我中心病理科确诊的48例阑尾黏液性肿瘤的手术标本蜡块为观察组，旨在分析肿瘤抑制蛋白质p53、增殖细胞核抗原Ki-67表达与阑尾黏液性肿瘤病理特征及肿瘤发生、发展的关系。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我中心病理科2015年1月～2018年7月经病理学确诊的48例阑尾黏液性肿瘤的手术标本为观察组，另取同期41例因单纯性阑尾炎行阑尾切除的阑尾组织标本为对照组。观察组男21例，女27例；年龄44～69岁，平均年龄（56.41±6.71）岁；体质量指数 18.3～24.5 kg/m2，平均体质量指数（21.30±1.44）kg/m2；黏液腺癌 22例，低级别黏液性肿瘤26例。对照组男18例，女23例；年龄 42～68岁，平均年龄（56.08±6.80）岁；体质量指数18.2～24.6 kg/m2，平均体质量指数（21.25±1.51）kg/m2。两组一般资料比较，差异无统计学意义，P＞0.05，具有可比性。本研究已经通过医学伦理委员会批准，患者签署知情同意书，并排除继发性阑尾肿瘤、出现远处转移以及临床资料不全者。

1.2 检验方法 应用免疫组织化学二步法分别检测p53蛋白、Ki-67抗原在阑尾黏液性肿瘤和单纯性阑尾炎中的表达水平。

1.2.1 主要试剂 北京安诺优达基因科技有限公司生产的鼠抗人p53蛋白单抗、鼠抗人Ki-67单抗；上海西唐生物科技有限公司生产的EDTA抗原修复液、免疫组织化学二步试剂、浓缩型DBA试剂盒。

1.2.2 具体操作 所有标本均以4%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4～5 μm连续切片，常规作HE染色，同时采用工作液对p53蛋白、Ki-67抗原进行免疫组织化学染色。以EDTA抗原修复液高压修复抗原2.5 min。选取已知阳性片作为阳性对照，并以PBS代替一抗作为阴性对照。由两位高年资病理科医师于光学显微镜下观察免疫组织化学切片，计数分析且采用数码照相系统拍照。

1.2.3 结果判定 （1）p53染色：细胞核内呈均一棕色或棕黄色颗粒为免疫组化阳性。光镜下观察5个有代表性的高倍视野，按切片阳性细胞占比分成4个等级：阳性细胞＜10%记（－），阳性细胞10%～25%记（+），阳性细胞 26%～50%记（++），阳性细胞＞50%记（+++）。（2）Ki-67抗原染色定位于细胞核。按Ki-67抗原标记指数（LI）将阳性结果分成4个等级：0%～10%记Ⅰ级，11%～25%记Ⅱ级，26%～50%记Ⅲ级，＞50%记Ⅳ级。每张切片随机选择5个高倍视野，每个视野计数100个细胞。Ki-67抗原阳性率=（Ⅲ级+Ⅳ级）/计数细胞×100%。

1.3 观察指标 （1）观察两组p53蛋白、Ki-67抗原表达情况。（2）分析p53蛋白、Ki-67抗原表达与阑尾黏液性肿瘤患者性别、年龄、病理类型、是否形成PMP以及有无淋巴结转移等因素的关系。

1.4 统计学方法 数据处理采用SPSS21.0统计学软件，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料用率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组p53蛋白、Ki-67抗原表达情况比较 观察组中p53蛋白阳性表达15例，阳性表达率为31.25%（15/48）；Ki-67抗原标记阳性22例，标记阳性率为45.83%（22/48）。对照组p53蛋白阳性表达0例，阳性表达率为0.00%（0/41）；Ki-67抗原标记阳性4例，标记阳性率为9.76%（4/41）。观察组p53蛋白阳性表达率及Ki-67抗原标记阳性率明显高于对照组（P＜0.05）。

2.2 p53蛋白、Ki-67抗原表达与阑尾黏液性肿瘤发生、发展的关系 不同病理类型、有无淋巴转移、有无出现PMP的阑尾黏液性肿瘤患者p53蛋白阳性率比较，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄及不同性别的阑尾黏液性肿瘤患者p53蛋白阳性率比较，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。不同病理类型、有无淋巴转移的阑尾黏液性肿瘤患者Ki-67抗原阳性率比较，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄、不同性别、有无出现PMP的阑尾黏液性肿瘤患者Ki-67抗原阳性率比较，组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 p53蛋白、Ki-67抗原表达与阑尾黏液性肿瘤发生、发展的关系[例（%）]

3 讨论

阑尾黏液性肿瘤临床相对少见，其与PMP的发生存在密切关系，相关研究已证实，阑尾黏液性肿瘤为引起PMP的关键因素之一[3～4]。但目前阑尾黏液性肿瘤及PMP尚缺乏特异性临床特征，基于此，本研究尝试自分子病理学角度分析，以期为阑尾黏液性肿瘤临床诊断及评估预后提供数据参考。

p53为目前发现与人类肿瘤关系最为密切的肿瘤基因，其参与细胞周期调控、细胞分化/凋亡、DNA修复等生物学过程。野生型p53（wtp53）为肿瘤抑制基因，而突变型p53（mtp53）基因表达产物已丧失抑制肿瘤异常增殖作用，具有癌基因效果。mtp53蛋白半衰期延长明显，可通过免疫组化法检出，mtp53蛋白过表达则提示p53基因已发生突变[5]。王贲士等[6]学者研究指出，mtp53基因过表达与肿瘤恶性程度关系密切。Ki-67是人类增殖细胞核抗原，其表达异常可评估细胞的增生活性。据报道[7～8]，Ki-67抗原与多种肿瘤发生、发展及预后密切相关。

本研究结果显示，观察组p53蛋白阳性表达率及Ki-67抗原标记阳性率明显高于对照组（P＜0.05）。说明阑尾黏液性肿瘤患者p53蛋白、Ki-67抗原阳性率会出现显著升高，可作为临床诊断该疾病的指标。p53突变基因可促进肿瘤恶性转化，而Ki-67抗原异常表达能提高肿瘤细胞增殖活性，二者具有协同效果，共同参与肿瘤的生物学过程。本研究结果还显示，不同病理类型、有无淋巴转移、有无出现PMP的阑尾黏液性肿瘤患者p53蛋白阳性率比较，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）；不同病理类型、有无淋巴转移的阑尾黏液性肿瘤患者Ki-67抗原阳性率比较，组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明p53蛋白、Ki-67抗原表达水平与阑尾黏液性肿瘤的发生及发展密切相关。综上所述，阑尾黏液性肿瘤中p53蛋白、Ki-67抗原阳性率均显著升高，联合检测p53蛋白、Ki-67抗原对评估阑尾黏液性肿瘤的生物学行为具有积极作用，可为临床治疗提供数据支持。