液相色谱仪检定中的方法及注意事项

冯伟杰

（镇江市计量检定测试中心， 江苏 镇江 212000）

引言

物质色谱分析的重要设备就是液相色谱仪，其在食品安全检测、化学品等检测领域被广泛的应用着。计量检定人员在使用液相色谱仪检测时，经常会遇见包括仪器计量性能在内的很多问题，从而无法满足JJ G705—2014《液相色谱仪检定规程》规定的计量指标。文章以JJG 705—2014《液相色谱仪检定规程》为依据详细分析了液相色谱仪的检定经验，并以紫外-可见光检测器为研究对象，结合实际工作对主要检定项目如：泵流量、柱温箱温度设定值误差和温度稳定性、基线噪声和基线漂移、最小检测浓度、整机性能（定性、定量重复性）的检定及检定中的注意事项谈了几点看法，希望能对液相色谱仪的检定和发展起到一定的促进作用。

1 液相色谱仪检定中的注意事项

1.1 泵流量检定经验分析

1.1.1 泵流量检定的步骤

启动仪器，流量结合规程要求进行设定，压力平稳后，在一定时间内将流动相进行收集，并通过秒表计时；而出口处的流动相使用清洗干净的称重容量瓶收集，并用天平进行称重，重复测量三次；此时可通过JJ G705—2014《液相色谱仪检定规程》中给出的公式，能够对流量稳定性SR、泵流量设定值误差SS进行计算[1]。

1.1.2 泵流量检定中的注意事项

1）首先需要保管好有关的试验材料，再进行数据收集。并最好用一个人同时进行计时和流动相的收集，这样可以最大程度地防止误差出现；同时由于甲醇有挥发性，必须要对实验的时间和速度进行良好把控。该人员还要按部就班地根据试验程序进行操作，从而使实验失误以及经济损失降低。在对流动相进行收集时需要将瓶口用封口胶密封，并且收集满一瓶后立即称重，并对收集的流动相进行换算时，需要注意保留到小数点以后的三位，并详细地整理实验记录，从而最大程度保证实验记录的真实可靠。

2）与设定值相比，若实际流速较低，则需要对过滤头、单向阀进行清洗或更换；一旦流速偏高，就要对压缩补偿调节和流速补偿进行检查，看是否有效。流量一旦出现不稳定状态，需要看是否有聚集气泡存在泵头内，有的话，将空阀打开，使泵高流速运行，确保气泡排出。

1.2 柱温箱检定中的注意事项

1）柱温箱温度设定值误差和温度稳定性检定中的注意事项。在柱温箱内固定数字温度计的探头，确保使其和色谱柱的位置相同，并选择35℃和45℃进行检定（也可按照用户使用的温度设置）。并参照液相色谱仪的使用说明书进行操作，在温度升高并稳定时，对数值进行记录同时进行计时，并间隔10 min记录一次数值，总计7次，并将平均值求出，通过JJ G705—2014《液相色谱仪检定规程》中给出的公式进行计算，柱温箱温度设定值误差△TS为平均值和设定值差，而柱温箱温度稳定性TC是7次读数中最小值、最大值差。

2）柱温箱理论塔板数检定中的注意事项。一般情况下，理论塔板数会因温升而加大，导致峰与峰间距离缩小，但需要确保不改变每个峰面积。因此，在峰距缩小时，会增加峰高，故：温度升高可以缩短保留时间；温度降低却相反，需要将保留时间进行延长[2]。

1.3 基线噪声和基线漂移检定中的注意事项

1.3.1 基线噪声和基线漂移检定的步骤

选择流动相为100%的甲醇，色谱柱选用C18色谱柱选，1.0 mL/min的流量，254 nm的紫外检测器的波长，并将检测梁敏度调制到最灵敏处，打开机器进行充分的预热，等到仪器稳定后对基线记录30 min，并对基线中噪声最大的峰-峰高对应的信号值进行选取，并对基线噪声进行计算，而基线漂移则选择30min内基线偏离起始点最大的信号值。

1.3.2 基线噪声和基线漂移检定中的注意事项

1）在对漂移和噪声进行检定时，避免检测器中有标准物质通过，并保证流动相只有100%的甲醇，必须保证仪器中除了甲醇不能有其他物质流动相。

2）当基线有毛刺和波动情况产生时，需要察看是否有空气进入了流动相中，形成气泡，并对氘灯稳定情况进行等待，再看仪器接地状态是否良好，如果有问题需要对氘灯进行更换。如果流动相中有杂质，并且发生大的漂移，需要对流动相、储液瓶、色谱柱、泵进行检查，看是否存在着污染物。

3）同时检定员一定要对单位换算严格考虑，不要出现单位上的差错而影响检定结论。当工作站显示屏纵坐标为mV，需要按照JJG 705—2014《液相色谱仪检定规程》中给出的公式换算出AU，也就是1 mV=1×10-3/AU[3]。

1.4 最小检测浓度检定中的注意事项

1）最小检测浓度检定中的注意事项。最小检测浓度的检定同上面的基线噪声采用相同的条件，在对最小检测浓度进行检定时，可将10-20μL的质量浓度为1.00×10-7g/mL的萘-甲醇溶液注入到进样系统中，并遵循一定的操作步骤对色谱图进行严格记录，并按照公式CL=2NdcV/20H计算出最小检测浓度。

2）应当注意，公式分母中的数字不是按照浓度进行的计算，而是根据20 μL的注射体积来完成计算的。

2 结语

液相色谱仪是理化领域常见的分析类计量器具，液相色谱仪在更多的理化分析领域被广泛的应用。而液相色谱仪的检定结果会受到很多因素影响，如进样量、检定人员对规程的理解程度、操作人员的熟练程度、标准物质的不确定度等等，这样会在一定程度上增加检定难度。所以，检定人员需要充分理解好JJG 705—2014《液相色谱仪检定规程》的内容，并在实践中进行充分总结，防止检定中出现问题。同时检定人员在对液相色谱仪进行检定和操作时，需要加倍重视其检定方法，若不严格执行检定方法，将最终导致液相色谱仪在使用出现很多不确定性因素，从而使检定结果受到影响，进而影响检定结论。因此保证液相色谱仪检定结果的准确和可靠具有非常重要的意义。