如何做好动物疫病监测样品的采集

2018-02-13王自强余润熹莫钻兰郭楚仪

畜牧兽医科技信息 2018年5期

王自强，梁勇，余润熹，莫钻兰，郭楚仪

（广东省东莞市动物疫病预防控制中心，广东东莞 523086)

开展动物疫病监测是防控重大动物疫病的基础工作，对畜牧业生产安全、百姓的肉食品安全和公共卫生具有重要的意义。通过长期、连续的动物疫病监测可以掌握动物疫病的分布、流行情况和免疫的效果，为制定科学、有效的防控措施提供依据。在动物疫病的监测，样品的质量和代表性具有很重要的作业，直接影响到检测结果的准确性，影响到监测结果的分析，因此做好动物疫病监测样品的采集是一项很重要的前提工作。

1 采样人员

动物监测样品的采集对采样人员有特定的要求，采样人员必须有严谨的工作态度、良好的专业知识、熟悉采样器具的使用、娴熟的采集技术及高度的责任心。

2 采样前的准备工作

2.1 采样器具

2.1.1 样品箱、保温箱、注射器、剪刀、镊子、解剖刀、酒精棉、碘酒棉和酒精灯等。

2.1.2 装样品的容器包括样品袋、平皿、离心管和小瓶等，根据采集不同的样品选择不同的容器，需要确保容器的密封，不会渗漏。

2.1.3 铝盒、已灭菌棉拭子、试管架、玻片、封口膜、瓶塞、冰袋、胶布、封条等。

2.2 记录采样样品的用品

签字笔、记号笔、样品标识签、采样登记表、畜禽耳标识别读器等。

2.3 样品保存液

根据采集不同的样品选择相应的样品保存液，如：PBS液、双抗、30%甘油盐水缓冲液、阿氏液(A1severs)、肉汤等。

2.4 个人防护用品

手套、口罩、护目镜、防护服、防护帽、水鞋等。

3 采样过程中的人员防护工作

3.1 采样过程中存在的安全隐患

3.1.1 动物保定过程中产生的危害，如咬伤、抓伤、踢伤等。

3.1.2 动物中存在病原体，在解剖或采样过程中，对采样人员造成感染，也可造成环境的污染和周围动物的威胁。

3.2 采样人员防护

采样人员根据采样的类型配备相应的防护服、护目镜、N95口罩或标准手术用口罩、可消毒的橡胶手套和可消毒的胶靴。

4 样品采集的原则

4.1 怀疑炭疽感染或病死动物应严禁解剖，如血液凝固不良、尸僵不全、天然孔流血的病、死动物，应耳尖采血涂片，首先排除炭疽。

4.2 采样人员进入养殖场时应该严格遵守养殖场消毒措施规定，防止通过采样将病原体带入养殖场，引起动物的感染和发病。采样完毕，离场必须更换隔离服和手套，并做好胶靴的消毒。发生疫情的养殖场必须更加严格做好生物安全防护措施。

4.3 根据不同的采样动物，选择适合的动物保定方法，既要保证采样人员的人身安全，又要保证采集样品的质量。

4.4 采样过程中要避免采集样品的交叉污染，尽量使用一次性采样器具，如果不能做好每份一个采样器具，要做好器具的消毒。

4.5 锐器物的处理。针头、注射器和刀片等锐器使用完毕后投入专用的锐器盒中进行高压灭菌处理，使用后的剪刀、解剖刀等放入专用的容器盒消毒灭菌。

4.6 病死动物要在隔离区或实验室解剖室解剖，解剖前在底下铺上塑料布，解剖或采样后动物尸体和废弃物必须通过深埋或焚烧等无害化处理，防止病原微生物的扩散。

4.7 采样完毕后，采样人员必须更衣消毒，将防护服、手套、口罩等放入专用的废弃物收集袋，进行消毒灭菌，并对采样的环境进行清洁消毒。

5 采样

样品采集要有代表性、合理性。根据地区实际情况，对采样点的布局、监测项目的制定、监测环节的选择进行调整，科学制定监测采样方案，根据监测内容需要采集样品。通过科学制定采样方案，才能获得有效的监测数据，才能综合评估动物疫病的分布和流行情况。

5.1 样品采集时间

对免疫效果评价的监测，正确采样时间评价疫苗的免疫效果具有很重要的意义。动物免疫疫苗后，需要一定的时间才能诱导机体产生抗体，并到达稳定的水平。一般情况下，高致病性禽流感、新城疫免疫21d后；猪O型口蹄疫、高致病性猪蓝耳病免疫28d后，才能采血进行免疫效果监测。在开展病原学监测时，要根据不同病种，选择不同时期，采集不同部位的组织样品进行检测。对病死的动物要尽快采样，一般不能超过6h，时间越久，则组织变性、腐败，影响检测结果。

5.2 血清样品的采集

5.2.1 采血过程中要做到无菌操作。采血前，在采血部位进行剪毛，用酒精棉球从里到外消毒采血部位。采血完毕后，用干棉球按压采血部位止血。采血应用一次性灭菌的注射器。在分离血清的过程中可以采用自然析出血清的方式，也可以采用离心分离出血清，在分离出血清之前要避免振荡造成的溶血。

5.2.2 采集的全血可以在室温下斜放2～4h，不能暴晒，等血液凝固自然析出血清后，倒出血清或用无菌剥离针剥离血凝块。全血也可以通过离心分离出血清，1500～2000转/min，离心5min，分离血清。将分离出的血清，装入灭菌离心管中，盖好盖子，封口，做好标记，4℃保存，长时间保存需放置-20℃保存。

5.3 拭子样品的采集

5.3.1 家禽/野禽咽喉拭子的采集将棉签插入家禽喉头口及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌液，将样品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折断，加上管盖，检查EP管的密封性，确定不渗漏后用防水记号笔做好标记编号。

5.3.2 家禽/野禽泄殖腔拭子的采集将棉签插入泄殖腔转2～3圈并沾取少量粪便，将样品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折断，加上管盖，检查EP管的密封性，确定不渗漏后用防水记号笔做好标记编号。

5.3.3 猪/马鼻拭子的采集

将棉签一端插入猪鼻腔内2～3cm旋转2～3圈沾上分泌液，将样品端放入盛有1.5～2mL加有抗生素的PBS的EP管中剪下或折断，加上管盖，检查EP管的密封性，确定不渗漏后用防水记号笔做好标记编号。

5.4 组织样品的采集

扁桃体、肝脏、脾脏、淋巴结等组织的采集，应采用一次性的采样器具或新消毒的器具，每份组织应单独放入密封袋内，密封袋上需注明采样编号、样品名称、采样人和采样日期等信息。采样过程中要防止每份样品的交叉污染，每采集一份样品更换一副采样工具与手套。